Esplenocitos en investigación inmunológica: a través de especies y aislamiento, congelamiento y pasos de descongelación

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Esplenocitos (SPL)son una población heterogénea de células inmunes aisladas del bazo, un órgano vital involucrado en el filtrado de sangre, el montaje de respuestas inmunes y el mantenimiento de la homeostasis. Estas células incluyen linfocitos (células T, células B), macrófagos, células dendríticas y células asesinas naturales (NK), todas las cuales juegan roles críticos en la inmunidad adaptativa e innata. Los esplenocitos se usan ampliamente en la investigación preclínica y traslacional para estudiar la función inmune, el desarrollo de la vacuna, las enfermedades autoinmunes e inmunoterapia contra el cáncer.

El papel y la composición de los esplenocitos (SPL)

Dentro del bazo, los esplenocitos residen en regiones distintas: la pulpa roja, que filtra la sangre y recicla los viejos glóbulos rojos, y la pulpa blanca, donde se inician las respuestas inmunes. La pulpa blanca se organiza en zonas de células T y folículos de células B, lo que facilita las interacciones entre las células y linfocitos de antígeno. Esta arquitectura única hace de los esplenocitos (SPL) una herramienta poderosa en ensayos inmunológicos como Elispot, citometría de flujo y reacciones mixtas de linfocitos.

Especies - esplenocitos específicos (SPL)

-Esplenocitos de mono cynomolgus:Los esplenocitos de mono Cynomolgus se usan en la investigación preclínica porque imitan más de cerca las respuestas inmunes humanas, lo que hace que los esplenocitos de mono cynomolgus sean ideales para estudios de traducción.

-Esplenocitos de mono rhesus:Los esplenocitos de mono rhesus se valoran de manera similar por sus estrechas similitudes inmunológicas con los humanos. Los estudios que utilizan esplenocitos de mono rhesus ayudan a cerrar la brecha entre los modelos animales y las aplicaciones clínicas.

-Esplenocitos de perros / esplenocitos caninos:En la investigación veterinaria, los esplenocitos de perros (o esplenocitos caninos) se utilizan para estudiar trastornos inmunes en los caninos y para dibujar comparaciones con respuestas inmunes humanas.

-Esplenocitos de conejo: Los esplenocitos de conejos son importantes en los estudios sobre la producción de anticuerpos y el desarrollo de la vacuna. Los esplenocitos de conejo ayudan a revelar detalles que pueden diferir de los esplenocitos de ratón o los esplenocitos de rata.

-Esplenocitos / ratones esplenocitos de ratones:Los esplenocitos de ratones son uno de los esplenocitos (SPL) más estudiados en inmunología. Los protocolos para los esplenocitos de aislamiento de los ratones están bien establecidos, y tanto los esplenocitos de ratones como los esplenocitos de ratones se utilizan para la citometría de flujo, Elispot y otros ensayos funcionales.

-Esplenocitos de rata:Los esplenocitos de rata proporcionan un modelo complementario para la inmunotoxicología y los estudios de vacunas. Los esplenocitos de ratas a menudo se comparan con los esplenocitos de ratón para comprender las diferencias entre especies.

Aislamiento de esplenocitos

Aislamiento de esplenocitoses el proceso de extracción de células inmunes del bazo que se utilizará en varias aplicaciones de investigación, como citometría de flujo, ensayos de producción de citocinas o reacciones de linfocitos mixtos.

El bazo se eliminó en condiciones asépticas, solución de aislamiento de tierra y se transfirió a un tubo estéril que contiene medio RPMI 1640. La capa de leucocitos se recogió cuidadosamente después de la centrifugación. Las células se lavaron con medio RPMI 1640, centrifugado y el sobrenadante se descartó. Este paso de lavado se repitió 1 - 2 veces antes de que se usara las células aisladas para más experimentos.

Congelamiento de esplenocitos

Congelamiento de esplenocitoses un paso crucial para preservar las células para uso futuro. La criopreservación permite a los investigadores almacenar esplenocitos durante períodos prolongados sin comprometer su viabilidad o funcionalidad.

El sobrenadante de la suspensión celular bien centrifugada del paso de aislamiento se descarta y la concentración celular se diluyó en medio de congelación. Agregue una alícuota a cada tubo de congelación y transfiera a un recipiente de congelación, asegurando que las células permanezcan en suspensión. Congele rápidamente los contenedores de congelación en un congelador de - 80 ° C. Transferir al contenedor de congelador - 150 ° C (o tanque de nitrógeno líquido) para el almacenamiento a largo plazo.

Descongelación de esplenocitos

Descongelación de esplenocitosDebe hacerse con cuidado para garantizar una alta viabilidad y funcionalidad celular después de la criopreservación. El proceso de descongelación suele ser rápido para minimizar los efectos dañinos de la formación de DMSO y el cristal de hielo.

Los criotubos se transfieren a un baño de agua de 37 ° C y se descongelan hasta que solo quedaron cristales de hielo finos en los tubos. Agregue 0.5 - 1 ml de medio de cultivo celular al tubo congelado, resuspenda y transfiera la suspensión a un tubo de 15 ml lleno con medio de cultivo celular. Centrifuge, retire el sobrenadante y toque el tubo para aflojar la disposición de la celda. Agregue 1 ml de medio de cultivo celular, sople y resuspenda con una pipeta, agregue medio a un volumen de 15 ml. Centrifuge, DESPERNATE, agregue 1 ml de medio de cultivo celular, agregando medio de acuerdo con la concentración celular esperada. Coloque las células en una incubadora de CO2 e incube durante 1 h con un ligero espacio en la tapa. Al final de la incubación, resuspenda y deje a 1 minuto para permitir que los restos celulares agregados precipiten. La suspensión celular sin precipitación se transfirió cuidadosamente a un nuevo tubo de 15 ml. Las células se contaron para determinar la actividad celular.

Conclusión

Los esplenocitos, con su composición diversa y su papel fundamental en las respuestas inmunes, son herramientas invaluables en la investigación inmunológica. Ya sea derivado de roedores, primates u otras especies como conejos y perros, los esplenocitos facilitan estudios críticos en la función inmune, mecanismos de enfermedad, desarrollo de vacunas e inmunoterapia contra el cáncer. Los procesos de aislamiento, congelación y descongelación son esenciales para preservar su integridad y viabilidad, lo que permite a los investigadores explorar la dinámica celular en varios modelos. A medida que nuestra comprensión de la inmunología se profundiza, el uso de esplenocitos continuará siendo fundamental para cerrar la brecha entre los estudios preclínicos y las aplicaciones clínicas, asegurando los avances tanto en la medicina humana como la veterinaria.