Дынаміка звязвання бялку ў плазме: раўнаважны дыяліз і ўльтрафільтрацыйныя метады і прымяненне ў DDIS

Ключавыя словы: Раўнаважны дыяліз, ультрафільтрацыя, звязванне бялку ў плазме (PPB), хуткасць звязвання бялку ў плазме (BRPP), дыяліз раўнавагі, мембрана дыялізу раўнавагі, хуткае раўнавагу дыяліз (чырвоны), наркотыкі

Уводзіны

У фармакокінетычных даследаваннях, Звязванне бялку ў плазме (PPB) і Хуткасць звязвання бялку ў плазме (BRPP) служыць галоўным дэтэрмінантам фармакалагічнага паводзін злучэння, непасрэдна ўплываючы на ​​яго паглынанне, распаўсюджванне, абмен рэчываў і вывядзенне (вылучэнне (Адмедаць) Уласцівасці. Злучэнні, якія выстаўляюць высокіяЗвязванне бялку ў плазме (PPB)Прадэманструйце абмежаваную даступнасць бясплатнай фракцыі, тым самым мадулюючы тэрапеўтычную эфектыўнасць і бяспеку. Адначасова BRPP забяспечвае кінэтычнае дазвол лекі - бялковыя ўзаемадзеянні, высвятляючы часовую дынаміку звязвання. Каб колькасна ацаніць гэтыя параметры з дакладнасцю, метадалогіі, такія як Раўнаважны дыяліз і Ультрафільтрацыя рэгулярна выкарыстоўваюцца, асабліва ў ацэнцы лекі - Узаемадзеянне з наркотыкамі (DDI) і прасоўванне трубаправодаў па распрацоўцы наркотыкаў.

Раўнаважны дыяліз (рэд)

Раўнаважны дыяліз - гэта класічная біяхімічная методыка вымярэння PPB і BRPP. Араўнаважнае дыялізнае прыладавыкарыстоўваюць дзве камеры, падзеленыя паўкольнымі раўнаважная мембрана дыялізу: Адзін бок змяшчае сумесь макрамалекул - ліганд, а другі - толькі буфер. З цягам часу свабодна дыфузныя ліганды перамяшчаюцца па мембране раўнавагі дыялізу, пакуль іх канцэнтрацыя не будзе роўная з абодвух бакоў (раўнавагі), у той час як ліганды, звязаныя з бялком, застаюцца на баку макрамалекулы, таму што яны не могуць прайсці праз пары мембраны. Вымяраючы канцэнтрацыю ліганда на баку буфера пасля дасягнення раўнавагі, даследчыкі могуць вызначыць свабодную долю ліганда і, у параўнанні з агульным лігандам, вылічыць сродстваў звязвання, ёмістасць або бясплатны ўзровень лекаў у біялагічных узорах. Перавага раўнавагі дыяліз заключаецца ў тым, што ён вельмі дакладны, але прыйшоў час - спажыванне. Звычайнае раўнаважнае дыяліз прыбора патрабуе 3 - 48 гадзін, каб ураўнаважыць.

Хуткі раўнаважны дыяліз (чырвоны)

Хуткі раўнаважны дыяліз(Чырвоны)гэта высокапрапускная адаптацыя класічнага раўнаважнага дыялізу, прызначанага для паскарэння і ўпарадкавання вымярэння не звязанай (бясплатнай) дробнай малекул - тыпіва лекаў - у складаных біялагічных матрыцах. Пры хуткім раўнаважным дыялізе, узоры (напрыклад, у плазме, якія змяшчаюць лекавыя бялковыя комплексы) і буфер, змяшчаюцца ў суседнія камеры шматпавярховай пласціны, падзеленай паўабаротай дыялізавай мембраны раўнавагі; Аптымізаваная плошча паверхні мембраны, дызайн пласцін і кантраляванае ўзбуджэнне дазваляюць дасягнуць раўнавагі ўсяго за некалькі гадзін, а не на працягу ночы. Паколькі толькі бясплатны прэпарат можа перасякаць мембрану, колькасна вызначаючы яго канцэнтрацыю ў буфернай камеры пасля раўнавагі непасрэдна дае не звязаную фракцыю. Чырвонае прылада хутчэй, чым традыцыйныя прылады дыялізу раўнавагі, не прыносячы шкоды дакладнасці, што робіць чырвоны ідэальным для паралельнага абследавання ADME.

Ультрафільтрацыя

Ультрафільтрацыя - гэта хуткая тэхніка падзелу на аснове мембраны, якая выкарыстоўваецца для выяўлення свабодных (не звязаных) малых малекул - такія, як лекі, метабаліты або ліганды - ад вялікіх макрамалекул, як бялкі ў растворы. Узор змяшчаецца над паўколавай мембранай, памер пары якой захоўвае бялкі і бялковыя і лігандныя комплексы, дазваляючы свабодныя малекулы і растваральнік праходзіць праз прыкладнае ціск або цэнтрабежную сілу. Па меры таго, як фільтрат збіраецца з іншага боку, ён змяшчае толькі невядзельную долю аналіту; Вымяраючы сваю канцэнтрацыю, даследчыкі могуць непасрэдна вызначыць бясплатны ўзровень лекаў або ліганда. Гэты падыход да высокай прапускной здольнасці шырока выкарыстоўваецца ў фармакокінетычных і ADME даследаваннях для ацэнкі звязвання бялку без шырокіх часоў інкубацыі.

Наступствы ў наркотыках - Узаемадзеянне з наркотыкамі (DDIS)

У ўзаемадзеяннях з наркотыкамі і наркотыкамі два агенты, якія маюць аднолькавыя сайты звязвання, могуць канкурэнтаздольна выцесніць адзін аднаго, часова павышаючы нязвязаную долю зрушанага прэпарата; Гэты зрух можа ўзмацніць сваю эфектыўнасць або таксічнасць і змяніць яго аб'ём размеркавання і афармлення, пакуль новая раўнавага не будзе адноўлена. Клінічна лекі з высокім утрыманнем бялку ў плазме (PPB) і высокай хуткасцю звязвання бялку ў плазме (BRPP) найбольш схільныя да такіх перамяшчэнняў, таму сумеснае ўвядзенне патрабуе ўважлівага маніторынгу і, пры неабходнасці, рэгуляванне дозы, каб пазбегнуць нечаканых змяненняў уздзеяння наркотыкаў.

Выснова

Разуменне звязвання бялку ў плазме (PPB) і хуткасць звязвання бялку ў плазме (BRPP) з'яўляецца галоўным у фармакокінетыцы, паколькі гэтыя параметры крытычна ўплываюць на паглынанне, распаўсюджванне і тэрапеўтычную эфектыўнасць. Такія метады, як дыяліз раўнавагі (рэд), хуткі раўнаважны дыяліз (чырвоны) і ультрафільтрацыя забяспечваюць неабходныя інструменты для колькаснай ацэнкі бясплатных фракцый наркотыкаў і кінетыкі звязвання. У той час як ED застаецца залатым стандартам для дакладнасці, Red прапануе высокую - прапускную здольнасць, якая ўраўнаважвае хуткасць і дакладнасць, а UltraFiltration забяспечвае хуткі скрынінг, нягледзячы на ​​патэнцыйныя абмежаванні ў дакладнасці. Гэтыя метады незаменныя пры ацэнцы ўзаемадзеяння з наркотыкамі (DDIS), дзе канкурэнтнае зрушэнне высока бялку - звязаныя прэпараты могуць змяніць бясплатны ўзровень лекаў, ствараючы рызыку таксічнасці або змененай эфектыўнасці. Па меры прасоўвання наркотыкаў, выбар адпаведных метадалогій для ацэнкі PPB і BRPP забяспечвае больш бяспечныя тэрапеўтычныя вынікі, кіруючы карэкціроўкай дозы і змякчаючы рызыкі ў клінічнай практыцы. У канчатковым рахунку, інтэграцыя гэтых метадаў у фармакокінетычныя даследаванні павышае нашу здольнасць прадказаць і кіраваць паводзінамі наркотыкаў, падкрэсліваючы іх жыццёва важную ролю ў аптымізацыі распрацоўкі наркотыкаў і догляду за пацыентамі.