Žmogaus ir gyvūnų tulžis iš tuščios biologinės matricos bioanalitiniam metodo kūrimui ir bioanalitinio metodo patvirtinimas

1 „iPhase“ produktai

2 tuščia biomatrix

Įvairių tipųBiologinės matricos, įskaitant tuščią viso kraujo, serumo, plazmos, tulžis, pienas, šlapimas, išmatos, žarnyno kiekis, vidaus organų organai, stiklakūnio humoras, vandeninis humoras, smegenų skystis ir kt., Surinkti iš sveikų asmenų ar sveikų eksperimentinių gyvūnų, kartu vadinami tuščiomis biologinėmis matricomis.

3 Ikiklinikinių tyrimų metu būtinybė naudoti tuščias biologines matricas

In Narkotikų ikiklinikiniai tyrimai, tuščia biologinė matrica yra kertinis akmuo norint nustatyti ir patvirtintiBiologinės analizės metodai. Naudodamiesi tuščiomis sveikų asmenų ar eksperimentinių gyvūnų matricomis, tyrėjai gali tiksliai paruošti kalibravimo standartus ir kokybės kontrolės mėginius, įvertinti analitinių metodų specifiškumą, jautrumą, tikslumą ir matricos poveikį ir užtikrinti vaistų koncentracijos kiekybinio įvertinimo rezultatų patikimumą.

4 Biologinio metodo patvirtinimas ir tuščios biologinės matricos nustatymas ir pritaikymas

Kaip reikalauja FDA/EMA gairės, nustatant ir patvirtinant biologinės matricos analizės metodus, reikia naudoti tuščias biologines matricas, kad būtų užtikrintas analizės metodo tikslumas ir patikimumas. Ypač atliekant LC - MS/MS analizę, matricos komponentų skirtumai iš skirtingų šaltinių gali reikšmingai paveikti jonizacijos efektyvumą. Tuščioji matrica daugiausia naudojama kalibravimo standartų ruošimui, kokybės kontrolės mėginių paruošimui, skirtas tirti specifiškumą, selektyvumą, tikslumą, tikslumą, matricos efektus, atkūrimo greitį, stabilumą, skiedimo tiesiškumą, analitinių metodų trukdžių efektus ir kt. Aptikimo metodo selektyvumo ir matricos poveikiui reikia didesnių tuščiosios matricos reikalavimų.

5 Taikymo scenarijai tulžies tuščios matricos kūrimo metu

Dirbtinė tulžies matrica (Imituota tulžies matrica)yra sintetinis sprendimas, imituojantis natūralius tulžies komponentus ir naudojamas vaistų metabolizmui, toksikologijai ir biologinei analizei.Tulžies tuščia matricaturi svarbią taikymo vertę šiuose vaistų kūrimo scenarijuose: kepenų bilialinių sistemų vaistų farmakokinetiniai (PK) tyrimai, geriamųjų vaistų absorbcijos ir pirmojo metabolizmo tyrimai, vaistų tulžies rūgšties sąveikos tyrimai, kepenų irtoksiškumo įvertinimas ir tulžies STASIS tyrimai bei biologinių analizės metodų raida (LC - MS/MS).

6 kepenėlių sistemos narkotikai

Vykdant vaistų nuo kepenų sistemos sistemos, tulžies tuščia matrica vaidina nepakeičiamą vaidmenį kaip standartizuota in vitro modeliavimo sistema farmakokinetinėje (PK), toksikologinėse ir biologinėse analizėse.

6.1 Įvertinkite narkotikų tulžies išsiskyrimo charakteristikas

Kepenų taško taško cirkuliacijos tyrimai: tulžis yra vienas iš svarbių vaistų ir jų metabolitų išsiskyrimo būdų. Naudojant dirbtinę tulžies matricą, vaistų koncentracijos pokyčius tulžies galima modeliuoti, siekiant įvertinti, ar jie reabsorbuojami per kepenų žarnyno cirkuliaciją.

Turinio klirenso greičio nustatymas: Vaistai, kurie aktyviai išsiskiria per tulžį (pvz., Statinus ir tam tikrus antibiotikus), dirbtinė tulžis (modeliuojama tulžė) gali padėti kiekybiškai įvertinti jų klirenso efektyvumą ir optimizuoti dozavimo režimą.

6.2 Tyrinėkite tulžies rūgščių poveikį vaistų absorbcijai

Soliabilizacijos poveikis: Tulžies rūgštys gali skatinti lipofilinių vaistų, tokių kaip vitaminas D., tirpimas ir žarnyno absorbcija, dirbtinė tulžis gali modeliuoti skirtingas tulžies rūgšties kompozicijas ir įvertinti jų poveikį vaistų biologiniam prieinamumui.

Narkotikų tulžies rūgšties sąveika: Kai kurie vaistai (pvz., Liraglutidas) gali konkuruoti su tulžies rūgšties pernešėjais (tokiais kaip BSEP, MRP2), o dirbtinė tulžis gali būti naudojami tiriant tokią sąveiką, kad būtų išvengta galimo tulžies sustingimo rizikos.

6.3 Hepatotoksiškumo ir cholestazės rizikos vertinimas

Vaisto sukeltas cholestazės modelis: dirbtinė tulžis gali modeliuoti patologines sąlygas, tokias kaip tulžies latakų obstrukcija ir hiperbilirubinemija, ir yra naudojama nustatyti, ar vaistai trukdo tulžies srautui ar pažeidusi tulžies latakų ląsteles.

Biomarkerio analizė: pridedant specifinių komponentų, tokių kaip bilirubinas, tulžies rūgštys ir uždegiminiai veiksniai, galima įvertinti vaistų poveikį tulžies komponentams ir galima numatyti klinikinę saugumą.

6.4 Natūralios tulžies pakeitimo etiniai ir praktiniai pranašumai

Kreipiant dėmesį į mėginio trūkumo problemą: Natūralią tulžį reikia gauti naudojant invazinius metodus, tokius kaip tulžies latakų kateterizacija, o dirbtinė tulžis gali būti be galo pasirengusi, kad būtų išvengta etinių apribojimų.

Sikalinė nuoseklumas: Dirbtinės matricos (imituotos matricos) sudėtis yra kontroliuojama, todėl sumažėja individualių natūralios tulžies skirtumų poveikis eksperimentiniams rezultatams.

6.5 Palaikykite LC - MS/MS biologinės analizės metodų kūrimą

Matricos efekto korekcija: Sudėtinga natūralios tulžies (aukštų tulžies druskų, fosfolipidų, pigmentų) sudėtis gali lengvai sukelti jonų slopinimą ar sustiprėjimą Lc - MS/MS analizėje. Dirbtinė tulžies matrica (modeliuojama tulžies matrica) gali suteikti stabilų foną, optimizuoti metodo jautrumą ir tikslumą.

7 kryžminių rūšių tyrimai

Tulžies sudėtis labai skiriasi skirtinguose gyvūnuose (žiurkėms, šunims, beždžionėms), o dirbtinė tulžis gali standartizuoti rūšių skirtumus ir pagerinti ikiklinikinių duomenų perkeliamumą.

7.1 Cynomolgus beždžionės tulžis (NHP tulžis)

Cynomolgus beždžionės tulžė yra labai panaši į žmonių kompozicijos (tokios kaip tulžies rūgšties profilio) ir vaistų pernešėjo ekspresijos (pvz., BSEP, MRP2), todėl tai yra aukso standartinis ne - žmogaus primatų modelis, skirtas įvertinti kepenų tulžies išmetimą ir narkotikų tulžies rūgšties sąveiką.

7.2 „Beagle“ šuns tulžis

Fosfolipidų kiekis beable tulžie yra palyginti didelis, todėl jis tinka tiriant tulžies išsiskyrimą ir tulžies druskos priklausomai nuo lipofilinių vaistų absorbcijos. Tačiau, kad būtų skirtumai tarp baro ir žmonių tulžies rūgšties sudėties, reikia kalibruoti per dirbtines matricas.

7.3 SD žiurkės tulžis

SD žiurkių tulžies surinkimo tūris yra palyginti didelis (~ 1 ml/laikas), kuris plačiai naudojamas kepenų žarnyno cirkuliacijai ir vaistų hepatotoksiškumo tyrimams. Tačiau reikia pažymėti, kad jų aukštas bilirubino pradinis lygis gali trukdyti LC - MS/MS analizei.

7.4 ICR/CD - 1 pelės tulžis

CD - 1 pelės turi nedidelį tulžies tūrį (50 - 200 μl), todėl jie yra tinkami tiriant genų modifikavimo modelių (pvz., FXR/PXR kelią) mechanizmus, tačiau pritaikyti reikalingi mikro kiekybinio įvertinimo metodai.

7.5 C57BL/6 pelės tulžis

C57BL/6 pelės dažniausiai naudojamos metabolinių ligų modeliuose, o jų tulžies sudėties pokyčiai gali atspindėti patologines sąlygas, todėl norint modeliuoti patologiją, reikia naudoti dirbtinę tulžies matricą.

Aukščiau pateiktus modelius reikia derinti su dirbtine tulžies matrica, kad būtų galima kontroliuoti rūšių skirtumus ir optimizuoti LC - MS/MS metodų kryžminių rūšių palyginamumą.

Išvada

Dirbtinė tulžies matrica, kaip pagrindinė įrankis, skirtas imituoti natūralios tulžies funkciją, vaidina nepakeičiamą vaidmenį vystymosi kepenų vystymosi vaistuose. Standartizuojant skirtingų rūšių (tokių kaip Cynomolgus beždžionių, beagle šunų, SD žiurkių, Cd - 1 žiurkių, C57BL/6 žiurkių) tulžies sudėtis, dirbtinė tulžies matrica efektyviai sprendžia pagrindinius iššūkius, tokius kaip vaistų tyrimų, patologinės būklės modeliavimas, žymiai padidinant patikimumo ir vertimo vertę.

Kurdama tikslią mediciną, dirbtinė tulžies matrica dar labiau sujungs patologinius specifinius komponentus ir mikrofluidinę technologiją, kad dinamiškai imituotų kepenų ir tulžies pūslės mikroaplinką, užtikrinant stipresnę paramą novatoriškam vaistų vystymuisi.

Raktiniai žodžiai:Blank biologinė analizė, biologinė matricos mėginys, biomatricos analizė, žmogaus tulžis, gyvūnų tulžis, tulžies mėginys, dirbtinė tulžis, imituojama tulžies, NHP tulžis, cynomolgas beždžionė

Nuoroda

Li T, Chiang JY. Tulžies rūgšties signalizacija sergant metaboline liga ir vaistų terapija. „Pharmacol“ red. 2014 m. Spalio mėn.; 66 (4): 948 - 83. Doi: 10.1124/pr.113.008201. PMID: 25073467; PMCID: PMC4180336.