इम्यूनोलॉजिकल रिसर्च में स्प्लेनोसाइट्स: प्रजातियों और अलगाव, ठंड, विगलन चरणों में

कीवर्ड:स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएलएस); Cynomolgus बंदर स्प्लेनोसाइट्स; रीसस बंदर स्प्लेनोसाइट्स; कुत्ते स्प्लेनोसाइट्स; कैनाइन स्प्लेनोसाइट्स; चूहे स्प्लेनोसाइट्स; माउस स्प्लेनोसाइट्स; चूहे स्प्लेनोसाइट्स; खरगोश स्प्लेनोसाइट्स; स्प्लेनोसाइट्स अलगाव; फ्रीजिंग स्प्लेनोसाइट्स; थपकी स्प्लेनोसाइट्स

Iphase उत्पाद

स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएलएस)तिल्ली से अलग प्रतिरक्षा कोशिकाओं की एक विषम आबादी है, एक महत्वपूर्ण अंग रक्त को छानने, प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को बढ़ाने और होमोस्टैसिस को बनाए रखने में शामिल एक महत्वपूर्ण अंग है। इन कोशिकाओं में लिम्फोसाइट्स (टी कोशिकाएं, बी कोशिकाएं), मैक्रोफेज, डेंड्राइटिक कोशिकाएं और प्राकृतिक हत्यारे (एनके) कोशिकाएं शामिल हैं, जो सभी अनुकूली और जन्मजात प्रतिरक्षा में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। स्प्लेनोसाइट्स का व्यापक रूप से प्रीक्लिनिकल और ट्रांसलेशनल रिसर्च में प्रतिरक्षा समारोह, वैक्सीन विकास, ऑटोइम्यून रोगों और कैंसर इम्यूनोथेरेपी का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है।

स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएलएस) की भूमिका और रचना

प्लीहा के भीतर, स्प्लेनोसाइट्स अलग -अलग क्षेत्रों में रहते हैं: लाल लुगदी, जो रक्त को छानती है और पुराने लाल रक्त कोशिकाओं को रीसायकल करती है, और सफेद लुगदी, जहां प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं शुरू की जाती हैं। सफेद लुगदी को टी सेल ज़ोन और बी सेल फॉलिकल्स में व्यवस्थित किया जाता है, जो एंटीजन के बीच इंटरैक्शन की सुविधा प्रदान करता है। कोशिकाओं और लिम्फोसाइटों को प्रस्तुत करना। यह अनूठी वास्तुकला स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएलएस) को इम्यूनोलॉजिकल एसेज़ जैसे एलिसपॉट, फ्लो साइटोमेट्री और मिश्रित लिम्फोसाइट प्रतिक्रियाओं में एक शक्तिशाली उपकरण बनाता है।

प्रजातियां - विशिष्ट स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएलएस)

-सिनोमोलगस बंदर स्प्लेनोसाइट्स:Cynomolgus बंदर स्प्लेनोसाइट्स का उपयोग प्रीक्लिनिकल रिसर्च में किया जाता है क्योंकि वे मानव प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की अधिक बारीकी से नकल करते हैं, जिससे Cynomolgus बंदर स्प्लेनोसाइट्स को अनुवाद संबंधी अध्ययन के लिए आदर्श बनाते हैं।

-रीसस बंदर स्प्लेनोसाइट्स:रीसस बंदर स्प्लेनोसाइट्स इसी तरह मनुष्यों के लिए उनके करीबी इम्यूनोलॉजिकल समानता के लिए मूल्यवान हैं। रीसस बंदर स्प्लेनोसाइट्स का उपयोग करने वाले अध्ययन पशु मॉडल और नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के बीच अंतर को पाटने में मदद करते हैं।

-डॉग स्प्लेनोसाइट्स / कैनाइन स्प्लेनोसाइट्स:पशु चिकित्सा अनुसंधान में, कुत्ते के स्प्लेनोसाइट्स (या कैनाइन स्प्लेनोसाइट्स) का उपयोग कैनाइन में प्रतिरक्षा विकारों का अध्ययन करने और मानव प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के साथ तुलना करने के लिए किया जाता है।

-खरगोश: एंटीबॉडी उत्पादन और वैक्सीन विकास पर अध्ययन में खरगोश स्प्लेनोसाइट्स महत्वपूर्ण हैं। खरगोश स्प्लेनोसाइट्स उन विवरणों को प्रकट करने में मदद करते हैं जो माउस स्प्लेनोसाइट्स या चूहे के स्प्लेनोसाइट्स से भिन्न हो सकते हैं।

-माउस स्प्लेनोसाइट्स / चूहे स्प्लेनोसाइट्स:माउस स्प्लेनोसाइट्स इम्यूनोलॉजी में सबसे अधिक बार अध्ययन किए गए स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएलएस) में से एक हैं। चूहों से अलगाव स्प्लेनोसाइट्स के लिए प्रोटोकॉल अच्छी तरह से स्थापित हैं, और दोनों माउस स्प्लेनोसाइट्स और चूहों स्प्लेनोसाइट्स का उपयोग प्रवाह साइटोमेट्री, एलिसपॉट और अन्य कार्यात्मक assays के लिए किया जाता है।

-चूहे स्प्लेनोसाइट्स:चूहे स्प्लेनोसाइट्स इम्युनोटॉक्सिकोलॉजी और वैक्सीन अध्ययन के लिए एक पूरक मॉडल प्रदान करते हैं। चूहे के स्प्लेनोसाइट्स की तुलना अक्सर माउस स्प्लेनोसाइट्स के साथ की जाती है ताकि अंतर -अंतर को समझा जा सके।

स्प्लेनोसाइट्स अलगाव

स्प्लेनोसाइट्स अलगावविभिन्न शोध अनुप्रयोगों में उपयोग किए जाने वाले तिल्ली से प्रतिरक्षा कोशिकाओं को निकालने की प्रक्रिया है, जैसे कि प्रवाह साइटोमेट्री, साइटोकाइन उत्पादन assays, या मिश्रित लिम्फोसाइट प्रतिक्रियाएं।

तिल्ली को सड़न रोकनेवाला परिस्थितियों में हटा दिया गया था, अलगाव समाधान में जमीन और एक बाँझ ट्यूब में स्थानांतरित कर दिया गया था जिसमें आरपीएमआई 1640 मध्यम था। ल्यूकोसाइट परत को centrifugation के बाद सावधानी से एकत्र किया गया था। कोशिकाओं को RPMI 1640 मध्यम, सेंट्रीफ्यूज्ड और सतह पर तैरनेवाला के साथ धोया गया। इस धोने के कदम को 1 - 2 बार दोहराया गया था, इससे पहले कि अलग -थलग कोशिकाओं का उपयोग आगे के प्रयोगों के लिए किया गया था।

फ्रीजिंग स्प्लेनोसाइट्स

फ्रीजिंग स्प्लेनोसाइट्सभविष्य के उपयोग के लिए कोशिकाओं को संरक्षित करने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है। क्रायोप्रेज़र्वेशन शोधकर्ताओं को उनकी व्यवहार्यता या कार्यक्षमता से समझौता किए बिना विस्तारित अवधि के लिए स्प्लेनोसाइट्स को स्टोर करने की अनुमति देता है।

अलगाव कदम से अच्छी तरह से सेंट्रीफ्यूज्ड सेल निलंबन के सतह पर तैरनेवाला को छोड़ दिया जाता है और सेल एकाग्रता को ठंड के माध्यम में पतला किया गया था। प्रत्येक ठंड ट्यूब में एक विभाज्य जोड़ें और एक ठंड कंटेनर में स्थानांतरित करें, यह सुनिश्चित करें कि कोशिकाएं निलंबन में रहें। जल्दी से जमने वाले कंटेनरों को एक - 80 ° C फ्रीजर में फ्रीज करें। ट्रांसफर पर - 150 ° C फ्रीजर कंटेनर (या तरल नाइट्रोजन टैंक) लंबे समय के लिए - टर्म स्टोरेज।

थपकी स्प्लेनोसाइट्स

थपकी स्प्लेनोसाइट्सक्रायोप्रेज़र्वेशन के बाद उच्च सेल व्यवहार्यता और कार्यक्षमता सुनिश्चित करने के लिए सावधानी से किया जाना चाहिए। विगलन प्रक्रिया आमतौर पर DMSO और ICE क्रिस्टल गठन के हानिकारक प्रभावों को कम करने के लिए तेज होती है।

क्रायोट्यूब को 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में स्थानांतरित किया जाता है और तब तक पिघलाया जाता है जब तक कि केवल ठीक बर्फ के क्रिस्टल ट्यूबों में नहीं रहे। जमे हुए ट्यूब में 0.5 - 1ml सेल कल्चर माध्यम जोड़ें, resuspend और सेल संस्कृति माध्यम से भरे 15ml ट्यूब में निलंबन को स्थानांतरित करें। सेंट्रीफ्यूज, सतह पर तैरनेवाला निकालें और सेल व्यवस्था को ढीला करने के लिए ट्यूब को टैप करें। सेल कल्चर मीडियम का 1ml जोड़ें, एक पिपेट के साथ ब्लो करें और रेजसेंपें, 15 एमएल की मात्रा में मध्यम जोड़ें। Centrifuge, de - SuperNatize, 1ml सेल कल्चर माध्यम जोड़ें, अपेक्षित सेल एकाग्रता के अनुसार माध्यम जोड़ते हुए। एक CO2 इनक्यूबेटर में कोशिकाओं को रखें और ढक्कन में एक मामूली अंतर के साथ 1H के लिए इनक्यूबेट करें। ऊष्मायन के अंत में, resuspend और 1min के लिए रवाना होने के लिए एकत्रित सेल मलबे को अवक्षेपित करने की अनुमति देने के लिए। वर्षा के बिना सेल निलंबन को सावधानीपूर्वक एक नए 15ml ट्यूब में स्थानांतरित कर दिया गया था। सेल गतिविधि को निर्धारित करने के लिए कोशिकाओं को गिना गया था।

निष्कर्ष

स्प्लेनोसाइट्स, उनकी विविध रचना और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में महत्वपूर्ण भूमिका के साथ, प्रतिरक्षाविज्ञानी अनुसंधान में अमूल्य उपकरण हैं। चाहे कृन्तकों, प्राइमेट्स, या खरगोशों और कुत्तों जैसे अन्य प्रजातियों से प्राप्त हो, स्प्लेनोसाइट्स प्रतिरक्षा समारोह, रोग तंत्र, वैक्सीन विकास और कैंसर इम्यूनोथेरेपी में महत्वपूर्ण अध्ययन की सुविधा प्रदान करते हैं। अलगाव, ठंड और विगलन की प्रक्रियाएं उनकी अखंडता और व्यवहार्यता को संरक्षित करने के लिए आवश्यक हैं, शोधकर्ताओं को विभिन्न मॉडलों में सेलुलर गतिशीलता का पता लगाने में सक्षम बनाती हैं। जैसा कि इम्यूनोलॉजी की हमारी समझ गहरी होती है, स्प्लेनोसाइट्स का उपयोग मानव और पशु चिकित्सा दोनों में प्रगति सुनिश्चित करने के लिए, प्रीक्लिनिकल अध्ययन और नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के बीच अंतर को कम करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाएगा।