Uat егеген бауырлар S9 фракциясы: in vitro генотоксикалық және мутация сынақтарына арналған метаболикалық активация жүйесі

Түйінді сөздер: ЭЫДҰ, ЭЫДҰ 473, ЭЫДҰ 473, Муэт 487, генотоксикалық, генетикалық уыттылық, генетикалық уыттылық S9, AMES Test, Mini Ames Test, Mici

IPhase өнімі

Кіріспе

Егеген егеуқұйрық s9бағалаудағы негізгі компонентгенетикалық уыттылықХимиялық заттардың, әсіресе реттеудің токсикологиясының әлеуеті. Ол әдетте in vitro талдауларымен бірге қолданылады, мысалы,AMES тесті жінеМутация сынақтары, қосылыстардың мутагендік қасиеттерін бағалау. Цочромға бай ферментативті жүйені ұсыну арқылы (CYP450), uature бауырдың егеуқұйрықтары S9 фракциясы бауырда пайда болатын метаболикалық процестерді модельдеуде маңызды рөл атқарады, бұл химиялық заттар генетикалық мутациялар немесе қатерлі ісік ауруын тудыруы мүмкін.

Егеген егеуқұйрық s9

Бауырдың S9 фракциясы - постқа жатады - Бірнеше центрифугациялық қадамдардан кейін бауырдың егеуқұйрықтан алынған митохондриялық супернатант. «Бұзылған» термині бауыр ферменттерінің белсенділігін арттыратын, әсіресе ценоботиктің метаболизміне жауап беретін нақты қосылыстары бар егеуқұйрықтарды емдеуді білдіреді.

Берілген егеуқұйрықтардың S9 фракциясында i фазасына және II фазалық химиялық заттардың метаболизміне қатысатын түрлі ферменттер бар. Бұған цитохромдық P450 монохемгена сияқты ферменттер кіреді, бұл субстраттардың тотығу биотрансформациясын жеңілдетеді, осылайша адамның бауыр метаболизмін елемейді.

CYP450 Әрекет және метаболикалық активация

CyTochrome P450 ферменті отбасы (CYP450) көптеген заттардың метаболизмінде, соның ішінде көптеген фармацевтика, қоршаған орта химикаттары мен канцерогендермен айналысу рөлін атқарады. Берілген егеуқұйрықтардың S9 фракциясы бұл ферменттерден тұрады және метаболикалық активациядан кейін генотоксикалық болуы мүмкін химиялық заттарды бағалау үшін қажет.

Көптеген қосылыстар бастапқыда емес, бірақ бауырдағы метаболизмнен кейін улы емес, бірақ улы болуы мүмкін. Бұл PRO - Mutagens (метаболикалық активтендіруді қажет ететін метаболикалық активтендіруді қажет етеді) және Pro - CARCINOGENS (қатерлі ісікке ұшырауды қажет ететін) S9 метаболикалық активация жүйесін қамтитын талдау арқылы ғана анықталуы мүмкін. CYP450 сияқты метаболикалық ферменттердің индукциясынсыз бұл заттар стандартты генотоксикалық сынақтарда зиянсыз болып көрінуі мүмкін.

In vitтік талдаулар үшін in ul row o rat s9 қосу арқылы зерттеушілер заттың CYP450 ферменттерімен қалай әрекеттесетінін бағалай алады. Бұл әсіресе фармацевтика үшін, өйткені CYP450 ферменттері метаболизм көптеген дәрілердің фармакокинетикасындағы маңызды қадам болып табылады.

U roatues o roatues s9 қосымшалары

1. 1. AMES Test (ЭЫДҰ 471)

Амес сынағы, нұсқаулықпен көрсетілгенЭЫДО 471, ең жақсы - мутагеникті бағалаудың белгілі және кеңінен қолданылатын әдістері. Бұл сальмонелла бактерияларының штаммдарын тестілеуге, егер оның бактериялардың гистидинге қайтарылуына әкелетін мутациялар туғызатын болса, оның мутацияларын анықтайды.

Адам метаболикалық процесін модельдеу үшін, uature бауырдың қоздырылған өкілі S9 жиі тест жүйесіне қосылады. S9 фракциясы қажетті ферменттерді, соның ішінде CYP450 ұсынады, бұл қосылысты бактериалды ДНҚ-да мутациялар тудыруы мүмкін реактивті формада метаболизациялау үшін қажет болуы мүмкін. S9-дің AMES Test-пен үйлесімі тікелей және метаболикалық белсендірілген мутагендік механикалық механикалық механизмдерді елемей, мутагендік потенциалды жан-жақты бағалауға мүмкіндік береді.

2. 2.Мутация сынақтары (хромосомалық аберрация сынағы, микронуклеу сынағы және in vitro)

AMES Test-тен басқа, мутация сынақтары химиялық заттардың генотоксикалық әлеуетін бағалау үшін жиі қолданылады. Бұл сынақтар генетикалық зақымдануды, соның ішінде хромосомалық мутация, гендік мутация және микронуклеуді қалыптастыру кезінде жан-жақты болып табылады. Берілген егеуқұйрықтардың S9 мутация сынақтарында келесі себептер бойынша пайдаланылады:

MicRONUCLEUS тестілеу (ЭЫДҰ 487)

Бұл тест камералардағы микрокуляцияның пайда болуын анықтайды, олар кішкентай, экструкарлық денелер, хромосомалар мен хромосомалардан тұрады, олар хромосомалар немесе жасуша бөлінуі кезінде ядроға енгізілмеген тұтас хромосомалар. Та Микроуклеу сынағыКастогенді (хромосома - сынуы) және анегенді (хромосоманың санына әсер ететін) әсерін анықтай алады. Бауырдағы егеуқұйрықтар S9 мұнда метаболикалық тұрғыдан метабол арқылы іске қосылады, өйткені кейбір химиялық заттар бауыр ферменттерімен метаболизденгеннен кейін хромосомалық зақым келтіреді. S9 фракциясы Vivo-да пайда болуы мүмкін метаболикалық активтендіруді модельдеу арқылы тестің сезімталдығын арттырады.

Хромосомалық аберратталған тест (ЭЫДҰ 473)

Бұл тест зат хромосомалардан сыну, жою, аудармалар немесе аберациялардың басқа түрлерін тудыруы арқылы хромосомаларға зақым келтіруі мүмкін бе, жоқ па, соны бағалайды. Микронуклеу сынағы сияқты,Хромосомалық аберрюция сынағыметаболикалық активтендірумен немесе онсыз қолдануға болады. Бауырдағы бауырдың индукцияланған бауырлары сынақ жүйесіне қосылады, бұл бауырдағы метаболикалық процестерді елемейтін процестерге қосылады, бұл олардың бастапқы формасында хромосомалық зақым келтірмеуі мүмкін, бірақ бауыр метаболизмінен кейін жасай алады.

Кесте 1. Мутация сынақтарын салыстырмалы қарастыру

HPRT / HGPRT талдау (ЭЫДО 476)

ІшіндеHPRT / HGPRT талдау, қытай хамстерінің (CHO немесе V79) немесе адам лимфобластикалық (TK6) жасушалары (TK6) жасушаларының дақылдары сынаққа арналған химиялық заттарға арналған химиялық заттарға әсер етеді, ол про-мутагендерді ДНҚ реактивті түрлеріне айналдыру үшін қажет. Қысқаша емдеуден және жеті күндік өрнек кезеңінен кейін ұяшықтар 6-тиогуанинмен күрделі; Гипоксанти-гуанин-гуаниндегі функционалды мутацияларды жоғалтқан клондар, фосфорибосилтранс гені Мутанттық колониялардың жалпы өміршеңдігімен салыстырғанда, зерттеушілер мутация жиілігін анықтайды, егер бір мезгілде және тарихи бақылауларға қарағанда көбейген болса, генотоксикалық әлеуетті көрсетеді.

TK ASSASES (OECD 490 & ЭЫДО 476)

ТаTK талдау L5178y тінтуірдің лимфома жасушалары (OECD 490) немесе Cho ұяшықтары қолданылады (ЭЫДО 476) Thymidine Kinase Locus-те инженерленген гетерозигото. Химиялық әсер ± S9 қоспасы, ұяшықтар қалпына келтіреді және құрамында TK-білікті жасушаларды өлтіреді. ТҚК мутанттары 10-14 күн ішінде колонияларды құрайды, кішкентай колония мутанттары көбінесе хромосомалық оқиғалар мен хромосомалық оқиғалар мен учаскелік мутанттарды шағылыстырады. HPRT / HGPRT талдауындағыдай, қатаң цитотоксикалдылықты басқару және оң мутанген эталондары мутация жиілігінің жоғарылауы қосылыстың генотоксальды тәуекелін сенімді түрде бейнелейтініне көз жеткізеді.

4. 4. Қатерлі ісік қаупін бағалау

Бауыр атына арналған егеген бауырлар S9 сонымен қатар қатерлі ісік ауруын бағалауға бағытталған зерттеулерде қолданылады - заттардың әлеуетін тудырады. Адам бауырда пайда болатын метаболикалық процестерді модельдеу арқылы S9 фракциясы ДНҚ-мен байланысуға қабілетті реактивті метаболиттердің пайда болуына әкелуі мүмкін қосылыстарды анықтауға көмектеседі.

AMES AMES-тің индукцияланған хомятсу

Еуропалық дәрі-дәрмектер агенттігі (EMA) шығарған соңғы нұсқауларға сәйкес, дәстүрлі AMES тесті «Nitrosamine қоспаларының мутагендік әлеуетін, әсіресе N - нитросамилиметиламин (NDROODIMETHYLAMINE (NDMA), басқалардың арасында анықтауға жеткілікті сезімтал болмауы мүмкін. Сондықтан, Токсикологиялық зерттеулер ұлттық орталығы (NCTR) әзірлеген жетілдірілген AMES тестілеуі, U.S. Тамақ өнімдері мен дәрі-дәрмек басқармасы (FDA) кеңейтілген балама ретінде ұсынылды. Жақсартылған AMES тестілеуі 30% егеуқұйрықты учаске және 30% Hamster Lover S9 құрамында жүргізілген гистранттың индукцияланған хомяктарының қосылысы енгізілді. Егеуқұйрық пен Хомстердің десмосомалық супернатранттары (S9S) Cytochrome P450 ферменттерімен өңделген кеміргіштерден дайын болуы керек - Іске асыру. Hamster Liver S9 индустриалды, бұл жетілдірілген сынақ адамның метаболизмін жақсартады және нәтижелердің сенімділігін арттырады.

Қорытынды

Урет егеуқұйрығының социттері генотоксикалық тестілеудегі маңызды құрал ретінде қызмет етеді, зерттеушілер мен реттеуші органдар химиялық заттардың мутагендік және канцерогендік әлеуетін бағалайды. Метаболикалық активтендіру жүйесін ұсыну арқылы, бұл AMES Test, MUTUTATIONS және CYP450 белсенділігі сияқты талдауды генотоксикалық болу үшін метаболизмді қосуды қажет ететін заттарды анықтау мүмкіндігін арттырады. Оның өтінімдері жаңа дәрілердің, химиялық заттардың және тұтынушылық өнімдердің қауіпсіздігін қамтамасыз ету үшін қажет. Адамның бауыр метаболизмін модельдеудегі рөлімен, uature бауырдың егегенігінің үлесі 9 фракциясы заманауи токсикологияның және реттеуші қауіпсіздіктің ажырамас бөлігі болып қала береді.