Splenocytes nan rechèch iminolojik: atravè espès ak izolasyon, lè w konjele, etap efondreman

Mo kle:Splenocytes (SPLS); Cynomolgus makak splenosit; Rhesus makak splenosit; Splenosit chen; Splenosit kanin; Splenosit rat; Splenosit sourit; Sourit splenosit; Splenosit lapen; Izolasyon splenosit; Splenocytes konjelasyon; Dhawing splenosit

Pwodwi iPhase

Splenocytes (SPLS)se yon popilasyon etewojèn nan selil iminitè izole nan larat la, yon ògàn vital ki enplike nan filtraj san, monte repons iminitè, ak kenbe omeyostazi. Selil sa yo gen ladan lenfosit (selil T, selil B), macrophages, selil dendritik, ak selil asasen natirèl (NK), tout ki jwe wòl kritik nan iminite adaptasyon ak natirèl. Splenocytes yo lajman itilize nan rechèch pre -klinik ak translasyonèl yo etidye fonksyon iminitè, devlopman vaksen, maladi auto -immunes, ak kansè nan iminoterapi.

Wòl la ak konpozisyon nan splenosit (SPLS)

Nan larat la, splenosit abite nan rejyon distenk: kaka wouj la, ki filtè san ak resikle fin vye granmoun globil wouj nan san, ak kaka a blan, kote repons iminitè yo inisye. Se kaka a blan òganize nan zòn selil T ak f folikulèr selil, fasilite entèraksyon ant antigen - prezante selil ak lenfosit. Achitekti inik sa a fè splenosit (SPL) yon zouti pwisan nan analiz iminolojik tankou elispot, sitometri koule, ak reyaksyon lenfosit melanje.

Espès - splenosit espesifik (SPLs)

-Cynomolgus makak splenosit:Cynomolgus makak splenosit yo te itilize nan rechèch pre -klinik paske yo pi byen imite repons iminitè moun, fè cynomolgus makak splenosit ideyal pou etid translasyonèl.

-Rhesus makak splenosit:Rhesus makak splenosit yo menm jan an valè pou fèmen resanblans iminolojik yo ak moun. Etid lè l sèvi avèk splenosit makak rhesus ede pon diferans ki genyen ant modèl bèt ak aplikasyon pou klinik.

-Splenosit chen / splenosit kanin:Nan rechèch veterinè, splenosit chen (oswa splenosit kanin) yo te itilize yo etidye maladi iminitè nan kanin ak trase konparezon ak repons imen imen.

-Lapen splenosit: Splenosit lapen yo enpòtan nan etid sou pwodiksyon antikò ak devlopman vaksen an. Splenosit lapen ede revele detay ki ka diferan de splenosit sourit oswa splenosit rat.

-Sourit splenosit / sourit splenosit:Splenosit sourit yo se youn nan splenosit yo ki pi souvan etidye (SPLs) nan iminoloji. Pwotokòl pou splenosit izolasyon soti nan sourit yo byen etabli, ak tou de splenosit sourit ak sourit splenosit yo te itilize pou sitometri koule, elispot, ak lòt analiz fonksyonèl.

-Splenosit rat:Splenosit rat bay yon modèl konplemantè pou imunotoksikoloji ak etid vaksen yo. Splenocytes rat yo souvan konpare ak splenosit sourit yo konprann diferans entèspecies.

Splenosit izolasyon

Splenosit izolasyonse pwosesis la nan èkstraksyon selil iminitè soti nan larat la yo dwe itilize nan aplikasyon pou rechèch divès kalite, tankou sitometri koule, analiz pwodiksyon sitokin, oswa reyaksyon lenfosit melanje.

Larat la te retire nan kondisyon aseptik, tè nan solisyon izolasyon ak transfere nan yon tib esteril ki gen RPMI medyòm 1640. Te kouch nan leykosit ak anpil atansyon kolekte apre santrifigasyon. Selil yo te lave ak RPMI medyòm 1640, santrifuje ak supènant la abandone. Etap lave sa a te repete 1 - 2 fwa anvan selil yo izole yo te itilize pou plis eksperyans.

Konjelasyon splenosit

Konjelasyon splenositse yon etap enpòtan pou konsève selil pou itilize nan lavni. Cryopreservation pèmèt chèchè yo magazen splenosit pou peryòd pwolonje san yo pa konpwomèt viabilité yo oswa fonctionnalités.

Supernatant la nan sispansyon an selil byen santrifuje soti nan etap la izolasyon se abandone ak konsantrasyon an selil te dilye nan medyòm lè w konjele. Ajoute yon alikòt nan chak tib lè w konjele epi transfere nan yon veso konjelasyon, asire ke selil yo rete nan sispansyon. Rapidman friz resipyan konjelasyon yo nan yon frizè - 80 ° C. Transfere nan - 150 ° C frizè veso (oswa likid tank nitwojèn) pou long - depo tèm.

Dhawing splenosit

Dhawing splenosityo dwe fè ak anpil atansyon asire viabilite segondè selil ak fonctionnalités apre kriyo -konsèvasyon. Pwosesis la deglase se tipikman vit pou misyon pou minimize efè yo domaj nan DMSO ak glas fòmasyon kristal.

Cryotubes yo transfere nan yon beny dlo 37 ° C ak deglase jouk sèlman kristal glas amann rete nan tib yo. Add 0.5 - 1ml nan medyòm kilti selil nan tib la nan frizè, resuspend ak transfere sispansyon an nan yon tib 15ml plen ak medyòm kilti selil. Santrifijez, retire supènant ak tiyo tib la dekole aranjman selil la. Add 1ml nan medyòm kilti selil, kònen ak resuspend ak yon pipèt, ajoute mwayen nan yon volim nan 15 ml. Santrifij, DE - Supernatize, ajoute 1ml nan medyòm kilti selil, ajoute mwayen dapre konsantrasyon selil espere. Mete selil yo nan yon enkibatè CO2 ak enkubate pou 1H ak yon espas ti tay nan kouvèti a. Nan fen enkubasyon an, resuspend epi kite pou 1min yo ki pèmèt debri nan selil agrégées provoqués. Sispansyon selil la san presipitasyon te transfere ak anpil atansyon nan yon nouvo tib 15ml. Selil yo te konte pou detèmine aktivite selil yo.

Konklizyon

Splenocytes, ak konpozisyon divès yo ak wòl esansyèl nan repons iminitè, yo se zouti anpil nan rechèch iminolojik. Si sòti nan rat, primat, oswa lòt espès tankou lapen ak chen, splenosit fasilite etid kritik nan fonksyon iminitè, mekanism maladi, devlopman vaksen, ak iminoterapi kansè. Pwosesis yo nan izolasyon, lè w konjele, ak deglase yo esansyèl pou konsève entegrite yo ak viabilité, pèmèt chèchè yo eksplore dinamik selilè nan tout modèl divès kalite. Kòm konpreyansyon nou nan iminoloji apwofondi, itilize nan splenosit yo ap kontinye enstrimantal nan pon an diferans ki genyen ant etid pre -klinik ak aplikasyon pou klinik, asire pwogrè nan tou de moun ak medsin veterinè.