Fraksi Rat Rat Induk: Sistem aktifitas metabolis kanggo genotoksi vitro lan tes mutasi

Tembung kunci: OECD 471, OECD 473, OECD 476, Uji Mutasi, Genotoksitas, Tujuwan Genetik, Uji Ames, Micronucleus, HPRT / HGPRTS Assay, TK Assay, TK Assay

Produk Iphase

Pambuka

Dipinteran kanthi ati ati S9minangka komponen penting kanggo netepkeKeracunan GenetikPotensi bahan kimia, utamane ing toksikologi peraturan. Umume digunakake ing kombinasi karo assay, kayataUji Ames lanTes Mutasi, kanggo ngevaluasi sifat-sifat senyawa mutagenic. Kanthi nyedhiyakake sistem enzim ing sitokrome P450 (CYP450), fraksi sing ora ana gandhengane sing nduwe pengaruh ing ati, mbantu nggawe bahan kimia bisa nyebabake mutasi utawa kanker genetik.

Dipinteran kanthi ati ati S9

Fraksi ati S9 nuduhake postingan - Supernatat mitokondria sing dipikolehi saka homogeniasi homogeniasi tikus sawise sawetara langkah centrifugation. Tembung "mlebu" nuduhake perawatan tikus kanthi senyawa khusus sing ningkatake ahli enzim ati, utamane para metabolisme kanthi macem-macem xenobiotik.

Singkirane tikus s9 sing didorong ngemot macem-macem enzim sing melu ing metabolisme fase II II. Iki kalebu enzim kayata cytochrome p450 monooksikenase, sing nggampangake biotransformasi oksidatif saka substrat, saengga niru metabolisme ati manungsa.

Aktivitas CYP450 lan aktifitas metabolis

Keluarga Enzim Cytochrome P450 (CYP450) main peran penting ing metabolisme macem-macem bahan, kalebu akeh farmasi, bahan kimia lingkungan, lan karsinogen. Bingking tikus sized sing didorong ngemot enzim iki lan penting kanggo ngevaluasi bahan kimia sing bisa mung dadi genotoxic sawise aktifitas metabolis.

Akeh senyawaan wiwitane ora - beracun nanging bisa dadi beracun sawise metabolisme ing ati. Iki Pro - Mutage (sing mbutuhake aktifitas metabolis dadi Mutagenic) lan Pro - Carcinogen (sing mbutuhake aktifitas kanggo nyebabake kanker) mung bisa dideteksi sistem aktifitas metabolis S9. Tanpa induksi enzim metabolis kaya CYP450, bahan kasebut bisa uga ora mbebayani ing tes genotoxisitas standar.

Kanthi nambahake ati-ati sing diindakake S9 ing vitro, peneliti bisa ngevaluasi kepiye zat sesambungan karo enzim CYP450. Iki penting kanggo farmasi, minangka metabolisme kanthi Enzim CYP450 minangka langkah kritis ing farmakokinetik saka akeh obat.

Aplikasi saka Induched Rat Liver S9

1. Tes 1. Uji Ames (OECD 471)

Tes ames, sing digarisake ing pedomanOECD 471, minangka salah sawijining cara sing paling apik - sing dikenal lan akeh digunakake kanggo nganalisa mutagenitas. Iki kalebu galur bakteri salmonella menyang bahan kimia kanggo ndeleng apa bisa nyurung mutasi sing nyebabake bakteri kanggo mbalikke menyang histidine - Negara Independent.

Kanggo nyonto Proses metabolik manungsa, nyurung ati S9 asring ditambahake menyang sistem test. Fraksi S9 nyedhiyakake enzim sing dibutuhake, kalebu Cyp450, sing bisa dibutuhake kanggo metabolisme senyawa kasebut menyang bentuk sing reaktif sing bisa nyebabake mutasi ing DNA bakteri. Kombinasi S9 iki kanthi tes Ames ngidini kanggo penilaian mutagen sing luwih lengkap kanggo niru mekanisme mutagenis langsung lan metagenic sing diaktifake langsung.

2. 2.Tes mutasi (tes aberrasi kromosom, tes mikronugleus, lan liyane ing vitro assays)

Saliyane tes Ames, tes mutasi umume digunakake kanggo ngevaluasi potensial genotoxic saka bahan kimia. Tes kasebut luwih lengkap kanggo netepke sawetara karusakan genetik, kalebu mutasi kromosom, mutasi, lan pambentukan mikronuclei. Induced Rat Hive S9 digunakake ing tes mutasi kanggo alasan ing ngisor iki:

Tes Micronucleus (OECD 487)

Tes iki ndeteksi pembentukan mikronuclei ing sel, sing cilik lan ekstranuclear cilik, cilik sing ngemot kromosom utawa kromosom kabeh sing durung digabung menyang inti sajrone divisi sel. The tes mikronucleusBisa ndeteksi clastogenik (kromosom - breaking) lan aneugenic (mengaruhi efek kromosom). Dipinteras ati s9 digunakake ing kene kanggo ngaktifake bahan test kanthi metabolik, amarga sawetara bahan kimia mung nyebabake karusakan kromosom yen wis metabolisasi dening enzim ati. Bingkungan S9 nambah sensitivitas tes kanthi simulasi aktifitas metabolis sing bisa kedadeyan ing Vivo.

Tes Aberrasi Chromosom (OECD 473)

Tes iki ngevaluasi manawa bahan bisa nyebabake karusakan strukture kanggo kromosom kanthi ngilangi, pambusakan, translocations, utawa jinis tambahan. Kaya tes micronukleus,Tes Aberrasi Chromosombisa ditrapake nganggo utawa tanpa aktif metabolis. Induk Liod S9 ditambahake menyang sistem test kanggo niru proses metabolisme ing ati, saéngga penilaian bahan-bahan sing bisa nyebabake karusakan kromosom ing bentuk asline nanging bisa nindakake metabolisme ati.

Tabel 1. Konserasi tes mutasi

HPRT / HGPRT Assay (OECD 476)

IngHprt / hgprt assay, BURTURES HAMSTER Cina (Cho utawa V79) utawa sel lymphoblastoid (TK6) kapapar ing ngarsane metabolik sing dianakake metabolik S9 sing dibutuhake kanggo ngowahi pro-spesies reaktif. Sawise perawatan ringkes lan wektu ekspresi pitu dina, sel, sel tantangan karo 6-thiGuanine; Mung Klone Mutasi Mundhengake Rugi ing Hypoxanthine-Phosphoribosftrersferase Gene slamet. Kanthi mbandhingake mutant koloni kanggo panguripan sakabehe, peneliti nemtokake frekuensi mutasi, yen diunggahake kanthi serentak, yen kontrol bersejarah lan kontrol sejarah, nuduhake potensial genotoxik.

TK Assays (OECD 490 & OECD 476)

TheTk assay Mbusak sel limfoma l5178y (OECD 490) utawa sel cho (OECD 476) heterozygous sing direkayasa ing garis loker thymidine. Dipuntedahaken paparan kimia ± S9 campuran, sel pulih lan dilapisi medium sing ngemot trifluorothymidine, sing mateni sel-sel sing ora duwe pendapatan TK. Urip Tk⁻ Mutants Formulir koloni luwih saka 10-14 dina, kanthi mutan cilik colony asring nggambarake kedadeyan kromosom lan mutan kromosom sing nggambarake mutan sing gedhe-gedhe. Kaya ing HPRT / HGPRTs Assay, kontrol sitotoksi kakehan lan benchmarks positif Mesthekake kanthi frekuensi mutasi kanthi nggambarake risiko genotoxic senyawa.

4. 4. Penilaian risiko Kanker

Induced Rat Liver S9 uga digunakake ing studi sing dituju kanggo netepi kanker - nyebabake potensial bahan bakar. Kanthi simulasi proses metabolis sing kedadeyan ing ati manungsa, fraksi S9 bisa mbantu ngerteni senyapan sing bisa nyebabake pembentukan metabolit reaktif sing bisa nyebabake DNA lan nyebabake mutasi sing bisa nyebabake kanker.

Uji Ames sing ditingkatake kanthi Hamster Hiamster S9 sing kena pengaruh

Miturut pedoman paling anyar sing diterbitake dening Badan Sekala Agensi (EMA), tes Ames tradisional bisa uga ora cukup sensitif kanggo ndeteksi potensial mutagenitas, utamane n - nitrosodimethylamine (ndma), antara liya. Mula, tes Amas sing ditingkatake, dikembangake dening Pusat Nasional riset toksikologi (NCTR), divisi Administrasi Pangan lan Usah (FDA), wis disaranake minangka alternatif sing luwih dipercaya. Tes AMES sing ditingkatake sing dikenalake gumantung saka ajaran hamster sing didorong S9, sing nggawe 30% ati s9 lan 30% hamster s9. Suparants Hamster Desmosomal (S9S) kudu disiapake saka enian rodent sing diobati karo enzim Cytochrome P450 - bahan-bahan penghubung. Kanthi nggunakake ujian hamster sing nduwe pengaruh S9, tes sing ditingkatake luwih apik nyentel metabolisme manungsa lan nambah keandalan asil.

Kesimpulan

Sis ati kanthi induk sing disinaoni minangka alat kritis ing tes genotoksi, mbantu para peneliti lan agensi reguler lan potensial bahan kimia mutagenic. Kanthi nyedhiyakake sistem aktifitas metabolis, nambah kemampuan kanggo tesis kaya Uji Ames, Mutasi, lan Studi kegiatan CYP450 kanggo ndeteksi bahan-bahan sing mbutuhake genotoxic. Aplikasi penting kanggo mesthekake safety saka obat anyar, bahan kimia, lan produk konsumen. Kanthi peran kasebut kanggo nyenturake metabolisme ati manungsa, sekaligus tikus S9 sing didorong terus dadi bagian sing penting saka toksikologi modern lan peratas.