Conas sleamhnáin a ullmhú le haghaidh measúnacht comet
Anmeasúnacht chóiméad, ar a dtugtar leictreafóiréis fhoirmiú cille aonair freisin, is teicníc íogair agus ildánach é chun damáiste DNA a chainníochtú i gcealla aonair. Ag ullmhú ard - cáilíochtSleamhnán measúnachta cóiméadIs céim chriticiúil í S a chinneann iontaofacht agus in -atáirgtheacht na dtorthaí measúnachta. Tá sé mar aidhm ag an airteagal seo treoir chuimsitheach a sholáthar maidir le sleamhnáin a ullmhú le haghaidh measúnacht comet, ag comhtháthú léargais ó shaineolaithe sa réimse. Clúdóimid gach céim ríthábhachtach, ó roghnú cille go léirmhíniú sonraí, ag cinntiú go mbainfidh tú na torthaí is fearr amach.Réamhrá ar mheasúnacht comet agus a thábhacht
● Forbhreathnú ar mheasúnacht comet
Is uirlis chumhachtach é an measúnacht Comet, a forbraíodh go déanach sna 1980idí, chun sosanna DNA a bhrath i gcealla eukaryotic aonair. Úsáidtear é go forleathan i réimsí mar thástáil géineatocsaineachta, eipidéimeolaíocht mhóilíneach, agus bithmhóiriú comhshaoil. Is éard atá i gceist le prionsabal na measúnachta cóiméad ná cealla a leabú in agarose, iad a liostú chun seicní agus próitéiní a bhaint, agus ansin an DNA a chur faoi réir leictreafóiréis. Ceadaíonn an íomhá a leanann as, atá cosúil le cóiméad, cainníochtú damáiste DNA.● Iarratais ar bhrath damáiste DNA
Tá measúnachtaí cóiméad thar a bheith luachmhar maidir le damáiste DNA a bhrath de bharr tocsainí comhshaoil, radaíocht agus cógaisíochta. Tá ról riachtanach acu freisin maidir le measúnú a dhéanamh ar éifeachtúlacht mheicníochtaí deisiúcháin DNA i gcineálacha éagsúla cille. Baineann taighdeoirí úsáid as measúnachtaí cóiméad chun staidéar a dhéanamh ar ailse, ar aosú, agus ar ghalair eile atá nasctha le damáiste DNA.● Tábhacht i dtástáil géineatocsaineachta
Ní féidir an tábhacht rialála agus taighde a bhaineann le measúnachtaí cóiméad a bheith ró -íseal. Feidhmíonn siad mar réamh -uirlis scagtha riachtanach chun comhdhúile ionchasacha géineatocsaineacha a aithint. Is féidir leis na torthaí ó na measúnachtaí seo tionchar a imirt ar chinneadh - próisis a dhéanamh i bhforbairt drugaí agus measúnuithe sábháilteachta comhshaoil.Roghnú na gceall cuí le haghaidh measúnacht comet
● Cineálacha cealla a úsáidtear
Is féidir le rogha na gceall tionchar suntasach a imirt ar thoradh measúnachta cóiméad. I measc na gceall a úsáidtear go coitianta tá limficítí, cealla buccal, agus línte cille saothraithe éagsúla. Is minic a roghnaíonn taighdeoirí cineálacha cille bunaithe ar chuspóirí an staidéir agus ar éascaíocht samplaí a fháil.● Breithnithe do Rogha na gCillíní
Agus cealla á roghnú agat, smaoinigh ar fhachtóirí mar infhaighteacht cille, íogaireacht do dhamáiste DNA, agus ábharthacht don cheist taighde. Mar shampla, is furasta lymphocytes a fháil ó fhuil agus tá siad íogair do ghníomhairí géineatocsaineacha, rud a fhágann gur rogha iontach iad do go leor staidéar.● Tionchar ar thorthaí measúnachta
Is féidir le bunús agus staid na gceall difear a dhéanamh do leibhéal bunlíne damáiste DNA agus freagra na cille ar chóireáil. Dá bhrí sin, tá prótacail roghnaithe agus láimhseála cille comhsheasmhacha ríthábhachtach chun torthaí iontaofa agus inatáirgthe a fháil i dtástálacha cóiméad.Ullmhú glóthacha agarose
● Cineálacha agarose le húsáid
Tá sé ríthábhachtach an t -agarose ceart a roghnú do shláine an mheasúnaithe cóiméad. Is fearr agarose leáphointe íseal toisc go n -éiríonn sé go tapa agus go laghdaíonn sé damáiste DNA le linn na próiseála. Moltar agarose ardchaighdeáin ó sholáthraithe creidiúnacha, amhail iad siúd ó sholáthraí sleamhnáin mheasúnaithe cóiméad iontaofa nó déantúsóir sleamhnáin mheasúnaithe cóiméad.● Céimeanna tiúchana agus ullmhúcháin agarose
De ghnáth, úsáidtear tiúchan agarose leáphointe íseal 1%. Tuaslaig an agarose i maolán oiriúnach, teas é go dtí go leántar é go hiomlán, agus ansin fuaraigh go teocht atá sábháilte do leabú cille. Cinntigh go bhfuil an agarose saor ó bhoilgeoga agus smionagar chun déantúsáin a sheachaint sa mheasúnacht.● Cáilíocht an fhoirmiú is fearr a chinntiú
Is féidir le cáilíocht an ghlóthach agarose tionchar a imirt ar íogaireacht agus ar in -atáirgtheacht an mheasúnaithe. Tá teicnící cuí láimhseála agus ullmhúcháin riachtanach chun glóthach aonchineálach a tháirgeadh le hairíonna comhsheasmhacha thar sleamhnáin éagsúla. Cinntíonn sé seo go bhfuil foirmiú agus léirshamhlú na gcóiméad aonfhoirmeach.Fionraí cille agus cealla a leabú in agarose
● Fionraí na cille a ullmhú
Tosaigh trí fhionraí cille amháin a fháil. I gcás cealla saothraithe, baineann sé seo le trypsinization, agus neodrú agus níochán ina dhiaidh sin. I gcás cealla príomhúla cosúil le limficítí, tá gá le lártheifneoiriú agus ath -athbheochan i maolán oiriúnach. Bain úsáid as hemocytometer chun tiúchan cille de thart ar 1 x 10^5 ceall/ml a chinntiú.● Cealla a leabú in agarose leáphointe íseal
Measc an fhionraí cille le hagarose leáite leáite réamh -théite ag cóimheas a chinntíonn dáileadh aonfhoirmeach na gceall. Pípéad go tapa an meascán ar shleamhnáin mheasúnachta cóiméad réamh -bhrataithe, ar féidir iad a cheannach ó mhonarcha sleamhnán measúnachta comet nó ó sholáthraí iontaofa. Bain úsáid as duillín clúdaigh chun an agarose a scaipeadh go cothrom agus cosc a chur ar bhoilgeoga aeir.● Cealla a scaipeadh ar sleamhnáin
Nuair a scaiptear an agarose, lig do na sleamhnáin fuarú agus daingniú ar dhromchla fuar nó ar limistéar cuisnithe. Ní mór an chéim seo a dhéanamh go héifeachtúil chun cosc a chur ar an agarose a leagan amach go míchothrom, rud a d'fhéadfadh tionchar a imirt ar léirshamhlú cóiméid le linn na hanailíse.Lysis cealla ar na sleamhnáin
● Comhdhéanamh tuaslagáin lysis
Is iondúil go mbíonn tiúchan ard salainn agus glantaigh sa tuaslagán lysis, mar shampla NaCl, EDTA, agus Triton X - 100, chun na cealla a lyse go héifeachtach agus chun seicní agus próitéiní a bhaint agus an DNA a fhágáil slán.● nós imeachta agus coinníollacha lysis
Déan na sleamhnáin sa tuaslagán lysis a thumadh agus goir ag 4 ° C ar feadh 1 uair an chloig ar a laghad, cé go mbíonn goir thar oíche is fearr go minic. Cinntigh go bhfuil an t -umar lysis clúdaithe chun galú agus éilliú a sheachaint. Tá coinníollacha na céime lysis ríthábhachtach chun comhábhair cheallacha a bhaint gan an DNA a dhíghrádú.● Tábhacht lysis cille iomlán
Is féidir le lysis neamhiomlán drochfhoirmiú cóiméad agus sonraí neamhiontaofa a bheith mar thoradh air. Dá bhrí sin, tá sé riachtanach an prótacal lysis a leanúint go cúramach, ag cinntiú go dtéann an tuaslagán isteach i ngach cuid den sleamhnán agus go bhfuil amanna goir leordhóthanach le haghaidh cur isteach iomlán na gceall.Coinníollacha dí -scamhadh alcaileach agus leictreafóiréis
● An tuaslagán alcaileach a ullmhú
Úsáidtear an tuaslagán alcaileach, go minic meascán de NaOH agus EDTA, chun an DNA a scaoileadh. Ba chóir a ullmhúchán a dhéanamh go cúramach, ag cinntiú an pH agus an mhóilíneachta cheart. Ullmhaigh an réiteach go úrnua chun a éifeachtúlacht a choinneáil.● Tábhacht agus am ag scaoileadh alcaileach
Goir sleamhnáin sa tuaslagán alcaileach, de ghnáth ar feadh 20 - 40 nóiméad, chun ligean do na snáitheanna DNA scaoileadh. Tá an chéim seo ríthábhachtach chun sosanna snáithe aonair agus suíomhanna alcaile a bhrath. An t -am neamhshuimithe a bharrfheabhsú bunaithe ar do phrótacal sonrach agus do chineál cille.● Socrú agus paraiméadair leictreafóiréis
Socraigh an t -umar leictreafóiréis le maolán leictreafóiréis alcaileach fuar. Cuir na sleamhnáin san umar, ag cinntiú go bhfuil siad faoi uisce go hiomlán. Cuir voltas comhsheasmhach i bhfeidhm (thart ar 25 V de ghnáth) ar feadh 20 - 30 nóiméad. Ní mór na coinníollacha leictreafóiréis, lena n -áirítear voltas agus am, a bharrfheabhsú chun an réiteach is fearr ar imirce DNA a bhaint amach.Próiseas neodraithe agus smálú
● Ullmhú agus úsáid maolánach neodraithe
Tar éis leictreafóiréis, neodrú na sleamhnáin chun an t -imoibriú a stopadh agus an DNA a chobhsú. Tá bonn Tris ag pH de 7.5 i maolán neodraithe coitianta. Sruthlaigh na sleamhnáin go réidh sa mhaolán seo arís agus arís eile chun gach rian den tuaslagán alcaileach a bhaint.● Teicnící staining
Déan na sleamhnáin neodraithe a dhathú le dath ceangailteach fluaraiseacha, mar shampla Ethidium Bromide nó SYBR Green. Éilíonn bróimíd Ethidium, cé go bhfuil sé clasaiceach, láimhseáil chúramach mar gheall ar a airíonna só -ghineacha. Cuireann SYBR Green rogha níos sábháilte ar fáil le híogaireacht ard. Goir na sleamhnáin sa tuaslagán smálú ar feadh tréimhse chuí (de ghnáth 15 - 30 nóiméad) sa dorchadas.● Amharcléiriú cóiméid DNA
Tar éis an smálú, sruthlaigh na sleamhnáin go réidh chun an iomarca stain a bhaint. Scrúdaigh na sleamhnáin faoi mhicreascóp fluaraiseachta. Tá cáilíocht an smálú agus rún an mhicreascóp ríthábhachtach chun íomhánna soiléire de na cóiméid a fháil.Anailís Micreascópachta agus Íomhá
● An micreascóp ceart a roghnú
Tá gá le micreascóp fluaraiseachta atá feistithe le tacar scagaire cuí chun DNA dhaite a shamhlú. Roghnaigh micreascóp le réiteach ardtaifigh agus córas ceamara atá in ann íomhánna mionsonraithe de na cóiméid a ghabháil.● Íomhánna ardchaighdeáin a ghabháil
Gabh íomhánna de 50 cóim ar a laghad in aghaidh an sleamhnáin chun tábhacht staitistiúil a chinntiú. Cinntigh fiú soilsiú agus fócas chun déantúsáin a sheachaint. Is féidir le calabrú cuí na suíomhanna micreascóp agus ceamara feabhas mór a chur ar chaighdeán na híomhá.● Bogearraí le haghaidh anailíse cóiméad
Tá roinnt clár bogearraí ar fáil le haghaidh anailíse cóiméad, ar nós CometsCore agus CASP. Tomhaiseann na cláir seo paraiméadair cosúil le fad eireaball, déine eireaball, agus nóiméad eireaball, atá ríthábhachtach chun damáiste DNA a chainníochtú.Fabhtcheartú a dhéanamh ar shaincheisteanna coitianta
● Fadhbanna coitianta
I measc na saincheisteanna coitianta i dtástálacha comet tá fluaraiseacht chúlra ard, foirmiú cóiméad íseal, agus torthaí neamhréireacha idir sleamhnáin. Is féidir leis na fadhbanna seo teacht ó fhoinsí éagsúla, lena n -áirítear droch -láimhseáil cille, ullmhú glóthach fo -optamach, agus coinníollacha míchearta nó leictreafóiréis.● Réitigh agus bearta coisctheacha
Chun fluaraiseacht chúlra ard a mhaolú, a chinntiú go bhfuil gach imoibrí agus glóthacha saor ó ábhair shalaithe. Maidir le foirmiú íseal cóiméad, déan fíorú go bhfuil inmharthanacht na gceall ard, agus go bhfuil coinníollacha lysis optamach. Is príomhbhearta coisctheacha iad ullmhúchán sleamhnán comhsheasmhach agus cloí go prótacal críochnúil.● In -atáirgtheacht agus cruinneas a chinntiú
Teastaíonn caighdeánú prótacail dian agus bailíochtú rialta gach céim chun in -atáirgtheacht a bhaint amach i dtástálacha cóiméad. Trealamh a chalabrú go rialta, imoibrithe ardchaighdeáin ardchaighdeáin a úsáid, agus taifid mhionsonraithe a choinneáil ar na coinníollacha turgnamhacha go léir chun cruinneas a chinntiú.Torthaí Léiriú Sonraí agus Tuairisciú
● Anailís a dhéanamh ar pharaiméadair eireaball cóiméad
I measc na bpríomhpharaiméadair chun damáiste DNA a chainníochtú tá fad eireaball, a léiríonn méid na himirce DNA, agus déine eireaball, a léiríonn an méid DNA san eireaball. Úsáidtear an nóiméad eireaball olóige, tomhas ilchodach, go coitianta freisin.● Cúinsí staitistiúla i dtuairisciú sonraí
Tá anailís staitistiúil chruinn riachtanach le haghaidh léirmhíniú sonraí. Bain úsáid as tástálacha staitistiúla cuí chun comparáid a dhéanamh idir leibhéil damáiste DNA idir grúpaí samplacha éagsúla. Cinntigh go ndéantar sonraí ó ilshleamhnáin agus ó thurgnaimh a chomhthiomsú chun cuntas a thabhairt ar éagsúlacht.● Torthaí a chur i láthair agus a léirmhíniú
Cuir do chuid torthaí i láthair ar bhealach soiléir agus gonta, ag úsáid graif agus táblaí chun príomhthorthaí a léiriú. Pléigh na himpleachtaí a bhaineann leis na leibhéil damáiste DNA a breathnaíodh agus an tionchar féideartha ar an gcóras bitheolaíoch atá faoi staidéar.Conclúid: Sleamhnáin mheasúnaithe cóiméad ardchaighdeáin a bhaint amach
Is éard atá i gceist le sleamhnáin mheasúnachta cóiméad ardchaighdeáin a ullmhú ná machnamh cúramach a dhéanamh ar roghnú cille, ullmhú glóthach agarose, coinníollacha lysis, leictreafóiréis, smálú, agus anailís íomhá. Ní mór gach céim a uasmhéadú agus a chaighdeánú go cúramach chun torthaí iontaofa agus inatáirgthe a chinntiú. Is féidir le comhoibriú le soláthróirí agus monaróirí measúnachta measúnachta cóimeála cáilíocht do mheasúnachta a fheabhsú trí ábhair ghrád ard agus tacaíocht theicniúil a sholáthar.● Maidir leIPhaseBitheolaíochtaí
Tá a cheanncheathrú i dTuaisceart na Breataine Bige, Pennsylvania, iPhase Biosciences "speisialaithe, úrscéal agus nuálaíoch" ardteicneolaíochta ag comhtháthú taighde, forbairt, táirgeadh, díolacháin, agus seirbhísí teicniúla imoibrithe bitheolaíocha nuálacha. Tá ár bhfoireann eolaíochta de níos mó ná 50 saineolaí taithí a ghiaráil agus paisean fairsing a dhéanamh ar thaighde eolaíoch, tá ár bhfoireann eolaíochta de níos mó ná 50 saineolaí a bhfuil taithí acu tiomanta do imoibrithe bitheolaíocha nuálacha ardchaighdeáin a sholáthar d'eolaithe ar fud an domhain agus cabhrú le taighdeoirí ar fud a n -iarrachtaí eolaíocha chun a gcuspóirí taighde a bhaint amach. Ag leanúint ar an idéalach T&F de "imoibrithe nuálacha, ag déanamh taighde ar an todhchaí", bhunaigh iPhase il -áiseanna T&F, ionaid díolacháin, stórais, agus comhpháirtithe dáilte sna Stáit Aontaithe, san Eoraip, agus i dtíortha na hÁise Thoir - ag clúdach níos mó ná 12,000 méadar cearnach.Am Post: 2024 - 08 - 28 14:05:21