SORATRAN-TSARA SORATRAN-KEVITRA: rafitra fampahavitrihana metabolika ho an'ny genotexicity vitroxicity sy fitsapana mutation

Keywords: OECD 471, OECD 473, OECD 476, OECD 487, Fitsapana Mutation, Genotoxicity, Fanapoizinana ara-pirenena, Fanapahan-kevitra momba ny soavalotra, Mini AMERSTY, MINONUCLEUS, HPRT / Hgprt Assay, TK Assay

Vokatra Iphase

Sava lalana

Rat rat aty s9dia singa manan-danja amin'ny fanombanana nyToxicity genetikamety ho simika, indrindra amin'ny fizotry ny toxicology. Matetika no ampiasaina miaraka amin'ny vitro Assays, toy nyAMES TEST SYFitsapana Mutation, hanombatombana ny toetran'ny mutagenic. Amin'ny alàlan'ny fanomezana ny rafi-piraisan-kanina ao amin'ny Cytochrome P450 (Cyp450), ny fraction induced s9 dia mitana ny fizotran'ny metabolika izay mitranga ao amin'ny atiny, manampy amin'ny famaritana raha mety hiteraka kansera na kansera ny simika.

Rat rat aty s9

Ny frame S9 fraction dia manondro lahatsoratra iray - mitochondrial supernatant azo avy amin'ny homograt rat-homogra aorian'ny andian-tsolika. Ny teny hoe "voaroaka" dia manondro ny fitsaboana ny voalavo miaraka amin'ny sôkôla manokana izay manatsara ny hetsika ny kamory, indrindra ny enzimrome Cytochrome P450 Enzym, izay tompon'andraikitra amin'ny Xenobiotic isan-karazany.

Ny fraction an-keriny s9 fraction dia ahitana enzim-bolo isan-karazany izay voarohirohy ao amin'ny dingana i sy ny metabolikan'ny simika. Anisan'izany ny anzôzika toy ny cytochrome p450 monooxygena

Hetsika sy hetsika metabolika Cyp450

Ny fianakavian'i Cytochrome P450 Enzyme (Cyp450) dia manana anjara toerana manan-danja amin'ny metabolisma isan-karazany, ao anatin'izany ny fanafody maro, ny simika tontolo iainana ary ny carcinogens. Ny fraction an-tsokosoko s9 dia misy ireo an-kitrony ary ilaina amin'ny fanombanana ny simika izay mety ho lasa genotex ihany aorian'ny fampahavitrihana Metabolic.

Maro ny compounds no voalohany tsy - poizina fa mety ho lasa poizina aorian'ny metabolism ao amin'ny atiny. Ireo pro - fampahavitrihana (izay mitaky ny fampahavitrihana Metabolika ho lasa mutagenic) sy pro - carcinogens (izay mitaky fampahavitrihana hiteraka kansera) dia azo tsikaritry ny rafitra iray s9 izay misy rafitra fampiasa S9 metabic. Raha tsy misy ny fampidirana ny angovo metabolika toy ny Cyp450, ireo akora ireo dia toa tsy mampidi-doza amin'ny fitiliana genetoxicity.

Amin'ny alàlan'ny fampidirana ny atiny rat ny atiny s9 mankany amin'ny vitro Assays, ny mpikaroka dia afaka manombatombana ny fomba ifandraisan'ny singa amin'ny enz450 an-kibo. Tena zava-dehibe indrindra amin'ny fivarotam-panafody izany, satria ny metabolism nataon'i Cyp450 Enzymes dia dingana lehibe ao amin'ny fivarotam-panafody ny zava-mahadomelina maro.

Fampiharana ny rat rat rat at civer s9

1. 1. Ny fitsapana AMES (OECD 471)

Ny fitsapana AMES, voasoritra amin'ny torolàlanaOecd 471, iray amin'ireo tsara indrindra tsara indrindra - fantatra sy ampiasaina amin'ny fomba be dia be amin'ny fanombanana ny mutagenicity. Izy io dia ahitana ny fanandramana ny bakteria salmonella amin'ny fitsapana simika mba hahitana raha mamporisika ny mutation izay mahatonga ny bakteria hampody ny histidine - Fanjakana tsy miankina.

Mba hampisongadina ny fizotran'ny olombelona metabolika, ny rat ny rat ny rat s9 dia matetika ampiana amin'ny rafi-panadinana. Ny S9 fraction dia manome ny angovo ilaina, anisan'izany ny Cyp450, izay mety takiana amin'ny metabolize ny fitambaran-javatra ho toy ny endrika tsy misy dikany kokoa. Ity fampifangaroana S9 miaraka amin'ny fitsapana AMES dia ahafahana manombatombana bebe kokoa momba ny mety hisian'ny mutagenika amin'ny alàlan'ny mekanika Mutagenic roa.

2. 2.Fitsapana momba ny Mutation (fitsapana fanenjehana chromosomal, fitsapana micronukleus, ary hafa amin'ny vitro Assays)

Ho fanampin'ny fitsapana AMES, ny fitsapana mutation dia matetika ampiasaina amin'ny fanombanana ny mety hiseho amin'ny simika genoto. Ireo fitsapana ireo dia feno fahatakarana bebe kokoa amin'ny fanombanana ny fahasimban'ny fototarazo isan-karazany, ao anatin'izany ny mutations Chromosomal, ny firaisana ary ny fananganana an'i Micronuclei. Ny rat ny rat ny rat-rat s9 dia ampiasaina amin'ny fitsapana mutation noho ireto antony manaraka ireto:

Fitsapana Micronukleus (OECd 487)

Ity fitsapana ity dia mahita ny fananganana ny sela micronuclei, izay vatana kely sy extranuclear misy sombin-keloka na chromosome manontolo izay tsy nampidirina tao anaty sela nandritra ny fizarana sela. ny Fitsapana micronukleusafaka mamantatra clastogenic (chromosome - manapotika) sy aneugenic (fiantraikany amin'ny kromôzôma). Ny Rat Liver S9 dia ampiasaina eto mba hampahatezitra ny zavatra fitsapana tsy misy dikany, satria ny zavatra simika sasany dia miteraka fahasimbana kromosomal ihany raha vao maimbo ny fototry ny krismasy. Ny SPECtion S9 dia manatsara ny fahatsapan'ny fitsapana amin'ny alàlan'ny fanitsiana ny fampahavitrihana Metabolika izay mety hitranga ao Vivo.

Fitsapana fanenitra kromosomal (OECD 473)

Ity fitsapana ity dia manombatombana raha ny akora iray dia mety hiteraka fahasimbana ara-drafitra amin'ny kromôzôma amin'ny alàlan'ny fanentanana ny fiatoana, ny fanesorana, ny fampandehanana, na ny fanakorontanana hafa. Toy ny fitsapana micronukleus, nyFitsapana fanenjehana chromosomalazo ampiharina na tsy misy fampahavitrihana metabolika. Ny rafitry ny fitsapana dia ampidirina amin'ny rafi-panadinana mba hanakanana ireo dingana metabolika ao amin'ny atiny, mamela ny fanombanana ireo zavatra izay mety hanimba ny kromosomal amin'ny endriny tany am-boalohany fa afaka manao izany metibolism.

Latabatra 1. Ny fiheverana fampitahana amin'ny fitsapana mutation

HPRT / Hgprt Assay (OECD 476)

Ao amin'nyHPRT / Hgprt Assay, Ny kolontsaina Hamster Shinoa (Cho na V79) na sela Lymphoblastoid (TK6) dia miharihary amin'ny simika fitsapana ao amin'ny fisian'ny vongan-doha tsy azo ihodivirana, izay mitaky ny fiovam-po amin'ny karazana Cypalive. Aorian'ny fitsaboana fohifohy sy vanim-potoana fanehoana fito andro, ny sela dia miatrika 6-thioguanine; Clones miray fotsiny amin'ny fiovam-po-fiasa ao amin'ny hypoxanthine-guanine phospholirsforasese gene. Amin'ny alàlan'ny fampitahana ny kolonely amin'ny ankapobeny, ny mpikaroka dia mamaritra ny fatrany miolakolaka izay, raha toa ka manandratra ny fifehezana ara-dalàna sy ara-tantara dia manondro ny hery genotôma.

Tk Assays (OECd 490 & OECD 476)

nyTk assay Mampiasa sela L5178Y Mouse Lymphoma (OECD 490) na sela cho (Oecd 476) Engineered heterozygous ao amin'ny The Thymidine Kinase Locus. Manaraka ny fampifangaroana simika ± s9 mix, sela sitrana ary alefa ao amin'ny antonony misy trifluorothymidine, izay mamono sela matotra. Ny kolangely sisa tavela dia misy kolonely mihoatra ny 10-14 andro, miaraka amin'ny kolontsaina kely sy ny kolontsaina matetika Toy ny ao amin'ny HPRT / Hgprt Assay, ny fanaraha-maso ny cytotoxicity Constoxicity sy ny mari-pahaizana mutagen tsara dia miantoka izay fitomboan'ny fitomboan'ny mutation matetika dia maneho taratra ny risika genotozy.

4. 4. Ny fanombanana ny risika mety homena

Ny rat ny rat ny atiny dia ampiasaina amin'ny fandalinana ihany koa dia mikendry ny hanombanana ny homamiadana - mahatonga zavatra mety hitranga. Amin'ny alàlan'ny fanodinana ireo dingana metabolika izay mitranga ao amin'ny ati-olombelona, ​​ny ampahany S9 dia afaka manampy amin'ny famantarana ny sôlôjia izay mety hitarika ny fananganana metabolites reactitive afaka mamatotra ny ADN ary miteraka kansera izay mety hitarika homamiadana.

Fanandramana amam-pamantaran'ny AMES miaraka amin'ny hamster hamster s9

Araka ny torolàlana farany navoakan'ny masoivoho Eropeana (Ema), ny fitsapana amam-pahefana amam-pahalalana dia mety tsy ho mora tohina mba hahitana ny zava-misy Mutagen Noho izany, ny fitsapana Ames Enhanced, novolavolain'ny foibem-pirenena ho an'ny fikarohana toxicological (nctr), fizarazarana ny sakafo amerikanina sy ny fitantanana ny sakafo sy ny zava-mahadomelina (FDA). Ny fitsapana Ames Enhanced dia nampiditra ny fampidirana ny Hamster Liver S9, izay natao tao amin'ny 30% Rat Liver S9 sy 30% Hamster Liver S9. Ny Rat sy Hamster Desmosomal Supernatants (S9S) dia tokony hiomana amin'ny rodent Liels raisina miaraka amin'ny Cytochrome P450 Enzyme - fanentanana zavatra. Amin'ny alàlan'ny fampiasana ny Hamster Liver S9, ity fitsapana mihatsara ity dia manatsara kokoa ny metabolismisme ary mampitombo ny fahatokisan'ny valiny.

Famaranana

Ny rat ny rat ny atiny rat s9 dia fitaovana fanakianana amin'ny fitiliana genotôxicity, manampy ny mpikaroka sy ny masoivoho mifehy ny fifampiraharahana dia manombatombana ny mety ho simika mutagenika sy ny carcinogen. Amin'ny alàlan'ny fanomezana rafitra fampahavitrihana metabolika, dia manatsara ny fahaizan'ny Assays toa ny Fitsapana Amemes, ny fitsapan-kevitra momba ny Mutation, ary ny fandalinana ny hetsika Cyp450 hamantatra ireo zavatra izay mitaky ny fampahavitrihana Metabolika mba ho lasa genotexic. Ny fampiharana azy dia tena ilaina amin'ny fiantohana ny fiarovana ny zava-mahadomelina vaovao sy ny simika ary ny vokatra mpanjifa. Miaraka amin'ny andraikiny amin'ny fanitsiana ny metabolisma olombelona, ​​ny sambon-koditra an-keriny s9 fraction dia manohy ny ampahany tsy maintsy ilaina amin'ny toxicology maoderina sy ny fanombanana fiarovana amin'ny fiarovana.