CGT Иновативна терапия - Лентивирус - Опаковащ автомобил - T имунни клетки

CGT Иновативна терапия - Лентивирус - Опаковащ автомобил - T имунни клетки

Имунната клетъчна терапия е иновативно лечение на рак, което засилва имунната система на организма да насочва и елиминира раковите клетки. Ключовите форми включват цитокин - индуцирана терапия на убийци, Т - клетъчна терапия и CAR - Т клетъчна терапия. CAR - T терапия включва препрограмиране на Т клетки за експресиране на химерни антигенни рецептори (CAR), които конкретно са насочени към туморните клетки, показвайки значителен успех при хематологични ракови заболявания като левкемия и лимфом.

Ключови думи: CAR - T, лентивирусен, лентивирусен вектор, проследяващ лентивирус

Подготовка на CAR - T клетъчна терапия

Като цяло, ключовите стъпки за приготвяне на CAR - T клетки са както следва:

Източник на фигурата: DANA - Институт за рак на Фарбер - CAR T - Клетъчни клинични изпитвания помагат на множество пациенти с миелома да се върнат към здравето

1. 1. Сортиране (T - клетъчна изолация)

Първата стъпка в приготвянето на CAR - Т клетки е да се изолира Т - клетки от белите кръвни клетки в периферната кръв на пациента. Техники като имуномагнитно разделяне на зърна или проточна цитометрия обикновено се използват за извличане на CD3+- богати T - клетки от кръвта. За да се гарантира чистотата на клетките, процесът на сортиране трябва да бъде много прецизен, като се гарантира, че се получава достатъчен брой висококачествени t - клетки.

2. 2.стимулация (t - клетъчна активация)

Извлечените t - клетки се активират in vitro, обикновено използвайки aCD3 /CD28 T - Кит за активиране /разширяване на клетките. Активираните Т клетки влизат в активно състояние, подготвяйки ги за генна трансфекция. Чрез този процес функцията на Т клетки се подобрява, допринасяйки за последваща генетична модификация и амплификация.

3. 3. Трансфекция (редактиране на ген)

Активираните Т клетки претърпяват генна трансфекция, за да експресират химерен антиген рецептор (CAR). Този процес обикновено използваЛентивирусен векторза въвеждане на CAR гени в Т клетки. Lentivirus е ефективен инструмент за трансдукция на ген, като предимството на стабилно интегриране на целевия ген (като гена на CAR) в клетъчния геном. Чрез заразяване на Т клетки и трансфектиране на гена на CAR в Т -клетъчна ДНК, лентивирусът дава възможност на Т клетки да експресират автомобили дълги - термин. Генът на CAR включва единична - верижна променлива фрагмент (SCFV) на антитяло, което позволява на Т клетките да разпознават специфични антигени на повърхността на туморните клетки и инициират имунен отговор чрез активиране на сигнални участъци на Т клетки. Както е показано на фигура 2. Лентивирусната трансфекция има характеристиките на висока ефективност и стабилност, така че гена на CAR да може да се експресира в Т клетки за дълго време.

Източник на фигурата: Сингапурски автомобил - Т клетъчна терапия

4. 4. РАЗМЕР (клетъчна пролиферация)

След трансфекция CAR - Т клетки влизат в етапа на усилване, където растежните фактори катоIl - 2се добавят за насърчаване на клетъчната пролиферация. Целта на този процес е да се гарантира, че има достатъчен брой CAR - T клетки за евентуална инфузия в пациента. Процесът на усилване трябва да се провежда при стерилни условия, за да се гарантира качеството и количеството на клетките.

5. 5. КОНТРОЛ НА КАЧЕСТВОТО (QC)
6. Преди повторнофузия в пациента контролът на качеството е от решаващо значение по време на процеса на подготовка. Подготвен автомобил - T клетките претърпяват строго тестване доОсигурете тяхната чистота, активност, ефективност на трансфекцията и съответствие със стандартите за лечение. Освен това е необходимо тестване за замърсяване на клетките или нежелани реакции, за да се гарантира безопасността и терапевтичната ефикасност на клетките след реинфузия в пациента.

Iприспособяване на лентивирусна трансфекция в имунните клетки

Технологията за лентивирусна трансфекция е от решаващо значение при терапията с имунни клетки, особено за редактиране на гени и клетъчно инженерство. Лентивирусни вектори, получени от модифициран ХИВ - 1, се използват широко поради способността им да интегрират гени в генома на гостоприемника, като гарантират стабилна, дълга - термин експресия. Те могат да заразят както разделянето, така и не - разделящите се клетки и тяхната безопасност е подобрена чрез промяна на ключовите гени, за да се предотврати репликацията. Тези вектори сега обикновено се използват в генна терапия, редактиране на ген и изследване на клетъчната биология за тяхната ефективност и издръжливост при доставката на ген.

Източник на фигурата: obiosh.com/product/ схематична диаграма на опаковката на лентивирус и процеса на трансфекция на лентивирус в 293T клетки

1. Ефективна трансдукция на ген

Лентивирусният вектор може ефективно да достави целеви гени, като гена на CAR, в имунните клетки и да интегрира тези гени стабилно в клетъчния геном, като гарантира, че CAR генът непрекъснато се експресира по време на клетъчното делене и пролиферацията. Тази висока - способност за трансдукция на ефективност е от основно значение за успеха на имунотерапията.

2. По -ниска имуногенност 

В сравнение с други вирусни вектори, лентивирусите имат по -ниска имуногенност. В резултат на това, когато лентивирусите се използват за трансдуциране на имунните клетки, имунната система на пациента генерира сравнително по -слаб имунен отговор на вируса. Това помага да се сведе до минимум нежеланите реакции, особено при дългата - термин оцеляване на клетките след инфузия, като по този начин се предотвратява прекомерното отхвърляне на имунитета.

3. Висока адаптивност към имунните клетки

Лентивирусният вектор са способни ефективно да преобразуват различни видове имунни клетки,особено Т клетки и NK клетки. Чрез лентивирусна трансдукция имунните клетки могат да придобият тумор - специфични способности за разпознаване, като по този начин повишават способността си да насочват и убиват туморните клетки.

4. Прецизливост на трансдуцирани ефекторни клетки в разпознаване на целеви клетки 

В имунотерапията,трансдуцирани ефекторни клеткиВижте имунните клетки, които след трансдукция експресират CAR и упражняват анти - туморна активност. Лентивирусните вектори могат точно да доставят гена на CAR в тези ефекторни клетки, което им позволява да разпознават и насочват към туморните клетки.Целеви клеткиса туморните клетки, които са идентифицирани и унищожени от тези имунни клетки. Чрез лентивирусна трансдукция имунните клетки могат да засилят своята специфичност при разпознаване и убиване на туморни клетки, като по този начин подобряват терапевтичната ефикасност.

В този контекст Iphase, лидер в in vitro изследваните реагенти, е разработил комплект за опаковане на лентивирус и реагент на концентрация на лентивирус, за да опрости сложността на трансдукцията за имунотерапевтичните клиенти и да подобри успеваемостта на стабилната генна трансфекция. Тези продукти предлагат едно - Стоп решение за клиентите.

Афизен лентивирусPРоди

Комплектът за опаковки за алифазен лентивируссъдържа всички основни реагенти, необходими заОпаковка на лентивирус, значително опростяване на експерименталния процес и спестяване на време и усилия. Този комплект включва:

• Лентивирусна опаковка плазмидна смес
• Трансфектиран реагент
• EGFP плазмид
• Реактивен реагент на концентрация на ативирус

Този комплект наистина оптимизира експеримента! Без нужда от сложна подготовка на реагенти, опаковката на лентивирус може да бъде ефективно завършена, като просто следвате включените инструкции.Уникалните предимства на комплекта включват кратко време за опаковане, висок вирусен титър и лесна работа, което го прави идеален за начинаещи в опаковката на лентивирус. Всеки набор от реагенти се подлага на строг контрол на качеството, за да осигури точни, надеждни и възпроизводими резултати, като значително подобрява ефективността на трансфекцията и стабилността на вирусните вектори, като по този начин осигурява мощна техническа поддръжка за подготовка на имунните клетки.

Освен това, за да помогне на клиентите да спестят разходите, Iphase също разработи и произведе реагента за концентрация на лентивирус, предлагайки бърз и прост разтвор за концентрация.Чрез просто смесване на лентивирусната супернатанта с концентрационния реагент, последвано от кратко инкубация и центрофугиране с помощта на стандартна центрофуга, лентивирусни частици могат да бъдат бързо концентрирани. Този процес не изисква ултрацентрифуга, което го прави удобен и разходи - Ефективен вариант за повечето лабораторни потребители.

Накратко, реагентът на концентрацията на алифазен лентивирус не само значително подобрява ефективността на трансфекцията, но също така осигурява висока - качествена поддръжка на вирусен вектор за подготовка на имунните клетки. Той е съществен продукт за рутинни експерименти, предклинични изследвания и други области на приложение.

В обобщение, имунотерапията, по -специално CAR - T клетъчни и CAR - NK клетъчни терапии, представлява нова посока при съвременното лечение на рак. Чрез прецизни процеси като сортиране на клетки, активиране, трансдукция, разширяване и контрол на качеството, учените могат да подготвят ефективни и безопасни имунни клетки за пациенти, което позволява насочено лечение на рак.Лентивирусната трансдукция като основна технология играе критична роля в подготовката на CAR - T и CAR - NK клетки поради високата му ефективност и стабилност.С непрекъснатия технологичен напредък имунотерапията има потенциал да предложи иновативни възможности за лечение на повече пациенти, осигурявайки по -голяма клинична стойност. В бъдеще се очаква имунотерапията да донесе революционна терапевтична надежда на повече пациенти с рак.

За да отговори на нуждите на изследване на генни трансдукции, експресия и болести, афизът предлага комплекти за опаковане на лентивирус, реагенти на концентрация на лентивирус и проследяване на лентивирусите. Тези проследяващи лентивируси са опаковани със зелен флуоресцентен протеин (GFP), червен флуоресцентна протеин MCherry и луцифераза, което позволява лесно проследяване на целевите клетки както in vitro, така и in vivo.

Освен това, Iphase може да предлага и две предварително - опаковани проследяващи лентивируси: GFP & Luciferase и Mcherry & Luciferase. Тези проследяващи могат да бъдат избрани или комбинирани въз основа на експериментални нужди, оптимизиране на работните процеси и повишаване на ефективността за реални - проследяване на времето и мониторинг на целевите клетки.

АфизенIМмунотерапияRвъзхитенPРоди

В допълнение към Lentivirus - Свързани продукти, използвани в CAR - T или CAR - NK терапии, Iphase, като лидер в in vitro изследваните реагенти, също даде значителен принос за подкрепа на иновациите в CGT (клетъчна и генна терапия) и други области. Айфазата е развила и произвеждали левкоцити и PBMC (мононуклеарни клетки на периферна кръв), изолирани чрез левкафереза, заедно с различни комплекти за изолация на имунните клетки, за подпомагане на бързото развитие на имунотерапията.

Афизните продукти предлагат следните предимства иСертификат за анализ (COA)Проверено от Iphase е наличен за всяка партида.

Безопасност 

Афизните продукти се получават от здрави донори/животни, които са претърпели задълбочен PRE - скрининг, с отрицателни резултати за вирусно тестване (HIV - 1/2, HBV, HCV, сифилис).

Съответствие  

Iphase предоставя формуляри за информирано съгласие, подписани от донорите, с ясна и проследима проверка на източника.

Професионализъм

Продуктите, предоставени от Iphase, получени чрез левкафереза, се обработват от обучени професионалисти. Всяка партида е придружена от съответния COA и продуктите се транспортират под строга студена верига, за да се гарантира безопасността, бързото доставка и осигуряването на качество.

Обслужване на клиенти

Iphase предлага високо - Качествено след - Търговска услуга, осигурявайки гладко и непрекъснато изживяване през целия пробен процес.