Induced Rat Liver S9 Fraction: Pergalek çalakkirina metabolîk ji bo ceribandinên Vitro Genotoxicity û Testên Mutation

Keywords: OECD 471, OECD 473, OECD 476, Testa Mutkirin, Tozîsyona Genetîkî, Testa Ames, MINI AMES, Micronucleus, HPRT / HGPRT ASSAY, TK Assay

Hilbera iphase

Pêşkêş

Induced rat liver s9di nirxandina nirxandina sereke de yetoksolojiya genetîkîpotansiyela kîmyewî, nemaze di toksîkolojiya birêkûpêk de. Ew bi gelemperî di navbêna li Vitro de, wekTesta Ames ûTestên mutasyonê, ji bo nirxandina taybetmendiyên mutagenîk ên pêkve. Bi pêşkêşkirina pergala enzymatic li Cytochrome P450 (Cyp450), fraksiyona mestir a ku di kezebê de ye, ji bo destnîşankirina gelo kîmyewî dikare bibe sedema ku kîmyewî an penceşêrê bike.

Induced rat liver s9

Fraksiyona S9-ê ji postekê re vedibêje - Supernatant Mitochondrial ji homogenates rat ji homogenates re hat wergirtin. Peyva "induced" behsa dermankirina rats bi kompleksên taybetî yên ku çalakiya enzîmên kezebê, bi taybetî enzîmên Cytochrome P450 (Cyp450) zêde dike, ku berpirsiyarê metabolîzmê ji xenobiotîk e.

Fraksiyona Rat a Liver S9 bi cûrbecûr enzîmên ku di qonaxa I û qonaxa II ya kîmyewî de beşdar dibin hene. Ev di nav de enzymên wekî cytochrome p450 monooxygenes, ku hêsantirkirina biyotasyona oxidative ya substrates, bi vî rengî mimikandina metabolîzmê ya mirovî hêsantir dike.

Activityalakiya CYP450 û çalakkirina metabolîk

Malbata Cytochrome P450 (Cyp450) di metabolîzma cûrbecûr materyalan de, di nav de gelek dermanxane, kîmyewîyên hawîrdorê, û carcinogens Fraksiyona Rat ya Derşî ya S9-ê van enzîmeyan pêk tîne û ji bo nirxandina kîmyewiyên ku tenê piştî çalakkirina metabolîk jî dibe genotoxîkî pêk tê.

Pir kompleks di destpêkê de ne - toksîk in lê piştî metabolîzmê di kezebê de bibin toksîkî. Van pro - mutagens (ku hewceyê çalakkirina metabolî ye ku bibe mutagenic) û pro - ku ji bo sedemên kanserê ye ku dikare pergala aktîfkirina metabolîk a S9-ê pêk bîne dikare were tesbît kirin. Bêyî danasîna enzîmên metabolê mîna Cyp450, dibe ku ev materyal di ceribandinên genotoxîkî yên standard de zirarê xuya bikin.

Bi lêzêdekirina Mizgîniya Rat-ê ya S9-ê li Vitro Assays, lêkolîner dikarin binirxînin ka meriv çawa materyal bi enzîmên CYP450 re têkilî dike. Ev bi taybetî ji bo dermanan girîng e, wekî metabolîzmê ji hêla Metabolîzmê ve ji hêla Cyp450 Enzymes ve gavek krîtîk e ku di dermanxaneyên gelek dermanan de ye.

Serlêdanên induced Rat liver S9

1. 1. Testa Ames (OECD 471)

Testê Ames, li Guelidîn hate diyar kirinOECD 471, ji bo nirxandina mutagenî, yek ji wan baş e. Ew di nav de stûnên bakteriya Salmonella ji bo kîmyewî ceribandinek heye ku bibîne ka ew muteweyên ku dibe sedem ku bakteriyan vegere histidine - Dewleta serbixwe.

Ji bo simulandina pêvajoya metabolîk ya mirovî, induced Liver inder S9 bi gelemperî li pergala testê tê zêdekirin. Fraction S9 enzîmên pêwîst peyda dike, tevî Cyp450, ku pêdivî ye ku pêdivî ye ku meriv kompleksa li formek reaktîf bike ku dikare bibe sedema dna bakterial. Ev kombînasyona S9 bi testa Ames re dihêle nirxandinek berfireh a potansiyela mutagenic bi mimikandina her du mekanîzmayên rasterast û metabolîk ên çalakkirî.

2. 2.Testên mutasyonê (Testê Abreation Abaterration Chromosomal, Testê Micronucleus, û yên din jî li Vitro Assays)

Digel testa ames, ceribandinên mutasyon bi gelemperî ji bo nirxandina potansiyela genotoxîkî ya kîmyewî têne bikar anîn. Van ceribandinan di nirxandina cûrbecûr zirareke genetîkî de, di nav de mutations kromozomal, mutations genim, û avakirina micronuclei. Ji ber sedemên jêrîn di testên mutalê de rat livînerê Rat tê bikar anîn:

Test Micronucleus (OECD 487)

Vê ceribandinê di hucreyên mîkronuclei de, ku laşên piçûk, extranuclear in, ku parçeyên kromozomê an tevahî kromozom hene ku di nava dabeşkirina hucreyê de ne hatine nav nucleus. Ew testa mîkronucleusdikare clastogenic (chromosome - şikestî) û aneugenic (bandorkirina hejmara kromozom) bandor bike. Induced Rat Kisher S9 li vir tête bikar anîn da ku hûn materyalên testê bi metabolî çalak bikin, wekî hin kîmyewî tenê sedema zirara kromozomal dema ku ew ji hêla enzîmên kezebê ve hatine metabol kirin. S9 fraksiyona hestiyariya testê bi simulasyona çalakkirina metabolîk a ku dibe ku di vivo de çêbibe.

Testê Abreation Chromosomal (OECD 473)

Vê testê nirxandiye ka naverok dikare bibe sedema zirarên strukturanî ji kromozoman ve bi hilweşandina hilweşandin, betalkirin, wergerandin, an cûreyên din ên aberrations. Mîna ceribandina mîkronucleus,Testa Abecration Chromosomaldikare bi aktîvkirina metabolîk were sepandin. Induced Rat Kisher S9 li pergala testê tê zêdekirin da ku pêvajoyên metabolîk ên di kezebê de mimkin bikin, destûrê bidin nirxandina madeyên ku dibe sedema zirara kromozomal di forma xwe ya bingehîn de lê dikaribû piştî metabolîzma kezebê.

Tabloya 1. Nerînên berbiçav ên ceribandinên mutasyonê

HPRT / HGPRT ASSAY (OECD 476)

DiHPRT / HGPRT ASSAY, Cultures of Hamster Chinese (Cho an V79) an hucreyên Lymphoblastoid (TK6) ji bo kîmyewî ya Metabolî ya S9-ê, ku tê xwestin ku Cyp450 Enzymes hewce dike ku li cureyên DNA-reaktîf veguherînin. Piştî dermankirina kurt û dewreyek vegotinê ya heft-rojî, hucreyan bi 6-thioguanie re têne qewirandin; Tenê Klonên ku zirarên windabûnê yên di hîpoxanthîn-guosphoribosyltransferase zindî dibin de digirin. Bi berhevkirina koloniya Mutant ji bo tevbigere

TK Assays (OECD 490 & Oecd 476)

EwTk assay Hucreyên lîmphoma L5178Y (OECD 490) an hucreyên bijare (OECD 476) Heterozygous li qonaxa Kinase ya thymidine endezyar. Li dû kîmyewî ya kîmyewî tevlihev, hucreyan sax dibin û di navbêna navîn de trifluorothhymidine, ku hucreyên jêhatî yên TK dikuje. Surviving Mutants Mutants li ser 10-14 rojan koloniyan ava dikin, bi Mutantên piçûk re pir caran bûyerên kromozomal û Mutantên Mezin ên Kolonî nîşan didin. Wekî ku di HPRT / HGPRT Contre de, kontrolên cytotoxî yên hişk û pîvanên mutagen ên erênî piştrast dikin ku zêdebûna zêdebûna frekansa mutasyonê bi pêbawer rîska genotoxîkî ya hevokê nîşan dide.

4. 4. Nirxandina xetereya penceşêrê

Di Lêkolînên S9-ê de ji bo nirxandina kanserê jî tê bikar anîn. Simunekirina pêvajoyên metabolîk ên ku di kezebê mirovî de çêbibe, parçeyek S9 dikare were naskirin ku dibe sedema pêkanîna metabolîtên reaktîf ên ku ji DNA ve girêdayî ye û dibe sedema sedemên kanserê.

Testê Ames bi Hamster Kermaniya Hamster S9 ve girêdide

Li gorî rêbernameyên herî dawî yên ji hêla Dermanên Dermanên Ewropî ve hatine weşandin, dibe ku testa amesên kevneşopî ne hesas be da ku nasnameyên mutagenîk ên bi taybetî, nemaze nitrosodimethylamine (ndma), di nav yên din de. Ji ber vê yekê, ceribandina Amesê ya Zexmkirî, ji hêla Navenda Neteweyî ya ji bo lêkolîna toksîkî (NCTR), dabeşek ji Rêveberiya Xwarin û Dermanê Derman (FDA) hate pêşxistin, wekî alternatîfek pêbawer hate pêşniyar kirin. Testê Amesê ya Zexmî zêdebûna lêdana Hamster-ê ya Hamster S9, ku di nav de 30% Rat Liver S9 û 30% Hamster Kermana S9-ê pêk tê. Rat û Hamster Desmosomal Supernatant (S9s) divê ji kezebên rodent re were amadekirin ku bi Cytochrome P450 Enzyme - Bi karanîna kezebê ya hamster S9, ev ceribandina zêdekirî çêtir metabolîzma mirovan hêsan dike û pêbaweriya encaman zêde dike.

Xelasî

Di ceribandina genotoksiyê de rat liver S9 wekî amûrek krîtîk xizmet dike, alîkariya lêkolîner û saziyên rêziknameyê dike ku potansiyela mutagenic û carcinogenîkî ya kîmyewî binirxîne. Bi peydakirina pergala çalakkirinê ya metabolîk, ew qeweta Testê ya Metabolan, Testên Mutation, û Lêkolînên Actalakiya Cyp450 zêde dike da ku hûn çalakiyên metabolîk bibin da ku bibin aktîvîkok. Serlêdanên wê ji bo ewlehiya dermanên nû, kîmyewî û hilberên xerîdar girîng in. Bi rola xwe re di metabolîzma kezebê ya mirovî de, fraksiyona navgîniya pizrikê ya S9-ê berdewam dike ku beşek domdar a ji bo nirxandina nûjen û nirxandina ewlehiya nûjen.