免疫学的研究における脾細胞：種と分離、凍結、解凍ステップを超えて

キーワード：脾細胞（SPLS）; CYNOMOLGUSモンキー脾細胞;アカゲザル脾細胞;犬の脾細胞;犬の脾細胞;ラット脾細胞;マウス脾細胞;マウス脾細胞;ウサギ脾細胞;脾細胞の分離;脾細胞凍結;解凍脾細胞

iPhase製品

脾細胞（SPLS）脾臓から分離された免疫細胞の不均一な集団であり、血液のろ過、免疫応答の高まり、恒常性の維持に関与する重要な臓器です。これらの細胞には、リンパ球（T細胞、B細胞）、マクロファージ、樹状細胞、および天然キラー（NK）細胞が含まれます。これらはすべて、適応免疫と自然免疫において重要な役割を果たします。脾細胞は、免疫機能、ワクチン発達、自己免疫疾患、および癌免疫療法を研究するために、前臨床および翻訳研究で広く使用されています。

脾細胞の役割と組成（SPL）

脾臓内では、脾細胞は異なる領域に存在します：血液をろ過して古い赤血球をリサイクルする赤いパルプと、免疫応答が開始される白いパルプ。白いパルプは、T細胞ゾーンとB細胞卵胞に組織され、抗原とリンパ球の間の相互作用を促進します。このユニークなアーキテクチャにより、脾細胞（SPLS）は、ELISPOT、フローサイトメトリー、混合リンパ球反応などの免疫学的アッセイの強力なツールになります。

種-特定の脾細胞（SPLS）

-CYNOMOLGUSモンキー脾細胞:シノモルガスモンキー脾細胞は、ヒト免疫応答をより密接に模倣し、シノモルガスモンキー脾細胞を翻訳研究に最適にするため、前臨床研究で使用されます。

-アカゲザル脾細胞:アカゲザル脾細胞は、人間との密接な免疫学的類似性についても同様に評価されています。アカゲザル脾細胞を使用した研究は、動物モデルと臨床応用の間のギャップを埋めるのに役立ちます。

-犬の脾細胞 /犬の脾細胞:獣医研究では、犬の脾細胞（または犬の脾細胞）を使用して、犬の免疫障害を研究し、ヒト免疫応答と比較します。

-ウサギ脾細胞: ウサギ脾細胞は、抗体産生とワクチンの発達に関する研究において重要です。ウサギ脾細胞は、マウス脾細胞やラット脾細胞とは異なる可能性のある詳細を明らかにするのに役立ちます。

-マウス脾細胞 /マウス脾細胞:マウス脾細胞は、免疫学で最も頻繁に研究されている脾細胞（SPL）の1つです。マウスからの分離脾細胞のプロトコルは十分に確立されており、マウス脾細胞とマウスの両方の脾細胞の両方が、フローサイトメトリー、エリスポット、およびその他の機能アッセイに使用されます。

-ラット脾細胞:ラット脾細胞は、免疫毒性およびワクチンの研究のための補完的なモデルを提供します。ラット脾細胞は、種間の違いを理解するために、マウス脾細胞と比較されることがよくあります。

脾細胞の分離

脾細胞の分離フローサイトメトリー、サイトカイン産生アッセイ、混合リンパ球反応など、さまざまな研究用途で使用する脾臓から免疫細胞を抽出するプロセスです。

脾臓は無菌条件下で除去され、分離溶液を粉砕し、RPMI 1640培地を含む滅菌チューブに移しました。白血球層は、遠心分離後に慎重に収集されました。細胞をRPMI 1640培地で洗浄し、遠心分離し、上清を破棄した。この洗浄ステップは、分離細胞がさらなる実験に使用される前に1 - 2回繰り返されました。

凍結脾細胞

凍結脾細胞将来の使用のために細胞を保存するための重要なステップです。凍結保存により、研究者は、生存率や機能を損なうことなく、脾細胞を長期間保存することができます。

分離ステップからのウェル遠心分離細胞懸濁液の上清が破棄され、細胞濃度が凍結培地で希釈されました。各凍結チューブにアリコートを追加し、凍結容器に移し、細胞が懸濁状態にあることを確認します。 - 80°Cの冷凍庫で凍結容器をすばやく凍結します。長期保管のために、- 150°Cフリーザー容器（または液体窒素タンク）に移します。

解凍脾細胞

解凍脾細胞凍結保存後に高い細胞の生存率と機能を確保するために慎重に行う必要があります。通常、解凍プロセスは、DMSOと氷の結晶形成の損傷効果を最小限に抑えるために高速です。

クライチューブは、37°C​​の水浴に移動し、チューブに細かい氷の結晶のみが残るまで解凍されます。 0.5 - 1mlの細胞培養培地を冷凍チューブに加え、再懸濁し、細胞培養培地で満たされた15mLチューブに懸濁液を移します。遠心分離し、上清を取り外し、チューブをタップして細胞配置を緩めます。 1mlの細胞培養培地を加え、ピペットで吹き、再懸濁し、媒体を15 mLのボリュームに加えます。遠心分離機、de - superhatize、1mlの細胞培養培地を加え、予想される細胞濃度に応じて培地を加えます。細胞をCO2インキュベーターに入れ、蓋のわずかな隙間で1時間インキュベートします。インキュベーションの終わりに、再懸濁して1分間出発して、凝集した細胞の破片が沈殿するようにします。降水のない細胞懸濁液は、新しい15mlチューブに慎重に移しました。細胞の活性を決定するために細胞をカウントしました。

結論

脾細胞は、その多様な組成と免疫応答における極めて重要な役割を伴う、免疫学的研究における貴重なツールです。げっ歯類、霊長類、またはウサギや犬などの他の種に由来するかどうかにかかわらず、脾細胞は免疫機能、疾患メカニズム、ワクチン発達、および癌免疫療法の重要な研究を促進します。分離、凍結、解凍のプロセスは、その完全性と実行可能性を維持するために不可欠であり、研究者がさまざまなモデルで細胞のダイナミクスを探索できるようにします。免疫学の理解が深まるにつれて、脾細胞の使用は、前臨床研究と臨床応用のギャップを埋めるのに貢献し続け、人間と獣医の両方の進歩を確保します。