Miltisfrumur í ónæmisfræðilegum rannsóknum: þvert á tegundir og einangrun, frystingu, þíðingarþrep

Lykilorð:Miltisfrumur (SPLS); Cynomolgus apa miltisfrumur; Rhesus apa miltisfrumur; Hund miltisfrumur; Miltisfrumur hunda; Rottu miltisfrumur; Miltisfrumur músar; Mýs miltisfrumur; Kanín miltisfrumur; Einangrun miltisfrumna; Frysting miltisfrumna; Þíðandi miltisfrumur

IPhase vara

Miltisfrumur (SPLS)eru ólíkir íbúar ónæmisfrumna einangraðir frá milta, lífsnauðsynlegt líffæri sem tekur þátt í að sía blóð, aukast ónæmissvörun og viðhalda homeostasis. Þessar frumur innihalda eitilfrumur (T frumur, B frumur), átfrumur, tindarfrumur og náttúrulegar morðingja (NK) frumur, sem allar gegna mikilvægum hlutverkum í aðlögunarhæfu og meðfæddu friðhelgi. Miltisfrumur eru mikið notaðar í forklínískum og þýðingarrannsóknum til að rannsaka ónæmisaðgerð, þróun bóluefna, sjálfsofnæmissjúkdóma og ónæmismeðferð krabbameins.

Hlutverk og samsetning miltisfrumna (SPLS)

Innan milta eru miltisfrumur búsettar á mismunandi svæðum: rauða kvoða, sem síar blóð og endurvinnur gömul rauð blóðkorn, og hvíta kvoða, þar sem ónæmissvörun er hafin. Hvíti kvoða er skipulögð í T frumusvæði og B frumu eggbú, sem auðveldar milliverkanir milli mótefnavaka - kynningar frumna og eitilfrumna. Þessi einstaka arkitektúr gerir miltósýrur (SPLS) að öflugu tæki í ónæmisfræðilegum prófum eins og ELISPOT, flæðisfrumur og blönduð eitilfrumuviðbrögð.

Tegundir - Sértækar miltisfrumur (SPL)

-Cynomolgus apa miltisfrumur:Cynomolgus apa miltisfrumur eru notaðar í forklínískum rannsóknum vegna þess að þær líkja betur eftir ónæmissvörun manna, sem gerir cynomolgus apa miltisfrumur tilvalnar fyrir þýðingarrannsóknir.

-Rhesus apa miltisfrumur:Rhesus apa miltisfrumur eru álíka metnar fyrir náin ónæmisfræðileg líkt og menn. Rannsóknir sem nota Rhesus apa miltisfrumur hjálpa til við að brúa bilið milli dýralíkana og klínískra notkunar.

-Hund miltisfrumur / hunda miltisfrumur:Í dýralækningum eru miltisfrumur hunda (eða miltisfrumur hunda notaðir til að rannsaka ónæmissjúkdóma í vígtennum og til að gera samanburð við ónæmissvörun manna.

-Kanínu miltisfrumur: Kanínufrumur eru mikilvægar í rannsóknum á mótefnaframleiðslu og þróun bóluefna. Miltisfrumur í kanínum hjálpa til við að koma í ljós upplýsingar sem geta verið frábrugðnar miltisfrumum músar eða miltisfrumur.

-Miltisfrumur / mús miltisfrumur:Miltisfrumur músar eru ein af mest rannsökuðu miltisfrumum (SPL) í ónæmisfræði. Samskiptareglur fyrir einangrunar miltisfrumur frá músum eru vel staðfestar og bæði miltisfrumur músar og músfrumur eru notaðar við flæðisfrumur, ELISPOT og aðrar virkar prófanir.

-Rottu miltisfrumur:Rottu miltisfrumur veita viðbótar líkan fyrir ónæmis eiturverkanir og bólusetningarrannsóknir. Rottu miltisfrumur eru oft bornar saman við miltisfrumur músar til að skilja mun á milli.

Einangrun miltisfrumna

Einangrun miltisfrumnaer ferlið við að vinna úr ónæmisfrumum úr milta sem á að nota í ýmsum rannsóknarnotkun, svo sem flæðisfrumur, cýtókínframleiðslupróf eða blandað eitilfrumuviðbrögð.

Miltin var fjarlægð við smitgát, maluð í einangrunarlausn og flutt í sæfða rör sem innihélt RPMI 1640 miðil. Hvítfrumulaginu var safnað vandlega eftir skilvindu. Frumurnar voru þvegnar með RPMI 1640 miðli, skilvindt og flotið fargað. Þetta þvottaskref var endurtekið 1 - 2 sinnum áður en einangruðu frumurnar voru notaðar til frekari tilrauna.

Frystingu miltisfrumna

Frystingu miltisfrumnaer lykilatriði til að varðveita frumur til notkunar í framtíðinni. Kyrningavernd gerir vísindamönnum kleift að geyma miltisfrumur í langan tíma án þess að skerða hagkvæmni þeirra eða virkni.

Flotvatni vel skilvindts frumusvifs frá einangrunarskrefinu er fargað og frumustyrkur var þynntur í frystingu. Bætið skammtímanum við hvert froströr og færðu í frystingarílát og tryggðu að frumurnar haldist í sviflausn. Frystu frystiílátin fljótt í frysti - 80 ° C. Flutningur yfir í - 150 ° C frystiílát (eða fljótandi köfnunarefni) fyrir langan tíma - geymslu á tíma.

Þíðandi miltisfrumur

Þíðandi miltisfrumurverður að gera vandlega til að tryggja háa frumu lífvænleika og virkni eftir kreppun. Þíðunarferlið er venjulega hratt til að lágmarka skaðleg áhrif DMSO og ískristalmyndunar.

Kryotubes eru flutt í 37 ° C vatnsbað og þíður þar til aðeins fínir ískristallar héldu áfram í slöngunum. Bættu 0,5 - 1 ml af frumuræktarmiðli við frosna rörið, blandaðu aftur og flytjið sviflausnina yfir í 15 ml rör fyllt með frumuræktarmiðli. Settu, fjarlægðu flotið og bankaðu á slönguna til að losa frumufyrirkomulagið. Bættu við 1 ml af frumuræktarmiðli, blása og blandaðu aftur með pípettu, bættu miðlungs við rúmmál 15 ml. skilvindu, de - supernatize, bætið við 1 ml af frumuræktarmiðli og bætið miðli í samræmi við væntanlegan frumuþéttni. Settu frumurnar í CO2 útungunarvél og ræktuðu í 1 klst. Með smá bil í lokinu. Í lok ræktunarinnar skaltu endursenda og láta í 1 mínútur til að leyfa samanlagðri frumu rusl. Frumusviflausnin án úrkomu var flutt vandlega í nýtt 15ml rör. Frumur voru taldar til að ákvarða virkni frumna.

Niðurstaða

Miltisfrumur, með fjölbreyttri samsetningu og lykilhlutverki í ónæmissvörun, eru ómetanleg tæki í ónæmisfræðilegum rannsóknum. Hvort sem það er dregið af nagdýrum, prímötum eða öðrum tegundum eins og kanínum og hundum, auðvelda miltisfrumur mikilvægar rannsóknir á ónæmisstarfsemi, sjúkdómsleiðum, þróun bóluefna og ónæmismeðferð krabbameins. Ferlar einangrunar, frystingar og þíðingar eru nauðsynlegir til að varðveita ráðvendni þeirra og lífvænleika, sem gerir vísindamönnum kleift að kanna virkni frumna í ýmsum gerðum. Þegar skilningur okkar á ónæmisfræði dýpkar mun notkun miltisfrumna halda áfram að eiga þátt í að brúa bilið á milli forklínískra rannsókna og klínískra notkunar og tryggja framfarir bæði í mönnum og dýralækningum.