İmmunoloji tədqiqatdakı splenositlər: növlər və təcrid, donma, ərime addımlar

Açar sözlər:Splenocytes (SPLS); Cynomolgus meymun splenositlər; Rhesus meymun splenositlər; İt splenositləri; Canine splenositlər; Siçovul splenositləri; Siçan splenositləri; Siçan splenositləri; Dovşan splenositlər; Splenocites izolyasiyası; Donan splenositlər; Əriməsi sıçrayan splenositlər

İPhase məhsulu

Splenocytes (SPLS)Dalaqdan təcrid olunmuş immun hüceyrələrinin heterojen əhalisi, qan süzgəcində, immunitet cavablarını toplamaq və homeostazları qorumaq üçün həyati bir orqanı təcrid olunmuşdur. Bu hüceyrələrə lenfositlər (t hüceyrələri, b hüceyrələri), makrofizlər, dendritik hüceyrələr və təbii qatil (NK) hüceyrələri, uyğunlaşma və fitri toxunulmazlığın tənqidi rolları oynayır. Splenositlər, immunitet funksiyasını, peyvənd inkişafı, otoimmün xəstəlikləri və xərçəng immunoterapiyasını öyrənmək üçün əvvəlcədən və tərcümə tədqiqatlarında geniş istifadə olunur.

Splenositlərin rolu və tərkibi (SPL)

Spleen içərisində, fərqli bölgələrdə splenositlər, qanı süzən və qoca qırmızı qan hüceyrələrini, immun cavablarının başladığı ağ pulpa və ağ pulpa təkrar emal edən qırmızı pulpa. Ağ Pulpa t hüceyrə zonalarına və b hüceyrə follikullarına təşkil edilir, antigen arasındakı qarşılıqlı əlaqələri asanlaşdırır - hüceyrələr və limfositləri təqdim edir. Bu unikal memarlıq, elispot, axın sitometriyası və qarışıq limfosit reaksiyaları kimi immunoloji təhlillərdə güclü bir vasitə (spls) edir.

Növlər - Xüsusi Splenositlər (SPLS)

-Cynomolgus Monkey Splenocytes:Cynomolgus meymun splenositləri, prinikal tədqiqatlarda istifadə olunur, çünki insan immun cavablarını daha yaxından təqlid edirlər, cynoMolgus meymun splenositləri hazırlayırlar.

-Rhesus Monkey Splenocytes:Rhesus Monkey Splenositlər də insanlara yaxın immunoloji oxşarlıqları üçün qiymətləndirilir. Rhesus Monkey Splenosites istifadə edərək iş heyvanları və klinik tətbiqlər arasındakı boşluğu körpüdən kömək edir.

-Köpək Splenositlər / Canine Splenositlər:Baytarlıq tədqiqatlarında, köpək splenositləri (və ya canine splenocites), caninesdəki immun pozğunluqlarını öyrənmək və insan immun cavabları ilə müqayisə aparmaq üçün istifadə olunur.

-Dovşan splenositlər: Dovşan splenositləri antikor istehsalı və peyvəndinin inkişafı ilə bağlı işlərdə vacibdir. Dovşan Splenocytes, siçan splenositləri və ya siçovul splenositlərindən fərqli ola biləcək təfərrüatları aşkar etməyə kömək edir.

-Siçan splenositlər / siçan splenositlər:Siçan splenositləri immunologiyada ən çox öyrənilən splenositlər (spts) biridir. Siçanlardan təcrid olunmuş splenositlər üçün protokollar yaxşı qurulmuşdur və həm siçan splenositləri, həm də siçan splenositləri axın sitometriyası, Elispot və digər funksional təhlillər üçün istifadə olunur.

-Siçovul:Rat Splenositlər immunotoksikologiya və peyvənd işləri üçün tamamlayıcı bir model təmin edir. Rat Splenositlər, tez-tez siçan splenositləri ilə müqayisə olunur, kəsişmələrin fərqlərini başa düşmək üçün.

Splenosites izolyasiyası

Splenosites izolyasiyasıaxın sitometriyası, sitokin istehsalları və ya qarışıq lenfosit reaksiyaları kimi müxtəlif tədqiqat tətbiqlərində istifadə ediləcək, dalaqdan immun hüceyrələri çıxarılması prosesidir.

Dalaq aseptik şəraitdə, təcrid vəziyyətində yer və RPMI 1640 mühiti olan steril boruya köçürüldü. Leukosit təbəqəsi sentrifugationdan sonra diqqətlə toplanmışdır. Hüceyrələr RPMI 1640 orta, sentrifuged və fövqəladə atılanlarla yuyuldu. Bu yuyulma addımı 1 - 2 dəfə təkrarlanmış hüceyrələrin daha çox təcrübələr üçün istifadə olunmasından 2 dəfə təkrarlandı.

Dondurucu splenositlər

Dondurucu splenositlərgələcək istifadə üçün hüceyrələri qorumaq üçün vacib bir addımdır. Cryopreservation tədqiqatçılara səmərəli və ya funksionallığını pozmadan uzadılmış dövrlər üçün splenositləri saxlamağa imkan verir.

Təcrübəli addımdan quyu-sentrifuguged hüceyrə asqısının fövqəladə atıldı və hüceyrə konsentrasiyası dondurma mühitində seyreltildi. Hər bir donma borusuna bir alikot əlavə edin və hüceyrələrin dayandırılmasında qalmasını təmin edərək dondurucu qaba köçürün. Dondurucu qabları tez bir zamanda 80 ° C dondurucu. Transfer (və ya maye azot tank) üçün 150 ° C dondurucu konteyner (və ya maye azot tank).

Əriməsi sıçrayan splenositlər

Əriməsi sıçrayan splenositlərKriopreservasyondan sonra yüksək hüceyrə canlılığını və funksionallığını təmin etmək üçün diqqətlə edilməlidir. Zədələnmə prosesi DMSO və Buz Kristal Formalarının zərərli təsirlərini minimuma endirmək üçün adətən sürətlidir.

Kriptublar 37 ° C su hamamına köçürülür və yalnız incə buz kristalları borularda qalana qədər ərimişdir. Dondurulmuş boruya 0.5 - hüceyrə mədəniyyətinə 1ml, dondurulmuş boruya 1ml, süspansiyonu hüceyrə mədəniyyəti mühiti ilə doldurulmuş 15ml boruya köçürün və köçürün. Centrifuguge, fövqəladə çıxarın və hüceyrə tənzimləməsini boşaltmaq üçün boruya vurun. 1ml hüceyrə mədəniyyəti orta, zərbə və bir pipetlə yenidən başladın, 15 ml həcmdə orta əlavə edin. Centrifuge, De - Supernatize, 1ml hüceyrə mədəniyyəti orta əlavə edin, gözlənilən hüceyrə konsentrasiyasına görə mühit əlavə edir. Hüceyrələri bir CO2 inkubatoruna qoyun və qapaqdakı kiçik bir boşluqla 1h inkubasiya edin. İnkubasiyanın sonunda yığın və yığılmış hüceyrə zibilinin çökməsinə imkan vermək üçün 1 dəqiqə üçün buraxın. Yağışsız hüceyrə dayandırılması diqqətlə yeni 15ml boruya köçürüldü. Hüceyrələr hüceyrə fəaliyyətini təyin etmək üçün sayıldı.

Rəy

İmmun cavablarında müxtəlif tərkibi və əsas rolu olan splenositlər, immunoloji tədqiqatlarda əvəzolunmaz vasitələrdir. Dovşan və itlər kimi gəmiricilərdən, primatlar və ya digər növlərdən istifadə edib, immunitet funksiyasında, xəstəlik mexanizmlərində, peyvənd inkişafı və xərçəng immunoterapiyasında kritik tədqiqatları asanlaşdırır. İzolyasiya, dondurma və ərimənin prosesləri, bütövlüyünü və canlılığını qorumaq üçün vacibdir, tədqiqatçılara müxtəlif modellər arasında mobil dinamikanı araşdırmağa imkan verir. İmmunologiyanın anlayışını dərinləşdirdiyimiz üçün, splenositlərin istifadəsi, hər iki insan və baytarlıq tibbində irəliləyişlərin təmin edilməsi, prinikal tədqiqatlar və klinik tətbiqlər arasındakı boşluğu aradan qaldırmağa davam edəcəkdir.