Codán Ae Francach Ionduchtaithe S9: Córas Gníomhachtaithe Meitibileach do Thástálacha Géineatocsaineachta In vitro agus Sóchán

Eochairfhocail: OECD 471, OECD 473, OECD 476, OECD 487, tástáil sócháin, géineatocsaineacht, tocsaineacht ghéiniteach, ae francach spreagtha S9, tástáil AMES, tástáil mion -ames, abhcóide crómasóim, micronucleus, HPRT/HGPRT Measúnacht, TK Measssay

Táirge iPhase

Tabhairt isteach

Ae francach spreagtha S9is comhpháirt lárnach é chun measúnú a dhéanamh ar antocsaineacht ghéiniteachPoitéinseal ceimiceán, go háirithe i dtocsaineolaíocht rialála. Úsáidtear é go coitianta i dteannta le measúnachtaí in vitro, mar shampla anTástáil Ames istástálacha sócháin, meastóireacht a dhéanamh ar airíonna só -ghineacha comhdhúile. Trí chóras einsímeach a sholáthar atá saibhir i cytochrome P450 (CYP450), tá ról ríthábhachtach ag an gcodán francach a tharlódh S9 maidir leis na próisis mheitibileacha a tharlaíonn san ae a ionsamhlú, ag cuidiú le cinneadh a dhéanamh an féidir le ceimiceáin sócháin ghéiniteacha nó ailse a chruthú.

Ae francach spreagtha S9

Tagraíonn an codán ae S9 do phost - maolaitheoir mitochondrial a fhaightear ó homaiginí ae francach tar éis sraith céimeanna lártheifneoireachta. Tagraíonn an téarma "spreagtha" do chóireáil francaigh le comhdhúile sonracha a fheabhsaíonn gníomhaíocht einsímí ae, go háirithe na heinsímí cytochrome P450 (CYP450), atá freagrach as meitibileacht raon leathan xenobiotach.

Tá éagsúlacht einsímí i gcodán an ae francach spreagtha S9 a bhfuil baint acu le meitibileacht chéim I agus chéim II ceimiceán. Áirítear leis seo einsímí ar nós cytochrome P450 monooxygenases, a éascaíonn biotransformation ocsaídiúcháin foshraitheanna, rud a dhéanann aithris ar mheitibileacht ae an duine.

Gníomhaíocht CYP450 agus gníomhachtú meitibileach

Tá ról lárnach ag an teaghlach einsím P450 cytochrome (CYP450) i meitibileacht réimse leathan substaintí, lena n -áirítear go leor cógaisíochta, ceimiceáin chomhshaoil, agus carcanaiginí. Tá na heinsímí seo i gcodán an ae francach spreagtha S9 agus tá sé riachtanach chun ceimiceáin a mheas a d'fhéadfadh a bheith ina ngéineatocsaineach tar éis gníomhachtaithe meitibileach.

Tá go leor comhdhúile tocsaineach ar dtús ach is féidir leo a bheith tocsaineach tar éis meitibileachta san ae. Ní féidir na mutagens pro - seo (a éilíonn ar ghníomhachtú meitibileach a bheith ina só -ghineacha) agus pro - carcanaiginí (a éilíonn ar ghníomhachtú ailse a bheith ina gcúis le hailse) ach amháin trí thástálacha lena n -áirítear córas gníomhachtaithe meitibileach S9. Gan ionduchtú einsímí meitibileacha mar CYP450, is cosúil go bhfuil na substaintí seo neamhdhíobhálach i dtástálacha caighdeánacha géineatocsaineachta.

Trí thástálacha in vitro a chur leis an ae francach spreagtha, is féidir le taighdeoirí measúnú a dhéanamh ar an dóigh a n -idirghníomhaíonn substaint le heinsímí CYP450. Tá sé seo thar a bheith tábhachtach do chógaisíocht, toisc gur céim chriticiúil é meitibileacht ag einsímí CYP450 i gcógaschinéitic go leor drugaí.

Iarratais ar ae francach spreagtha S9

1. Tástáil AMES (ECFE 471)

An Tástáil Ames, atá leagtha amach sa TreoirlíneOECD 471, tá sé ar cheann de na modhanna is fearr agus is eol agus a úsáidtear go forleathan chun só -ghineacht a mheasúnú. Is éard atá i gceist leis ná tréithchineálacha baictéir Salmonella a nochtadh do cheimiceán tástála chun a fháil amach an spreagann sé sócháin a chuireann ar na baictéir dul ar ais chuig stát neamhspleách.

Chun an próiseas meitibileach daonna a ionsamhlú, is minic a chuirtear ae francach s9 le hae francach a spreagtar leis an gcóras tástála. Soláthraíonn an codán S9 na heinsímí riachtanacha, lena n -áirítear CYP450, a d'fhéadfadh a bheith ag teastáil chun an comhdhúil a mheitibiliú i bhfoirm níos imoibríoch a d'fhéadfadh sócháin a chur faoi deara sa DNA baictéarach. Ceadaíonn an meascán seo de S9 leis an tástáil AMES measúnú níos cuimsithí a dhéanamh ar phoitéinseal só -ghineacha trí mheicníochtaí só -ghineacha atá gníomhachtaithe go díreach agus meitibileach a athmhúnlú.

2. 2.Tástálacha sócháin (tástáil aberration crómasóim, tástáil micronucleus, agus measúnachtaí eile in vitro)

Chomh maith leis an tástáil AMES, úsáidtear tástálacha sócháin go coitianta chun poitéinseal géineatocsaineach ceimiceán a mheas. Tá na tástálacha seo níos cuimsithí maidir le measúnú a dhéanamh ar raon damáiste géiniteach, lena n -áirítear sócháin chromosómacha, sócháin ghéin, agus foirmiú micronuclei. Úsáidtear ae francach ionduchtaithe S9 i dtrialacha sócháin ar na cúiseanna seo a leanas:

Tástáil Micronucleus (OECD 487)

Aimsíonn an tástáil seo foirmiú micronuclei i gcealla, ar comhlachtaí beaga, extranuclear iad ina bhfuil blúirí de chrómasóim nó crómasóim iomlána nach bhfuil corpraithe sa núicléas le linn rannán na gcillíní. An tástáil micronucleusIs féidir le héifeachtaí clastogenic (crómasóim - briseadh) agus aneugenic (a théann i bhfeidhm ar líon crómasóim) a bhrath. Úsáidtear ae francach ionduchtaithe S9 anseo chun an tsubstaint tástála a ghníomhachtú go meitibileach, toisc nach mbíonn ach damáiste crómasómach ag roinnt ceimiceán nuair a bhíonn einsímí ae meitibiliúcháin orthu. Cuireann an codán S9 le híogaireacht na tástála trí an gníomhachtú meitibileach a d'fhéadfadh tarlú in vivo a ionsamhlú.

Tástáil Aberration Chromosomal (OECD 473)

Déanann an tástáil seo meastóireacht ar cibé an féidir le substaint damáiste struchtúrach a dhéanamh do chrómasóim trí shosanna, scriosadh, tras -aistrithe, nó cineálacha eile aberrations a aslú. Cosúil leis an tástáil micronucleus, anTástáil Aberration Chromosomalis féidir é a chur i bhfeidhm le gníomhachtú meitibileach nó gan é. Cuirtear ae francach ionduchtaithe S9 leis an gcóras tástála chun na próisis mheitibileacha san ae a aithris, rud a cheadaíonn measúnú a dhéanamh ar shubstaintí nach bhféadfadh damáiste crómasómach a dhéanamh ina bhfoirm bhunaidh ach a d'fhéadfadh é sin a dhéanamh tar éis meitibileacht ae.

Tábla.

Measúnú HPRT/HGPRT (OECD 476)

SaMeasúnú HPRT/HGPRT, cultúir hamstair na Síne (CHO nó V79) nó cealla lymphoblastoid daonna (TK6) nochta don cheimiceán tástála i láthair meascán meitibileach ae francach francach, a sholáthraíonn einsímí CYP450 a theastaíonn chun pro -mútagens a thiontú ina speicis DNA -imoibríocha. Tar éis cóireála gairid agus tréimhse léirithe seacht lá, tugtar dúshlán do chealla le 6 -thioguanine; Ní mhaireann ach clóin a bhfuil sócháin chaillteanais acu sa ghéin phosphoribosyltransferase hypoxanthine -guanine. Trí chomparáid a dhéanamh idir comhaireamh coilíneachta mutant agus inmharthanacht fhoriomlán, socraíonn taighdeoirí minicíocht sócháin a léiríonn poitéinseal géineatocsaineach má tá siad ardaithe go hatáirgthe thar rialuithe comhthráthacha agus stairiúla.

Tástálacha TK (OECD 490 & OECD 476)

AnTK measúnacht Fostaíonn cealla lymphoma luch L5178Y (OECD 490) nó cealla CHO (OECD 476) heitrisigeach innealtóireachta ag an lócas kinase thymidine. Tar éis nochtadh ceimiceach ± ​​S9 meascán, aisghabhann cealla agus tá siad plátáilte i meán ina bhfuil trifluorothymidine, a mharaíonn cealla TK -bhraite. Cruthaíonn mutants TK⁻ a mhaireann coilíneachtaí os cionn 10-14 lá, agus is minic a léiríonn mutants colosaithe beaga imeachtaí crómasóim agus mutants mór -choilíneachta ag léiriú sócháin phointe. Mar a tharla sa mheasúnacht HPRT/HGPRT, cinntíonn rialuithe déine cíteatocsaineachta agus tagarmharcanna dearfacha só -ghineach go léiríonn méaduithe breathnaithe i minicíocht sócháin go hiontaofa riosca géineatocsaineach cumaisc.

4. 4. Measúnú Riosca Ailse

Úsáidtear ae francach ionduchtaithe S9 freisin i staidéir atá dírithe ar mheasúnú a dhéanamh ar an ailse - is cúis le poitéinseal substaintí. Tríd na próisis mheitibileacha a tharlaíonn san ae daonna a ionsamhlú, is féidir leis an gcodán S9 cabhrú le comhdhúile a aithint a bhféadfadh meitibilítí imoibríocha a bheith mar thoradh orthu a d'fhéadfadh a bheith ina gcúis le DNA agus sócháin a chruthú a d'fhéadfadh ailse a bheith mar thoradh orthu.

Tástáil Feabhsaithe AMES le hamstair spreagtha ae s9

De réir na dtreoirlínte is déanaí a d'eisigh an Ghníomhaireacht Leigheasra Eorpach (EMA), d'fhéadfadh sé nach mbeadh an tástáil thraidisiúnta AMES íogair go leor chun poitéinseal só -ghineacha N - nitrosamine áirithe a bhrath, go háirithe n - nitrosodimethylamine (NDMA), i measc rudaí eile. Dá bhrí sin, moladh an tástáil Feabhsaithe AMES, a d'fhorbair an tIonad Náisiúnta um Thaighde Tocsaineolaíochta (NCTR), rannán de Riarachán Bia agus Drugaí na Stát Aontaithe (FDA), mar rogha níos iontaofa. An tástáil Feabhsaithe AMES a tugadh isteach ag cur leis an ae hamstair spreagtha S9, a rinne 30% ae francach S9 agus 30% ae hamstar S9. Ba chóir maoirseoirí desmosomal francach agus hamstar (S9S) a ullmhú ó aenna creimire a ndéileáiltear leo le einsím cytochrome P450 - substaintí a spreagadh. Trí úsáid a bhaint as hamstar ionduchtaithe Ae S9, déanann an tástáil fheabhsaithe seo ionsamhlú níos fearr ar mheitibileacht an duine agus méadaíonn sé iontaofacht na dtorthaí.

Deireadh

Is uirlis chriticiúil é ae francach spreagtha S9 i dtástáil géineatocsaineachta, ag cuidiú le taighdeoirí agus le gníomhaireachtaí rialála measúnú a dhéanamh ar phoitéinseal só -ghineacha agus carcanaigineach ceimiceán. Trí chóras gníomhachtaithe meitibileach a sholáthar, cuireann sé le cumas na dtástálacha mar thástáil Ames, tástálacha sócháin, agus staidéir ghníomhaíochta CYP450 chun substaintí a bhrath a éilíonn go mbeadh gníomhachtú meitibileach ina ngéineatocsaineach. Tá na hiarratais riachtanach chun sábháilteacht drugaí nua, ceimiceáin agus táirgí tomhaltóra a chinntiú. Leis an ról atá aige maidir le meitibileacht ae an duine a ionsamhlú, is cuid fíor -riachtanach de mheasúnuithe nua -aimseartha na tocsaineolaíochta agus na measúnuithe sábháilteachta rialála é an codán ae francach S9.