Сперэноцыты ў імуналагічных даследаваннях: у розных відах і ізаляцыі, замарожванні, адтаванні крокаў

Ключавыя словы:Спленоциты (SPLS); Цыномолгус -малпы -спленоциты; Рэзус -малпы -спленоциты; Сабакі -спленоциты; Сабачыя спленоцыты; Spienocytes пацукоў; Мышы спленоциты; Мышы спленоциты; Трусіныя спленоцыты; Вылучэнне спленоцитов; Замарожванне спленоцитов; Адтаванне спленоцитов

IPHASE PRODUCT

Спленоциты (SPLS)з'яўляюцца неаднастайнай папуляцыяй імунных клетак, выдзеленых з селязёнкі, жыццёва важнага органа, які ўдзельнічае ў фільтрацыі крыві, мацавання імунных рэакцый і падтрымання гамеастазу. Гэтыя клеткі ўключаюць лімфацыты (Т -клеткі, В -клеткі), макрафагі, дендрытныя клеткі і натуральныя клеткі -забойцы (NK), якія гуляюць важную ролю ў адаптыўнай і прыроджанай імунітэце. Сперэноцыты шырока выкарыстоўваюцца ў даклінічных і трансляцыйных даследаваннях для вывучэння імуннай функцыі, развіцця вакцыны, аутоіммунных захворванняў і імунатэрапіі рака.

Роля і склад спленоцитов (SPLS)

У селязёнцы спленоциты знаходзяцца ў розных рэгіёнах: чырвоная мякаць, якая фільтруе кроў і перапрацоўвае старыя эрытрацыты і белую мякаць, дзе пачынаюцца імунныя рэакцыі. Белая мякаць арганізуецца ў Т -клеткавыя зоны і В -клеткавыя фалікулы, палягчаючы ўзаемадзеянне паміж антыгенам - прадстаўленымі клеткамі і лімфацытамі. Гэтая унікальная архітэктура робіць спленоциты (SPLS) магутным інструментам у імуналагічных аналізах, такіх як ELISPOT, праточная цытаметрыя і змешаныя рэакцыі лімфацытаў.

Віды - Спецыфічныя спленоциты (SPLS)

-Цыномолгус -малпы -спленоциты:Спеленоциты Cynomolgus малпы выкарыстоўваюцца ў даклінічных даследаваннях, паколькі яны больш цесна імітуюць імунныя рэакцыі чалавека, што робіць сіномолгус -спленоциты малпы ідэальна падыходзіць для трансляцыйных даследаванняў.

-Рэзус -малпы -спленоциты:Сперэноцыты -рэзус -малпы аналагічна ацэньваюцца за іх цеснае імуналагічнае падабенства з людзьмі. Даследаванні з выкарыстаннем рэзус -малпы -спленоцитов дапамагаюць пераадолець разрыў паміж мадэлямі жывёл і клінічнымі прыкладаннямі.

-Сабакі -спленоциты / сабачы спленоцыты:У ветэрынарных даследаваннях для вывучэння імунных расстройстваў у іклах і для правядзення параўнанняў з імуннымі рэакцыямі чалавека выкарыстоўваюцца сабачыя спленоциты (альбо сабачыя спленоциты).

-Трусіныя спленоцыты: Трус -спленоциты важныя ў даследаваннях па вытворчасці антыцелаў і развіцці вакцыны. Спертленоциты труса дапамагаюць раскрываць дэталі, якія могуць адрознівацца ад мышыных спленоцытаў або спленоцытаў пацукоў.

-Спленоциты мышы / мышэй:Мышыныя спленоциты - адзін з найбольш часта вывучаных спленоцитов (SPL) у імуналогіі. Пратаколы для ізаляцыі спленоцитов з мышэй добра ўсталяваны, і абодва мышыныя спленоциты і спленоциты мышэй выкарыстоўваюцца для праточнай цытаметрыі, ELISPOT і іншых функцыянальных аналізаў.

-Спленоциты пацукоў:Сперэноцыты пацукоў забяспечваюць дадатковую мадэль для імунатоксікалогіі і даследаванняў вакцыны. Спеленоциты пацукоў часта параўноўваюць з мышынымі спленоцытамі для разумення адрозненняў міжвідавых.

Вылучэнне спленоцитов

Вылучэнне спленоцитовгэта працэс здабывання імунных клетак з селязёнкі, які будзе выкарыстоўвацца ў розных даследчых прыкладаннях, такіх як праточная цытаметрыя, аналіты па вытворчасці цітокіны або змешаныя рэакцыі лімфацытаў.

Селязёнку выдалялі ў асептычных умовах, здрабняецца ў ізаляцыйным растворы і пераносілі ў стэрыльную трубку, якая змяшчае асяроддзе RPMI 1640. Лейкацытарны пласт старанна збіраюць пасля цэнтрафугавання. Клеткі прамывалі асяроддзем RPMI 1640, цэнтрыфугавалі і выкінулі супернатант. Гэты этап мыцця паўтараўся за 1 - 2 разы да таго, як ізаляваныя клеткі выкарыстоўваліся для далейшых эксперыментаў.

Замарожванне спленоцитов

Замарожванне спленоцитовз'яўляецца важным крокам для захавання клетак для далейшага выкарыстання. КРЫПЕЗАВАННЕ дазваляе даследчыкам захоўваць спленоциты на працягу доўгага перыяду, не парушаючы іх жыццяздольнасці і функцыянальнасці.

Супернатант свідравіны цэнтрафугаванай клеткавай завісі ад этапу ізаляцыі выкідваецца, а канцэнтрацыя клетак разводзілі ў замярзавальнай асяроддзі. Дадайце аликвоту ў кожную замарожванне трубкі і перакладзеце ў замярзаючы кантэйнер, забяспечваючы, каб клеткі заставаліся ў завісі. Хутка замарозіце замарожванне кантэйнераў у маразільнай камеры - 80 ° C. Перадача ў - 150 ° C -маразільнай кантэйнеры (або вадкага азотнага бака) на працягу доўгага - тэрміновага захоўвання.

Адтаванне спленоцитов

Адтаванне спленоцитовТрэба рабіць асцярожна, каб забяспечыць высокую жыццяздольнасць і функцыянальнасць клетак пасля криоконсервации. Працэс адтавання звычайна хуткі, каб мінімізаваць разбуральныя эфекты ўтварэння DMSO і крышталя лёду.

Крыятубы пераносяцца на вадзяную лазню на 37 ° С і адтаюць, пакуль у трубах застаюцца толькі тонкавыя крышталі лёду. Дадайце 0,5 - 1 мл клеткавай культуры асяроддзя ў замарожаную трубку, рэсуспендуйце і перанясіце падвеску ў 15 мл трубкі, запоўненую клеткавай культурай. Цэнтрафугу, выдаліце ​​супернатант і націсніце трубку, каб аслабіць кампазіцыю клеткі. Дадайце 1 мл клеткавай культуры, выдзімайце і аднаўляйце з піпеткай, дадайце асяроддзе ў аб'ём 15 мл. Цэнтрафугу, de - Супернатызацыя, дадайце 1 мл асяроддзя клеткавай культуры, дадаючы асяроддзе ў залежнасці ад чаканай канцэнтрацыі клетак. Змесціце клеткі ў інкубатар CO2 і вытрымлівайце на працягу 1H з невялікім зазорам у вечка. У канцы інкубацыі рэсуспендуйце і пакіньце на 1 мін, каб дазволіць агрэгаваным клеткавым смеццем абломаць асадак. Клеткавую завісь без ападкаў старанна пераносілі ў новую 15 мл трубкі. Клеткі лічыліся для вызначэння актыўнасці клетак.

Выснова

Сперэноцыты, якія маюць разнастайную кампазіцыю і асноўную ролю ў імунных рэакцыях, з'яўляюцца неацэннымі інструментамі ў імуналагічных даследаваннях. Няхай гэта будзе атрымана ад грызуноў, прыматаў ці іншых відаў, такіх як трусы і сабакі, спленоциты, палягчаюць крытычныя даследаванні ў галіне імуннай функцыі, механізмы захворвання, развіццё вакцыны і імунатэрапію рака. Працэсы ізаляцыі, замарожвання і адтавання маюць важнае значэнне для захавання іх цэласнасці і жыццяздольнасці, што дазваляе даследчыкам даследаваць клеткавую дынаміку ў розных мадэлях. Па меры таго, як наша разуменне імуналогіі паглыбляецца, выкарыстанне спленоцитов будзе па -ранейшаму быць важным у пераадоленні разрыву паміж даклінічнымі даследаваннямі і клінічнымі прымяненнямі, забяспечваючы прагрэс як у чалавечай, так і ў ветэрынарнай медыцыне.