CGT uuenduslik teraapia - Lentivirus - Pakendusauto - t immuunrakud

CGT uuenduslik teraapia - Lentivirus - Pakendusauto - t immuunrakud

Immuunrakuteraapia on uuenduslik vähiravi, mis suurendab keha immuunsussüsteemi vähirakkude sihtimiseks ja kõrvaldamiseks. Võtmevormide hulka kuuluvad tsütokiin - indutseeritud tapjarakuteraapia, t - rakuravi ja CAR - T -rakuravi. CAR - Travi hõlmab T -rakkude ümberprogrammeerimist kimäärsete antigeeni retseptorite (CAR) ekspresseerimiseks, mis on suunatud konkreetselt kasvajarakkudele, näidates olulist edu hematoloogiliste vähivormide, näiteks leukeemia ja lümfoomi korral.

Märksõnad: auto - t, lentiviral, lentiviral vektor, jälitaja lentivirus

CAR -i ettevalmistamine - T -rakuravi

Üldiselt on autode - T -rakkude valmistamise peamised sammud järgmised:

Joonis Allikas: Dana - Farberi vähiinstituut - CAR T - Rakukliinilised uuringud aitavad hulgimüeloomiga patsientidel tervise juurde naasta

1. 1. Sorting (t - rakkude eraldamine)

CAR - T -rakkude ettevalmistamise esimene samm on t - rakkude eraldamine valge verelibledest patsiendi perifeerses veres. Selliseid tehnikaid nagu immunomagnetiline helmeste eraldamine või voolutsütomeetria kasutatakse tavaliselt CD3+- rikkalike T - rakkude ekstraheerimiseks verest. Rakkude puhtuse tagamiseks peab sortimisprotsess olema väga täpne, tagades piisava arvu kõrgete - kvaliteetsete t - rakkude saamise.

2. 2.stimulatsioon (t - rakkude aktiveerimine)

Ekstraheeritud T - rakud aktiveeritakse in vitro, kasutades tavaliselt aCD3 /CD28 T - Rakkude aktiveerimis- /laienduskomplekt. Aktiveeritud T -rakud sisenevad aktiivsesse olekusse, valmistades need ette geeni transfektsiooniks. Selle protsessi kaudu suureneb T -raku funktsioon, mis aitab kaasa järgnevale geneetilisele modifikatsioonile ja võimendamisele.

3. 3. Transfektsioon (geeni redigeerimine)

Aktiveeritud T -rakud läbivad geeni transfektsiooni, et ekspresseerida kimäärset antigeeni retseptorit (CAR). Seda protsessi kasutab tavaliseltlentiviraalne vektorAutogeenide sisestamiseks T -rakkudesse. Lentivirus on efektiivne geeniülekandevahend, mille eeliseks on sihtgeeni (näiteks CAR -geeni) stabiilne integreerimine raku genoomi. T -rakke nakatades ja CAR geeni T -rakkude DNA -sse transfekteerides võimaldab Lentivirus T -rakkudel autosid pikka - terminit ekspresseerida. CAR -geeni sisaldab antikeha ühe - ahelmuutuva fragmenti (SCFV), mis võimaldab T -rakkudel ära tunda kasvajarakkude pinnal olevad spetsiifilised antigeenid ja algatada immuunvastus, aktiveerides T -rakkude signaalimispiirkondi. Nagu on näidatud joonisel 2. Lentiviral Transfectionil on kõrge efektiivsuse ja stabiilsuse omadused, nii et CAR geeni saab T -rakkudes pikka aega ekspresseerida.

Joonis allikas: Singapuri auto - T -rakuteraapia

4. 4. Plimineerimine (rakkude proliferatsioon)

Pärast transfektsiooni sisenevad auto - T -rakud amplifikatsiooni etappi, kus sellised kasvufaktorid naguIl - 2lisatakse rakkude proliferatsiooni soodustamiseks. Selle protsessi eesmärk on tagada, et patsiendile võimaliku infusiooni jaoks oleks saadaval piisav arv autode rakke. Rakkude kvaliteedi ja koguse tagamiseks tuleb võimendusprotsess läbi viia steriilsetes tingimustes.

5. 5. Kvaliteedikontroll (QC)
6. Enne kui patsiendisse taaselustamine on kvaliteedikontroll, on ettevalmistamise käigus ülioluline. Valmistatud auto - T -rakud läbivad range testitagada nende puhtus, aktiivsus, transfektsiooni efektiivsus ja ravistandardite järgimine. Lisaks on rakkude saastumise või kõrvaltoimete testimine vajalik, et tagada rakkude ohutus ja terapeutiline efektiivsus pärast patsiendi taaselustamist.

Ilentiviruse transfektsiooni msentatsioon immuunrakkudes

Lentiviraalse transfektsiooni tehnoloogia on immuunrakkude ravimisel ülioluline, eriti geenide redigeerimise ja rakutehnoloogia puhul. Modifitseeritud HIV - 1 saadud lentiviraalseid vektoreid kasutatakse laialdaselt tänu nende võimele integreerida geenid peremeesgenoomi, tagades stabiilse, pika - termini ekspressiooni. Nad võivad nakatada nii eraldamist kui ka mitte - jagunevaid rakke ning nende ohutust on parandatud võtmegeenide muutmisega replikatsiooni vältimiseks. Neid vektoreid kasutatakse nüüd tavaliselt geeniteraapias, geenide redigeerimises ja rakubioloogia uuringutes nende tõhususe ja vastupidavuse osas geenide kohaletoimetamisel.

Joonis Allikas: obiosh.com/product/ Lentivirus pakendamise ja lentiviruse transfektsiooni protsessi skemaatiline diagramm 293T rakus

1. Tõhus geeni ülekanne

Lentiviraalne vektor suudab tõhusalt toimetada sihtgeenid, näiteks CAR -geeni, immuunrakkudesse ja integreerida need geenid stabiilselt raku genoomi, tagades, et CAR -geeni ekspresseeritakse pidevalt rakkude jagunemise ja vohamise ajal. See kõrge - efektiivsuse ülekandevõime on immunoteraapia õnnestumise jaoks ülioluline.

2. LOONT 

Võrreldes teiste viirusvektoritega on lentiviirustel madalam immunogeensus. Selle tulemusel, kui lentivirusid kasutatakse immuunrakkude muutmiseks, tekitab patsiendi immuunsussüsteem viiruse suhtes suhteliselt nõrgema immuunvastuse. See aitab minimeerida kõrvaltoimeid, eriti rakkude pikaajalise ellujäämise korral pärast infusiooni, vältides sellega liigset immuunhülgamist.

3.Kui immuunrakkudega kohanemisvõime

Lentiviraalne vektor on võimeline tõhusalt mitmesuguseid immuunrakke muundama,eriti T -rakud ja NK rakud. Lentiiviraalse transduktsiooni kaudu võivad immuunrakud omandada kasvaja - Spetsiifilised äratundmisvõime, suurendades sellega nende võimet sihtida ja tappa kasvajarakke.

4. Transdutseeritud efektorrakkude eesmärk on rakkude sihte äratundmine 

Immunoteraapias,transdutseeritud efektorrakudVaadake immuunrakkudele, mis pärast transduktsiooni ekspresseerivad CAR -i ja avaldavad kasvajavastast aktiivsust. Lentiviraalsed vektorid võivad autogeeni nendesse efektorrakkudesse täpselt toimetada, võimaldades neil kasvajarakke ära tunda ja sihtida.Sihtrakudon kasvajarakud, mis need immuunrakud tuvastavad ja hävitavad. Lentiviraalse transduktsiooni kaudu võivad immuunrakud tugevdada nende spetsiifilisust kasvajarakkude äratundmisel ja tapmisel, parandades sellega terapeutilist efektiivsust.

Selles kontekstis on in vitro uurimisreaktiivide liider ifaas välja töötanud lentiviruspakendikomplekti ja lentiviruse kontsentratsiooni reagendi, et lihtsustada immunoteraapia klientide transduktsiooni keerukust ja parandada stabiilse geeni transfektsiooni edukuse määra. Need tooted pakuvad klientidele ühe - peatuslahendust.

Ifaas lentivirusPhaardetooted

Ifaas lentivirus pakendikomplektsisaldab kõiki vajalikke olulisi reagentelentivirus pakend, lihtsustades oluliselt eksperimentaalset protsessi ning säästes aega ja vaeva. See komplekt sisaldab:

• Lentivirus pakendplasmiidsegu
• Transfektreagent
• EGFP plasmiid
• Ifaas lentiviruse kontsentratsioonreagent

See komplekt voolab katset tõeliselt! Kuna keerukate reagentide ettevalmistamist pole vaja, saab Lentivirus pakendit tõhusalt lõpule viia, järgides lihtsalt lisatud juhiseid.Komplekti ainulaadsed eelised hõlmavad lühikest pakendiaega, kõrge viiruse tiiterit ja hõlpsat tööt, muutes selle ideaalseks Lentivirus pakendi algajatele. Iga reagentide komplekt läbib ranget kvaliteedikontrolli, et tagada täpsed, usaldusväärsed ja reprodutseeritavad tulemused, parandades märkimisväärselt transfektsiooni efektiivsust ja viirusvektorite stabiilsust, pakkudes seeläbi tugevat tehnilist tuge immuunrakkude ettevalmistamiseks.

Lisaks on ifaas ka klientide kulude säästmiseks välja töötanud ja koostanud Lentivirus kontsentratsiooni reagendi, pakkudes kiiret ja lihtsat kontsentratsioonilahendust.Segades lihtsalt lentiviruse supernatanti kontsentratsioonireaktiiviga, millele järgneb lühike inkubatsioon ja tsentrifuugimine standardse tsentrifuugi abil, saab lentiviraalseid osakesi kiiresti kontsentreerida. See protsess ei nõua ultratsentrifuugi, muutes selle mugavaks ja kuludeks - tõhusaks võimaluseks enamikule laboratoorsetele kasutajatele.

Lühidalt öeldes ei paranda ifaaside lentiviruse kontsentratsioonireagent mitte ainult märkimisväärselt transfektsiooni efektiivsust, vaid pakub ka kõrget - kvaliteetset viirusvektori tuge immuunrakkude valmistamiseks. See on oluline toode rutiinsete katsete, prekliiniliste uuringute ja muude rakendusvaldkondade jaoks.

Kokkuvõtlikult tähistab immunoteraapia, eriti CAR - T -raku ja CAR - NK rakuteraapiad, tänapäevases vähiravis uut suunda. Täpsete protsesside kaudu, nagu rakkude sortimine, aktiveerimine, transduktsioon, laiendamine ja kvaliteedikontroll, saavad teadlased ette valmistada patsientidele tõhusaid ja ohutuid immuunrakkude tooteid, võimaldades suunatud vähiravi.Lentiviraalne ülekanne kui põhitehnoloogia mängib kriitilist rolli auto - t ja CAR - NK rakkude valmistamisel selle kõrge efektiivsuse ja stabiilsuse tõttu.Pidevate tehnoloogiliste edusammude korral on immunoteraapia potentsiaal pakkuda uuenduslikke ravivõimalusi rohkematele patsientidele, pakkudes suuremat kliinilist väärtust. Tulevikus toob immunoteraapia rohkem vähihaigetele revolutsioonilise terapeutilise lootuse.

Geeniülekande, ekspressiooni ja haiguste uurimise vajaduste rahuldamiseks pakub ifaas lentiviruste pakendite komplektid, lentiviruse kontsentratsioonireaktiivid ja jälitaja lentiviirusi. Need jälitaja lentiviirused on pakendatud rohelise fluorestsentsvalgu (GFP), punase fluorestsentsvalgu mCherry ja lutsiferaasiga, võimaldades sihtrakkude hõlpsat jälgimist nii in vitro kui ka in vivo.

Lisaks võib ifaas pakkuda ka kahte eel - pakendatud jälitaja lentivirusid: GFP ja Luciferase ning McCherry & Luciferase. Neid jäljendajaid saab valida või kombineerida eksperimentaalsete vajaduste põhjal, töövoogude sujuvamaks muutmiseks ja tõhususe suurendamiseks sihtrakkude reaalse jälgimise ja jälgimise jaoks.

IfaasImmunoteraapiaRelavnenudPhaardetooted

Lisaks lentivirus - seotud toodetele, mida kasutatakse autos - t või autos - NK -teraapiates, on ifaas in vitro uurimisreagentide liider andnud olulise panuse ka CGT (raku ja geeniteraapia) ja muude väljade uuenduste toetamiseks. Ifaas on välja töötanud ja tootnud leukotsüüte ja PBMC -sid (perifeerse vere mononukleaarsed rakud), mis on eraldatud leukafereesi kaudu, koos erinevate immuunrakkude eraldamise komplektidega, et toetada immunoteraapia kiiret arengut.

IFaasi tooted pakuvad järgmisi eeliseid jaAnalüüsisertifikaat (COA)Iga partii jaoks on saadaval ifaasi abil kontrollitud.

Ohutus 

Ifaasiproduktid on pärit tervetest doonoritest/loomadest, kes on läbinud põhjaliku eel - sõeluuringu, negatiivsete tulemustega viiruste testimiseks (HIV - 1/2, HBV, HCV, süüfilis).

Vastavus  

Ifaas pakub teadlikke nõusolekuvorme, millele on alla kirjutatud doonoritega, millel on selge ja jälgitav allika kontrollimine.

Professionaalsus

Leukafereesi kaudu saadud ifaasi pakutavaid tooteid käivad koolitatud spetsialistid. Iga partiiga kaasneb vastav COA ja tooteid veetakse range külma ahela all, et tagada ohutus, kiire kohaletoimetamine ja kvaliteedi tagamine.

Klienditeenindus

Ifase pakub kõrget - kvaliteeti pärast - müügiteenust, tagades sujuva ja katkematu kogemuse kogu prooviprotsessi vältel.