Параўнальны аналіз мононуклеарных клетак перыферычнай крыві (PBMC): у розных відах прымянення ў імуналогіі і тэрапеўтычных даследаваннях

IФазавыя вырабы

Мононуклеарныя клеткі перыферычнай крыві (PBMC)

Мононуклеарныя клеткі перыферычнай крыві (PBMC)з'яўляюцца неаднастайнай папуляцыяй імунных клетак, якія знаходзяцца ў перыферычнай крыві, якая характарызуецца адным круглым ядром. Яны ўключаюць лімфацыты - такія, як Т -клеткі, В -клеткі і натуральныя клеткі -забойцы (NK) - і манацыты, выключаючы пры гэтым гранулоцыты (напрыклад, нейтрофілы) і эрытрацытаў. PBMC звычайна вылучаюць з дапамогай цэнтрафугавання градыенту шчыльнасці з выкарыстаннем носьбітаў, такіх як Ficoll, які аддзяляе клеткі на аснове плавучасці. Гэты інвазіўны метад дазваляе лёгка атрымаць доступ да крытычных імунных кампанентаў, робячы PBMC неацэннымі ў даследаваннях імуналогіі і тэрапеўтычнага развіцця.

PBMC Isoвыдаленне

Памер, марфалогія і спецыфічная гравітацыя адзінкавых ядзерных клетак адрозніваюцца ад іншых клетак у перыферычнай крыві. Удзельная гравітацыя эрытрацытаў і паліморфануклеарных лейкацытаў перавышае 1,080, што ў асобных ядзерных клетках складае каля 1,070, а трамбацыты - каля 1,030. Такім чынам, розніца паміж удзельнай гравітацыяй розных клетак крыві і асобнымі ядзернымі клеткамі можа быць выкарыстана для аддзялення розных клетак крыві ад асобных нуклеатызаваных клетак. Цэнтрафугаванне градыенту шчыльнасці FICOLL з'яўляецца найбольш часта выкарыстоўваным метадам дляІзаляцыя PBMCі ачышчэнне. Ficoll - гэта цукроза -шматмер, нейтральны, з сярэдняй малекулярнай масай 400 000, і калі шчыльнасць складае 1,2 г/мл, яна не перавышае нармальнага фізіялагічнага асматычнага ціску і не праходзіць праз біялагічныя мембраны, таму ён звычайна выкарыстоўваецца для PBMC. Таму ён часта выкарыстоўваецца ў якасці раствора падзелу для падзелу PBMC. Эрытрацыты і гранулоцыты маюць вялікую спецыфічную гравітацыю і тануць на дно трубкі пасля цэнтрафугавання; Лімфацыты і манацыты маюць пэўную гравітацыю менш або роўная ўдзельнай гравітацыяй раствора аддзялення, а плавае на паверхні раствора аддзялення пасля цэнтрафугавання, і невялікая частка клетак таксама можа быць падвешана ў растворы падзелу. Аспіраваўшы клеткі пласта белай мембраны на паверхні вадкасці раствора падзелу і мыць іх належным чынам, аднаразовыя ядзерныя клеткі з высокай чысцінёй, гэта значыць, PBMC, могуць быць выдзелены з перыферычнай крыві.

PBMC ў розных відах

У не - чалавечых прыматаў, у прыватнасці, малпы Cynomolgus і малпы рэзуса, даследаванне PBMC высока ацэньваецца з -за фізіялагічных падабенстваў, якімі яны падзяляюць з людзьмі. Даследаванне з выкарыстаннемCynomolgus малпа PBMCіРэзус малпа PBMCдазволілі дэталёвыя даследаванні імунных механізмаў, і шматлікія даследаванні, якія выкарыстоўваюць PBMC малпы, падкрэслілі свой трансляцыйны патэнцыял для імунатэрапіі чалавека. Выкарыстанне PBMC малпы ў тэставанні вакцыны, абследаванні наркотыкаў і імуннай мадуляцыі стала краевугольным каменем як у даклінічных, так і ў клінічных даследаваннях.

Сапраўды гэтак жа, даследаванні, звязаныя з удзеламсабака PBMCзначна садзейнічалі ветэрынарнай імуналогіі. Даследаванні з выкарыстаннем сабакі PBMC асвятлілі шляхі імуннай рэакцыі ў іклых, у той час як даследаванні з удзеламсабачы PBMCтаксама вылучыў паралелі з імуннай функцыяй чалавека. У галіне зоонозных захворванняў як PBMC Dog, так і сабачымі даследаваннямі PBMC прадаставілі крытычныя дадзеныя пра ўзаемадзеянне патагенаў - узаемадзеянне гаспадара, падкрэсліваючы ролю гэтых клетак у назіранні за хваробамі і развіцці лячэння. Паўторнае выкарыстанне сабакі PBMC і сабачы PBMC у параўнальных даследаваннях падкрэслівае іх важнасць як мадэльную сістэму.

Мадэлі грызуноў, якія ўключаюцьпацук PBMCіМышы PBMC, традыцыйна былі на пярэднім краі імуналагічных даследаванняў. Даследаванні з выкарыстаннем PBMC пацукоў прапануюць дэталёвую перспектыву імуннай рэгуляцыі ў хранічных запаленчых станах, а шырокае выкарыстанне мышыных PBMC мае вырашальнае значэнне для генетычных і механістычных даследаванняў аутоімунітэту і інфекцыі. Даследчыкі працягваюць разлічваць як на PBMC пацукоў, так і на мышы PBMC, каб даследаваць складаныя імуналагічныя працэсы, робячы гэтыя мадэлі неабходнымі. Акрамя таго, інтэграцыяХамяк PBMCУ эксперыментальных установах дадалі яшчэ адно вымярэнне для імуналагічных даследаванняў, паколькі даследаванні PBMC Hamster часта даюць новыя ўяўленні пра вірусны патагенез і стратэгіі ўхілення ад імунітэту. Калі хамяк PBMC дапаўняе даследаванне PBMC пацукоў і мышы PBMC, мадэлі грызуноў у сукупнасці ўтвараюць усёабдымны інструментар для імунных даследаванняў.

Вялікія жывёльныя мадэлі таксама ўзбагацілі поле, зMinipig PBMCПрайграванне асноўнай ролі ў пераадоленні даклінічных даследаванняў і клінічных прыкладанняў. Выкарыстанне Minipig PBMC аказалася карысным у даследаваннях рэгенератыўнай медыцыны і трансплантацыі органаў, дзе Minipig PBMC забяспечвае фізіялагічна значную платформу для праверкі новых метадаў лячэння. Больш за тое, расследаванні, якія выкарыстоўваюцьтрус PBMCмаюць важную ролю ў вытворчасці антыцелаў і вывучэнне аутоіммунных парушэнняў, прычым даследаванні PBMC труса паслядоўна даюць каштоўныя імуналагічныя разуменні. Выкарыстоўваючы Minipig PBMC і Prabbit PBMC у тандэме, даследчыкі могуць ацаніць эфектыўнасць і бяспеку новых імунатэрапіі ў сістэмах, якія цесна імітуюць фізіялогію чалавека.

Каціны іCat PBMCДаследаванні выразалі сваю нішу пры даследаванні рэтравірусных інфекцый і імуннай дысфункцыі. Даследаванні, якія выкарыстоўваюцькаціны PBMCПрасунулі наша разуменне кацінай імуннай сістэмы, у той час як даследаванні з CAT PBMC прапанавалі акно ў імунныя рэакцыі, звязаныя з віруснымі інфекцыямі. Як каціныя PBMC, так і CAT PBMC былі неаднаразова выдзелены ў даследаваннях, якія вывучаюць паралелі паміж каціным і вірусам імунадэфіцыту чалавека, што даказвае, што неаднаразовае выкарыстанне кацінага PBMC і CAT PBMC мае вырашальнае значэнне для распрацоўкі эфектыўных дыягнастычных і тэрапеўтычных стратэгій.

Птушыны імуналогія не засталася ззаду, зКурыца PBMCіDuck PBMCДаследаванні, якія даюць крытычнае разуменне імунных механізмаў птушак. Даследаванні з выкарыстаннем курынага PBMC выявілі унікальныя аспекты імуннай рэакцыі птушак, у той час як даследаванні з удзелам Duck PBMC яшчэ больш узбагацілі наша разуменне ўстойлівасці да патагенаў у відах птушы. Неаднаразовае выкарыстанне курынага PBMC і Duck PBMC у даследаваннях, якія вывучаюць вірусныя інфекцыі і эфектыўнасць вакцыны, ілюструе іх значэнне ў кантролі захворваннямі, якія ўплываюць як на жывёл, так і чалавека.
Акрамя таго, даследаванні з выкарыстаннемМарская свінка PBMCбылі галоўнымі для даследаванняў туберкулёзу і вакцыны, дзе Гвінея Свіння PBMC нязменна служаць надзейным паказчыкам імуннага адказу. Паралельна, расследаванні, звязаныя зAlpaca PBMCіВярблюд PBMCпрыцягнулі ўвагу з -за унікальных структур антыцелаў, якія прысутнічаюць у гэтых відах. Даследаванні, звязаныя з Alpaca PBMC і Camel PBMC, прадставілі новыя тэрапеўтычныя прымяненне, і Alpaca PBMC і Camel PBMC неаднаразова выкарыстоўваюцца для вывучэння інавацыйных тэхналогій нанабаты і імунітэту - лячэння.

Укладбуйной рагатай жывёлы PBMCіавечкі PBMCДля сельскагаспадарчай імуналогіі таксама былі выдатныя. Даследаванні з буйной рагатай жывёлы PBMC далі глыбокае ўяўленне аб мастыце буйной рагатай жывёлы і рэспіраторных захворваннях, а шырокія даследаванні з выкарыстаннем буйной рагатай жывёлы непасрэдна паведамілі пра стратэгіі паляпшэння здароўя буйной рагатай жывёлы. У роўнай ступені паўторнае выкарыстанне авечак PBMC пры імуналагічных даследаваннях узбагаціла наша разуменне імунных рэакцый на руміючыя, а авечак PBMC працягвае кіраваць распрацоўкай эфектыўных вакцын і пратаколаў па барацьбе з хваробамі.

Роля ў імунных даследаваннях

PBMC можа імітаваць асяроддзе in vivo і забяспечыць эфектыўную мадэль in vitro для распрацоўкі наркотыкаў. Назіраючы за ўздзеяннем наркотыкаў на праліферацыю PBMC, апоптоз і цытотоксичность, эфектыўнасць і бяспеку лекаў можна першапачаткова. Вывучаючы ўплыў наркотыкаў на мэты дзеянняў і сігнальных шляхоў PBMC, гэта дапамагае выявіць новыя мэты дзеяння наркотыкаў, і гэтыя высновы могуць даць новыя ідэі і ўказанні па распрацоўцы наркотыкаў.

Прымяненне ў антыцелах - залежнай клеткай - апасродкаваная цытотоксичность (ADCC)

Прымяненне PBMC пры выяўленні наркотыкаў прадстаўленаАнтыцела - залежная клетка - апасродкаваная цытотоксичность (ADCC). Антыцела - залежная клетка - апасродкаваная цытотоксичность, як вынікае з назвы, абапіраецца на антыцелы - апасродкаванае забойства клетак для знішчэння клетак -мішэняў. Канкрэтны працэс можна зразумець наступным чынам: FAB -сегмент антыцелаў звязваецца з антыгенным эпітопам на мэтавай ячэйцы. Сегмент FC антыцелаў звязваецца з FCR на паверхні клеткі NK (паколькі клеткі NK - гэта асноўныя клеткі, якія могуць гуляць ролю ADCC, гэта выкарыстоўваецца ў якасці прыкладу), і таму вылучаецца клетка NK, а перфорин і гразіма. Перфарын і гранзім трапляюць у клетку праз пары, якія ўтвараюцца ў мембране -мэтавай клеткі, і прымушаюць памерці -клетку памерці, актывізуючы апоптоз - звязаныя з імі ферменты.

Прыкладанні ўothER распрацоўка імунатэрапеўтычнага лекі

• - Змешаная рэакцыя лімфацытаў (MLR)

Першасныя клеткі пастаяннага току і Т -клеткі CO - культываваны ў сістэме, якая можа быць выкарыстана для ацэнкі пастаяннага току - апасродкаванай актывацыі Т -клетак. Клеткі пастаяннага току экспрэсуюць Pd - L1 у вялікіх колькасцях на сваёй паверхні, што звязваецца з Pd - 1 на паверхні Т -клетак, каб інгібіраваць яго. Калі прэпарат можа эфектыўна блакаваць шлях рэакцыі паміж імі, ён можа стымуляваць праліферацыю Т -клетак у вялікіх колькасцях, такім чынам, правяраючы функцыянальную актыўнасць прэпарата.

- Т -клеткавыя аналітывальныя аналізы

T - Аналіз актывацыі клетак з'яўляецца адным з часта выкарыстоўваюцца аналізаў для ацэнкі эфектаў імунатэрапіі. У аналізах актывацыі Т -клетак звычайна выкарыстоўваюцца Т -клеткі ў прабірцы і ўлічваюць адпаведныя раздражняльнікі, такія як антыгены або антыцелы, каб выклікаць актывацыю Т -клетак

- А аналіз праліферацыі Т -клетак

T - Аналізы праліферацыі клетак могуць быць выкарыстаны для праверкі кандыдатаў на імунатэрапію і для ацэнкі эфектыўнасці лекаў, параўноўваючы ступень t - праліферацыі клетак у розных леках - апрацаваныя групы ў параўнанні з кантрольнай групай

- Стафілакокавая энтэратаксін B Стымуляцыя PBMCS

Стафілакокавы энтеротоксин B - гэта суперантиген, які звязваецца непасрэдна з малекуламі MHC на антыгене - прадстаўлены клеткі і прадстаўлены ў т - клеткавыя рэцэптары. Стафілакокавы энтеротоксин B мае магчымасць не - канкрэтна актываваць т - клеткі і выклікаць выкід профі - запаленчыя цітокіны, такія як ІЛ - 2, ІЛ - 6 і г.д.

Роля PBMC у сіндроме вылучэння цітокінаў

PBMC гуляе ключавую ролю ў развіццісіндром вызвалення цітокінаў(CRS), вострая і патэнцыйна небяспечная для жыцця сістэмная запаленчая рэакцыя. Пры стымуляцыі - няхай гэта будзе пры дапамозе імунатэрапіі, такіх як CAR -T -клеткі, моноклональныя антыцелы або інфекцыі - гэтыя клеткі становяцца высока актываванымі і хутка вылучаюць шэраг цітокіны, такія як IL -6, IL -1, IFN -γ і TNF -α. Гэта празмернае выпрацоўка цітокіны можа выклікаць каскад падзей, уключаючы ліхаманку, уцечку сасудаў, гіпатэнцыю і шматгадовую дысфункцыю. Разуменне ўкладу PBMC ў CRS прывяло да развіцця мэтавых умяшанняў, такіх як інгібітары рэцэптараў IL -6, каб дапамагчы змякчыць сіндром, загартоўваючы цітокінную буру, захоўваючы патрэбныя імунатэрапеўтычныя эфекты.

Кан.змыванне

Такім чынам, гэты артыкул падкрэслівае ключавую ролю, якую PBMC адыгрываюць у прасоўванні нашага разумення імунных механізмаў у шырокім спектры відаў. Вывучаючы унікальны ўклад - ад мадэляў прыматаў, якія адлюстроўваюць фізіялогію чалавека да грызуноў, буйных жывёл і птушыных сістэм, якія прапануюць адметныя перавагі даследавання - гэта агляд, падкрэслівае, як параўнальныя даследаванні не толькі ўдакладняюць даклінічныя ацэнкі, але і пракладваюць шлях да інавацыйных імунатэрапеўтычных стратэгій. Інтэграцыя даследаванняў PBMC у розныя сферы, такія як развіццё вакцыны, тэставанне на эфектыўнасць наркотыкаў і вывучэнне новых імунных шляхоў, якія паказваюць яе неабходную ролю як у асноўнай навуцы, так і ў клінічных прыкладаннях. У канчатковым рахунку, крыж - Аналіз відаў PBMC пацвярджае значэнне гэтых клеткавых мадэляў як фундаментальных інструментаў пры перакладзе адкрыццяў на бенчыках у эфектыўныя метады лячэння для шырокага спектру імуналагічных праблем.

KEywords: Мононуклеарная клетка перыферычнай крыві, Cynomolgus малпа PBMC, Рэзус малпа PBMC, Сабака PBMC, Сабачы PBMC, Пацук PBMC, мыш PBMC, Мышы PBMC, хамяк PBMC, Minipig PBMC, Трус PBMC, каціны PBMC, Cat PBMC, Курыца PBMC, качка PBMC, Марская свінка PBMC, Alpaca PBMC, Вярблюд PBMC, буйной рагатай жывёлы PBMC, Авечкі PBMC, Антыцела - залежная клетка - апасродкаваная цытотоксичность (ADCC), Сіндром вызвалення цітокінаў, замарожаны PBMC, криоконсервированный PBMC,Ізаляцыя PBMC, Адтаванне PBMC, Культываванне PBMC, leukopak, Лейкаферэз PBMC, HLA набраў PBMC.