Hepatocytes voalohany: fitaovana lehibe iray ho an'ny fandrosoana tsy - Clinical ao amin'ny fikarohana zava-mahadomelina Vitro

Hepatocytes voalohany: fitaovana lehibe iray ho an'ny fandrosoana tsy - Clinical ao amin'ny fikarohana zava-mahadomelina Vitro

Ny aty, ho toy ny taova voalohany amin'ny fitrandrahana zava-mahadomelina, dia manana anjara toerana lehibe amin'ny metabolism sy ny fizotran'ny poizina. Ny hepatocytes voalohany dia manana ny habetsaky ny toetrany sy ny haavo an-tsokosoko sy ny cocactors, anisan'izany ny membrane - ny enzochrome p450 Noho izany antony izany, ny hepatocytes voalohany dia raisina ho toy ny fenitra volamena amin'ny fananganana modely vitro Ity lahatsoratra ity dia manome topihevitra momba ny modely amin'ny kolontsaina 2D sy 3D mifototra amin'ny hepatocytes voalohany sy ny fangatahan'izy ireo amin'ny fampandrosoana ny zava-mahadomelina.

Keywords: hepatocytes voalohany, fambolena 2D, fambolena 3D, OrganGoids, Co - Culture.

1. 1. Mitokana ny hepatocytes voalohany

Ny fitokonana ny hepatocytes voalohany dia dingana lehibe amin'ny fametrahana amin'ny modely vitro aty vitro, miaraka amin'ny roa - dingana Collagionse Movies no mahazatra indrindra. Ao amin'ny biby kely kokoa, ny zava-manitra misy atiny dia azo tanterahina amin'ny alàlan'ny vavahadin'ny vavahadin-tserasera na ambany vena, na dia ny biby lehibe kokoa aza dia mitaky fandosirana amin'ny alàlan'ny lobaka na fizarana. Antony maro lehibe no misy fiantraikany amin'ny fitokanana ny hepatocytes: voalohany, ny Collagenase dia tokony ho tsy - cytotoxic. Faharoa, zava-dehibe ny fotoanan'ny fandevonan-kanina-Samy eo ambany - Digestion sy Over - Ny fandevonan-kanina dia afaka mampandefitra ny vokatra sy ny fahaiza-miaina. Fahatelo, ny toe-javatra iainan'ny atiny dia tsy maintsy ho tsara indrindra, satria ny hepatocytes dia mora tohina amin'ny fahasimbana ischemika. Ny atiny ampiasaina amin'ny fanomanana hepatocyte dia tokony hampangatsiaka haingana mba hampihenana ny tahan'ny metabolika ary hisorohana ny hypoxia metabolika sy ischemia manaraka.

Ny fenitra amin'ny hepatoocytes voalohany ampiasaina amin'ny fikarohana zava-mahadomelina dia toy izao manaraka izao:

1. 2. Kilongadin'ny 2D Kilonga

Modely ny fampiatoana ny fampiatoana

Mirakitra zava-mahadomelina feno - Endames sy coctoring, izay manao izany amin'ny fandalinana ny làlam-pandehanana metabola isan-karazany. Na izany aza, ny fanomezam-pahasalamana amin'ny fampiatoana ny fampiatoana sy ny hetsika zava-mahadomelina - Ny enzylizing Enzyling dia mihena tsikelikely rehefa mitombo ny fotoana ao amin'ny vitro, mametra ny fotoana fanodinana mandritra ny 4 ora mahery. Ity modely ity dia matetika ampiasaina hanombanana ny fanadiovana ny zava-mahadomelina amin'ny salanisa avo lenta. Rehefa latsaky ny 20% ny fahazoan-dàlana dia tsy azo faritana ny soatoavina mazava tsara. Ny fampiatoana ny fampiatoana nentim-paharazana - Miorina amin'ny modely vitro metro Ny fomba fampiatoana ny fampiatoana ny fomba fampiatoana (Sary 1) dia azo ampiasaina hanitarana ny fotoana fanodinana mandritra ny 20 ora na mihoatra.

Fampiharana:Hetsika anzitra sy ny fianarana metabolic ho an'ny fanafody molekiola kely.

Sary 1. Ny fampiatoana ny fampiatoana ny fomba famindrana fomba famindrana

Loharano: Metab Dirpos, 2012,40 (9): 1860-1865

Ny modely hepatoocytes lemaka

Ny hepatocytes voalohany dia ao anaty rafitra 2D ao amin'ny Collagen - takelaka kolontsaina. Ny hepatocytes dia mampiseho môtôlika epithelial, miaraka amin'ny nuclei protruding, matetika manatrika amin'ny endrika binimickated. Ny fitaratry ny kolontsaina hepatocyte hepatocyte tokana dia misy: 1. Fanovana ny polaritaly sela sy ny fiasa.2. Ny tsy fisian'ny karazana sela hafa mifandraika (i.e., tsy - sela parenchymal) izay takiana amin'ny fiasa mahazatra.3. Ny tsy fahaizana manome otrikaina sy antony paracrine hanohanana ny hepatoocyte amin'ny fanatanterahana ny asany (toy ny asidra bile sy serum proteinnthesis).

Fampiharana:

1). Fanombanana ny zava-mahadomelina - Fifaneraserana zava-mahadomelina:Tafiditra ao anatin'izany ny fampiroboroboana an-trano, ny fampirantiana an-trano ary ny fampianaran'ny transporter. Voalohany, rehefa misy zava-mahadomelina ho inducer, dia mety hiteraka fanehoana zava-mahadomelina kokoa ny zava-mahadomelina - Endames sy transporter. Ny mpanao ody mahery vaika dia afaka manoritra ny fototarazo marobe, toy ny fampiasan'ny phenobarbital of Cyp2b6, Cyp3a4, Cyp2c9, UGT, ary proteinina fitaterana maro toa an'i MRP2. Faharoa, misy karazana - fahasamihafana manokana amin'ny fomba namalian'ny hipatocytes ny inducers. Ohatra, rifampicin dia inducer mahomby ho an'ny hepatoocytes olombelona sy bitro, fa tsy misy fiantraikany amin'ny hepatoocytes rat. Farany, ny fametrahana ny fametahana subofeptimal dia mety hiteraka fihenan'ny fanehoana basal ny p450s sy ny valim-pifandraisana mitombo. Araka ny asehon'ny sary 3, ny hepatocytes ao amin'ny hazom-borona ambany dia mampiseho ny hetsika basal ambany kokoa amin'ny Cyp1a2, Cyp2b6, ary Cyp3a4, fa ny valin'ny fampiroboroboana mahery vaika. Noho izany, ny hepatocytes ara-pahasalamana amin'ny fitambaran-javatra mety dia ilaina mba hahazoana angon-drakitra mifanentana ara-batana.

Sary 2. Ny fifandraisana eo amin'ny fanelanelanana ny halehiben'ny hepatoocytes olombelona sy ny fampidirana anzimaary

Loharano: Teknolojia nahitana zava-mahadomelina ankehitriny, 2010, 7: 188 - 198

2). Fandinihana hepatotoxicity: Ny fandinihana ny fiovan'ny morpholojia eo ambanin'ny mikroskopika maivana, toy ny môtôkôlôjika, banga ary ny fitrandrahana lipid ary ny sela fametahana / fametahana sela. Fikarohana ny hepatocyte necatocyte (araka ny nasehon'ny Aspartate Aminotransferase, lactate dehydrosase, ary alanine Aminotransferase) sy apoptosis (Fragmentation DNA). Ho an'ny Cytokine - Ny kolonistra fanelanelanana, ny kolontsaina Monolayer dia tsy afaka maminany ny valintenin'ny poizina noho ny famotsorana ny sela tsy misy -

3). "Fomba famerenana" ho an'ny fandalinana ny fahazoan-dàlana miadana miadana sy ny metabolites: Ny hetsika ny zava-mahadomelina - Ny enzylizing Enzymes amin'ny hepatocytes lemaka dia manomboka mihena rehefa afaka 24 ora ny plating. Aorian'ny fampidirana hepatocytes amin'ny alàlan'ny serum -

Sary 3. Ny hepatocyte hepatocyte lemaka relay

Loharano: Taratasy metabolism zava-mahadomelina, 2016, 10: 3 - 15

3). Tombaro ny tokantrano, endocytosis, ny fandosirana endocytosis, ary ny fampanginana ny fiantraikany amin'ny fototry ny hepatocyte - dia nirotsaka ny zava-mahadomelina madinika kely.

Modelivation Sandwich

Ao Vitro, ny hepatocytes dia afaka mamboly eo anelanelan'ny sosona roa sosona na matrigel hanamboarana ny rafitry ny vivo, fantatra amin'ny anarana hoe sandwich fambolena sandwich. Hepatocytes kolontsaina eo anelanelan'ny sosona gel roa - Collagen (Sandwich Rafitra) dia afaka manatsara ny moraly sy ny maha-mahay ny sela ary mitazona ny fiasa azy ireo mandritra ny fotoana maharitra. Ankoatr'izay, ny kolontsaina ao Sandwich dia afaka mamerina ny faharetany, mamela ny fanodikodinana tsara ny fitaterana tsara sy ny lakolosy, ary koa ny fananganana tambajotra duct fiasa (Sary 4).

Sary.

Loharano: Teknolojia nahitana zava-mahadomelina ankehitriny, 2010, 7, 188 - 198

Fampiharana:

1. 1). Tombanana ny fanakorontanana biliary.
2. 2). Manombatombana ny fizarana hepatic sy biliary amin'ny sôdôgôgenous sy ny metabolites.
3. 3). Tombanana ny fanadiovana avy amin'ny metabolism sy ny terstorers, ary manamboatra pharmacacokinetic miforitra.
4. 4). Ny fandalinana hepatotoxicity ary manome mekanika ho an'ny zava-mahadomelina klinika - naratra naratra. Ny angon-drakitra dia tafiditra ao amin'ny Modely System PHarmacology hanombana ny mety ho zava-mahadomelina - Naratra ny olona nanosika ny olona.
5.  
   1. 3. Kolontsaina faha-3 an'ny hepatocyte voalohany

6. Ao amin'ny rafitra ara-kolontsaina 3D, ny hepatocytes dia kolontsaina ao amin'ny telo - Dimensional Matrix, izay mimics tsara kokoa amin'ny marim-pototra VIVO ao Vivo raha oharina amin'ny kolontsaina Monolayer 2d. Ireo rafitra ireo dia mampiroborobo ny sela - sela sy sela - Fifaneraserana Matrix, izay afaka mamerina ny fiasa ara-batana ny atiny, ao anatin'izany ny metabolisma momba ny zava-mahadomelina, ny sekretera proteinina, ary ny fananganana proteinina. Ny kolontsaina faha-3 an'ny hepatocyte voalohany dia azo ampiasaina hianarana ny atiny - Fomba manokana ao amin'ny Vivo - Tahaka ny tontolo iainana, manolotra tombony ho an'ny fitsapana zava-mahadomelina, fanombanana ny poizina ary ny modely amin'ny aretina.

   Modely Spheroid

Amin'ny alàlan'ny teknika toy ny Ultra - Kolontsaina fametahana ambany, mihantona ny kolontsaina sy ny kolontsaina magnetika (Sary 5), ny hepatocytes voalohany dia afaka mitambatra amin'ny sipsitra hatramin'ny 150 - 175 μm tsy miankina amin'ny mony ivelany. Ny tombony iray amin'ny kolontsaina SPHERID dia ny spheroid tsirairay dia mitaky 1,330 - sela 2 000 ihany, mampihena ny isan'ny sela raha oharina amin'ireo teknika faha-3 hafa hafa. Ny fandinihana farany dia naneho fa ny kolontsaina hepatocyte voalohany dia afaka mahazaka hatramin'ny 5 herinandro, miaraka amin'ny hetsika Cyp Enzyme izay tsy miova, ny fampielezan-kevitra, ny fitrandrahana zava-mahadomelina, ny fitrandrahana, ny metabolisme, ary ny fandroahana azy dia tazomina tsara mandritra ny 14 andro amin'ny kolontsaina sphena. Na izany aza, ny aty dia be pitsiny kokoa noho ny sela mitambatra. Ny lafiny Basoloraltes dia mifanerasera amin'ny ra, raha mivoaka avy amin'ny lafiny apical, izay singa manan-danja amin'ny firafitry ny lobaka be pitsiny, ary mbola tsy azo averina ao amin'ny Model Spheroid.

Fampiharana:

1. 1). Fandinihana ny fanadiovana tompo miadana sy ny metabolites.
2. 2). Fikarohana hepatotoxicity.
3. 3). Ny fanombanana ny fampakaram-baravarana, ny tatatra, ny endocytosis, ny fandosirana ankafiziny, ary ny fampanginana ny fiantraikany amin'ny fototarazo target of Heptatocyte - dia nikendry ny zava-mahadomelina madinika kely.

Sary 5. Fomba kolontsaina spheroid

Modely modely ny fambolena

Ny famaritana ny marimaritra iraisana dia ny firafitra 3D avy amin'ny sela sela, na sela mpanohitra, na sela iray izay manavaka ny asa sy ny sela teratany ao Vivo, mahomby amin'ny vovo MicroenIrononment sy Cell - To - Mifandray amin'ny sela. Ny fikambanana fikambanana misy ny atiny dia fantatra fa modely lehibe indrindra ho an'ny fikarohana biolojia an'ny olona.

Loharano sela ho an'ny fananganana uroblika urobid:

① Ny sela plastika plastika (PSCs):

Ny sela embryonika (escs) ary ny sela pluripotent stem (ipscs) dia manana plastika avo, plastika ary fahaiza-manavaka tsy manam-petra. Eo ambany fitarihan'ireo antony manokana famantarana manokana, mampiavaka ny hepatocyte izy ireo - toy ny sela misy hetsika sy asa. Na izany aza, ny fikambanana otrikaretina avy amin'ny PSCs dia mety hiova epigenetika sy ny fototarazo, ny fampisehoana chromosomal anouploidy miovaova mandritra ny fanamafisana.

Fampiharana:

1. 1). Modely aretina genetic
2. 2). Modely areti-mifindra amin'ny areti-mifindra
3. 3). Fitsapana ny rongony

② Tissue tissue - Sela nalaina: Anisan'izany ny cholangiocytes sy hepatocytes. Ny hepatocyes matotra dia mitazona ny kitay sela sy ny fahaiza-manavaka amin'ny tontolo manokana. Raha ampitahaina amin'ny PSC - Organida, organoids azo avy amin'ny tavy ao amin'ny Kilonga dia matotra kokoa, miaraka amin'ny genomenika azo antoka kokoa, ary mihazona ny tsy fitoviana penotypika sy ny fototarazo mandritra ny ela - Term in Culture Culture. Na izany aza, ny Long - Fahaiza-manao ny fikambanan'ny hepatocyte olombelona matotra dia voafetra raha oharina amin'ny hepatocytes olombelona na hepatoocytes. Ny kolikoly ny ulundids hepatocyte olon-dehibe dia mijanona ho sarotra.

Ny fomba kolontsaina (sary 6) Incubate amin'ny kolontsaina kolontsaina sela (37 ° C) mandritra ny 15 minitra. Aorian'ny fanamafisana, ampio ny fitaovana kolontsaina manokana. Andalan-tsoratra aorian'ny 14 andro eo ho eo. Soloy ny haingam-pandeha am-boalohany amin'ny haingam-pandeha amin'ny alàlan'ny 7 - 10 andro.

Fampiharana:

1. 1). Modely hepatotoxicity
2. 2). Ao amin'ny vitrobolism tsy mety
3. 3). Non - Aretina matavy misy alikaola
4. 4). Fampivoarana zava-mahadomelina ho an'ny aretina malemy sy malemy fanahy

Sary 6. Kolontsaina sy fandalovana ny tavy -

Loharano: sela sy bioscience (2023) 13: 197

Fampitahana ny kolontsaina spheroid sy ny kolontsaina organo

4. Hepatocyte CO - Modely Kolontsaina

1. 1. Hepatocyte voalohany 2d Co - Modely Kolontsaina
      

      Ao amin'ny hepatocyte voalohany 2d CO - Modely kolontsaina, karazana sela roa na maromaro samihafa mifangaro sy kolontsaina ao amin'ny tontolo roa - Dimensional tontolo iainana. Ny endri-javatra manan-danja amin'ity modely ity dia ny fifaneraserana mivantana eo amin'ireo karazana sela samihafa, ny fifaneraserana eo amin'ny sela sy ny matrix exprecellular, na ny fandefasana marika tsy mivantana amin'ny alàlan'ny cytokines sy serasera simika. Ny asa hepatocyte voalohany, toy ny famokarana albumin sy ny fahaiza-manao metabolism, dia azo tazonina hatramin'ny telo herinandro.

      Fampiharana:

      1. 1). Ny hepatoocytes voalohany CO - kolontsaina amin'ny fibroblasts: Ity modely ity dia ampiasaina amin'ny fandalinana ny fahazoan-dàlana amin'ny alàlan'ny miadana - Metabolizing Computs sy ny metabolites.
      2. 2). Ny hepatoocytes coups CO - kolontsaina amin'ny tsy - sela preenhymal (e.g.
      3. 3). Hepatoocytes Coard Co - kolontsaina miaraka amin'ny sela T: Ity modely ity dia ampiasaina hamantarana ny metabolism-motabolism-paty - Valiny sela manokana.
      4. 4). Hepatomax ™ iphaseCO - Rafitra ara-kolotsaina: namolavola CO - ny rafitra ara-kolotsaina miaraka amin'ny hepatoocytes voalohany avy amin'ny karazana samihafa, fantatra amin'ny anarana hoe Hepatomax™. By Co - Ny kolokisin'ny hepatocytes amin'ny sela sela, azo atao ny mitazona zava-mahadomelina tsara - Ity rafitra ity dia mety amin'ny fandalinana miadana - metabolizing ny tahan'ny fanadiovana compa sy ny metabolites.

      Ity co - ny modely ara-kolontsaina dia manome sehatra iray mifandraika ara-batana kokoa amin'ny fanombanana ny metabolism, ny poizina, ary ny aty - Ny fizotran'ny aretina mifandraika amin'izany, manome fomba fijery momba ny fomba fiasa samihafa amin'ny fiasa sy ny aretina.
      
      

      Hepatocyte voalohany amin'ny 3D Kilonga Modely

      Direct 3D CO - Kolontsaina: Ity modely ity dia misy ny fampifangaroana ireo karazana sela roa na roa hafa (oh. Direct 3D CO - Ny kolontsaina dia mamela ny fifandraisana akaiky eo amin'ny sela hafa amin'ny alàlan'ny mekanika toa ny sela - To - Sela Adhesion, Paracrine amin'ny alàlan'ny Cytokines, ary ny fifampiraharahana amin'ny matrix, ary ny fifandraisana matotra eo amin'ny hepatocytes.

      Fampiharana:

      1. 1). Modely fibrosis fibrosis: zatra mandalina ny mekanika sy ny fivoaran'ny fibrosis.
      2. 2). Ny zava-mahadomelina - Modely naratra (Dili) Modely (Dili): Manampy amin'ny Simulate ary manombatombana ny fahasimban'ny atiny vokatry ny zava-mahadomelina.
      3. 3). Ny fifaneraserana zava-mahadomelina, ny metabolisma misy zava-mahadomelina, sy ny inzyme ny fampidirana an-tsokosoko: Manombatombana ny fomba ifandraisan'ny zava-mahadomelina samihafa, ny fomba itondrany azy, ary ny fomba anoriany ny fon'ny atiny.

      Indirect 3D CO - Kolontsaina: Ity fomba ity dia mampiasa rafitra fisaraham-bazana ara-batana (e.g., ny fanamboarana sela roa na mihoatra) Ny serasera eo amin'ny sela dia mitranga amin'ny alàlan'ny cytokines soluki.

      Fampiharana:
      Nampiasaina ho an'ny fianarana tsy - Mifandray amin'ny sela misy ny sela ao amin'ny atiny ao amin'ny vatana.

      
      Raha fintinina, iphase, amin'ny maha mpitarika ao amin'ny fikarohana biolojika biolojika vitro, dia manome vahaolana feno amin'ny tsy - fitiliana zava-mahadomelina klinika. Avy amin'ny fitokonana sy ny kolontsaina hepatocytes avy amin'ny karazan-javamaniry isan-karazany amin'ny fampandrosoana ny vokatra manohana ny vokatra toy ny rindran-tsary na ny multi - Izahay dia mpiray tanindrazana ho an'ny mpanjifa ao amin'ny indostrian'ny pharmaceutical, nanolo-tena mba hanomezana ny fanapahana - Solonto mialoha ho an'ny tsy - fikarohana klinika.