प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 अपूर्ण

कीवर्डः ओईसीडी 471, ओईसीडी 473, ओईसीडी 476, ओईसीडी 487, उत्परिवर्तन चाचणी, जीनोटॉक्सिसिटी, अनुवांशिक विषाक्तता, प्रेरित उंदीर यकृत एस 9, एम्स टेस्ट, मिनी एम्स टेस्ट, क्रोमोसोमल एबेरेशन, मायक्रोन्यूक्लियस, एचपीआरटी/एचजीपीआरटी पर्स

आयफेस उत्पादन

परिचय

प्रेरित उंदीर यकृत एस 9मूल्यांकन करण्यासाठी एक महत्त्वाचा घटक आहेअनुवांशिक विषाक्ततारसायनांची संभाव्यता, विशेषत: नियामक विषारीशास्त्रात. हे सामान्यत: इन विट्रो अ‍ॅसेजच्या संयोजनात वापरले जाते, जसे कीअ‍ॅम्स चाचणी आणिउत्परिवर्तन चाचण्या, संयुगेच्या म्युटेजेनिक गुणधर्मांचे मूल्यांकन करण्यासाठी. सायटोक्रोम पी 450 (सीवायपी 450) समृद्ध एंजाइमॅटिक सिस्टम प्रदान करून, प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 फ्रॅक्शन यकृतामध्ये उद्भवणार्‍या चयापचय प्रक्रियेचे अनुकरण करण्यात महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावते, जे रसायनांमुळे अनुवांशिक उत्परिवर्तन किंवा कर्करोग संभाव्यतः कारणीभूत ठरू शकते की नाही हे ठरविण्यात मदत करते.

प्रेरित उंदीर यकृत एस 9

यकृत एस 9 फ्रॅक्शन एका पोस्टचा संदर्भ देते - माइटोकॉन्ड्रियल सुपरनेटॅन्टंट उंदीर यकृत होमोजेनेट्सकडून सेंट्रीफ्यूगेशन चरणांच्या मालिकेनंतर. "प्रेरित" हा शब्द विशिष्ट संयुगे असलेल्या उंदीरांच्या उपचारांचा संदर्भ देते जे यकृत एंजाइमची क्रिया वाढवते, विशेषत: सायटोक्रोम पी 450 एंजाइम (सीवायपी 450), जे झेनोबायोटिकच्या विस्तृत श्रेणीच्या चयापचयसाठी जबाबदार आहेत.

प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 अपूर्णांकात विविध प्रकारच्या सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य असते जे फेज I आणि रसायनांच्या फेज II चयापचयात सामील आहेत. यात सायटोक्रोम पी 450 मोनोऑक्सीजेनेसेस सारख्या सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य समाविष्ट आहे, जे सब्सट्रेट्सचे ऑक्सिडेटिव्ह बायोट्रान्सफॉर्मेशन सुलभ करते, ज्यामुळे मानवी यकृत चयापचयची नक्कल होते.

सीवायपी 450 क्रियाकलाप आणि चयापचय सक्रियता

साइटोक्रोम पी 450 एन्झाइम फॅमिली (सीवायपी 450) अनेक औषध, पर्यावरणीय रसायने आणि कार्सिनोजेनसह विविध प्रकारच्या पदार्थांच्या चयापचयात महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावते. प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 अपूर्णांकात या एंजाइम असतात आणि रसायनांचे मूल्यांकन करण्यासाठी आवश्यक आहे जे केवळ चयापचय सक्रियतेनंतर जीनोटॉक्सिक बनू शकते.

बर्‍याच संयुगे सुरुवातीला नॉन - विषारी असतात परंतु यकृतामध्ये चयापचयानंतर विषारी बनू शकतात. हे प्रो - म्युटेजेन्स (ज्यास म्युटेजेनिक होण्यासाठी चयापचय सक्रियता आवश्यक आहे) आणि प्रो - कार्सिनोजेन (ज्यास कर्करोगास कारणीभूत ठरण्याची आवश्यकता आहे) केवळ एस 9 मेटाबोलिक एक्टिवेशन सिस्टम समाविष्ट असलेल्या अ‍ॅसेजद्वारे शोधले जाऊ शकते. सीवायपी 450 सारख्या चयापचय एंजाइमच्या प्रेरणाशिवाय, हे पदार्थ मानक जीनोटॉक्सिसिटी चाचण्यांमध्ये निरुपद्रवी असल्याचे दिसून येते.

इन विट्रो अ‍ॅसेजमध्ये प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 जोडून, ​​संशोधक सीवायपी 450 एंजाइमशी पदार्थ कसे संवाद साधतात हे मूल्यांकन करू शकतात. हे फार्मास्युटिकल्ससाठी विशेषतः महत्वाचे आहे, कारण सीवायपी 450 एंजाइमद्वारे चयापचय अनेक औषधांच्या फार्माकोकिनेटिक्समध्ये एक महत्त्वपूर्ण पायरी आहे.

प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 चे अनुप्रयोग

1. 1. एम्स चाचणी (ओईसीडी 471)

मार्गदर्शक तत्त्वात वर्णन केलेली अ‍ॅम्स चाचणीओईसीडी 471, उत्परिवर्तनाचे मूल्यांकन करण्यासाठी ज्ञात आणि व्यापकपणे वापरल्या जाणार्‍या पद्धतींपैकी एक आहे. यात साल्मोनेला बॅक्टेरियाच्या ताणांना चाचणी केमिकलमध्ये उघड करणे समाविष्ट आहे की हे बॅक्टेरियांना हिस्टीडाइन - स्वतंत्र स्थितीत परत आणण्यास कारणीभूत ठरते की नाही हे पाहण्यासाठी.

मानवी चयापचय प्रक्रियेचे अनुकरण करण्यासाठी, प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 बहुतेक वेळा चाचणी प्रणालीमध्ये जोडले जाते. एस 9 अपूर्णांक सीवायपी 450 सह आवश्यक एंजाइम प्रदान करते, ज्यास कंपाऊंडला अधिक प्रतिक्रियात्मक स्वरूपात चयापचय करणे आवश्यक आहे ज्यामुळे बॅक्टेरियाच्या डीएनएमध्ये उत्परिवर्तन होऊ शकते. एएमईएस चाचणीसह एस 9 चे हे संयोजन थेट आणि चयापचय सक्रिय दोन्ही म्युटेजेनिक यंत्रणेची नक्कल करून म्युटेजेनिक संभाव्यतेचे अधिक विस्तृत मूल्यांकन करण्यास अनुमती देते.

2. 2.उत्परिवर्तन चाचण्या (गुणसूत्र विकृती चाचणी, मायक्रोन्यूक्लियस टेस्ट आणि इतर विट्रो अ‍ॅसेज)

एएमईएस चाचणी व्यतिरिक्त, उत्परिवर्तन चाचण्या सामान्यत: रसायनांच्या जीनोटॉक्सिक संभाव्यतेचे मूल्यांकन करण्यासाठी वापरल्या जातात. या चाचण्या क्रोमोसोमल उत्परिवर्तन, जनुक उत्परिवर्तन आणि मायक्रोन्यूक्लीच्या निर्मितीसह अनेक अनुवांशिक नुकसानीचे मूल्यांकन करण्यासाठी अधिक व्यापक आहेत. प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 चा वापर खालील कारणांसाठी उत्परिवर्तन चाचण्यांमध्ये केला जातो:

मायक्रोन्यूक्लियस चाचणी (ओईसीडी 487)

ही चाचणी पेशींमध्ये मायक्रोन्यूक्लीची निर्मिती शोधते, जी लहान, एक्स्ट्रान्यूक्लियर बॉडीज ज्यामध्ये गुणसूत्र किंवा संपूर्ण गुणसूत्रांचे तुकडे असतात जे सेल विभागणी दरम्यान न्यूक्लियसमध्ये समाविष्ट केले गेले नाहीत. द मायक्रोन्यूक्लियस चाचणीक्लॅस्टोजेनिक (गुणसूत्र - ब्रेकिंग) आणि एनेजॅनिक (गुणसूत्र क्रमांकावर परिणाम करणारे) प्रभाव शोधू शकतो. प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 चा वापर चाचणी पदार्थ चयापचय सक्रिय करण्यासाठी केला जातो, कारण काही रसायनांनी केवळ यकृत एंजाइमद्वारे चयापचय केल्यावर केवळ गुणसूत्रांचे नुकसान होते. एस 9 अंश व्हिव्होमध्ये उद्भवणार्‍या चयापचय सक्रियतेचे अनुकरण करून चाचणीची संवेदनशीलता वाढवते.

क्रोमोसोमल एबेरेशन टेस्ट (ओईसीडी 473)

ब्रेक, हटविणे, लिप्यंतरण किंवा इतर प्रकारच्या विकृतींना प्रवृत्त करून एखाद्या पदार्थाने गुणसूत्रांचे स्ट्रक्चरल नुकसान होऊ शकते की नाही हे या चाचणीचे मूल्यांकन करते. मायक्रोन्यूक्लियस चाचणी प्रमाणेचक्रोमोसोमल एबेरेशन टेस्टचयापचय सक्रियतेसह किंवा त्याशिवाय लागू केले जाऊ शकते. यकृतातील चयापचय प्रक्रियेची नक्कल करण्यासाठी प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 चाचणी प्रणालीमध्ये जोडले जाते, ज्यामुळे अशा पदार्थांचे मूल्यांकन होऊ शकते ज्यामुळे त्यांच्या मूळ स्वरूपात गुणसूत्र नुकसान होऊ शकत नाही परंतु यकृत चयापचय नंतर असे करू शकते.

सारणी 1. उत्परिवर्तन चाचण्यांचे तुलनात्मक विचार

एचपीआरटी/एचजीपीआरटी परख (ओईसीडी 476)

मध्येएचपीआरटी/एचजीपीआरटी परख, चिनी हॅमस्टर (सीएचओ किंवा व्ही))) किंवा मानवी लिम्फोब्लास्टॉइड (टीके)) पेशींच्या संस्कृतींना प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 चयापचय मिश्रणाच्या उपस्थितीत चाचणी रसायनाच्या संपर्कात आहे, जे डीएनए - रिअॅक्टिव्ह प्रजातींमध्ये प्रो -म्युटेजन्सला रूपांतरित करण्यासाठी आवश्यक असलेल्या सीवायपी 450 एंजाइमचा पुरवठा करते. संक्षिप्त उपचार आणि सात -दिवसांच्या अभिव्यक्ती कालावधीनंतर, पेशींना 6 - थिओगुआनिनसह आव्हान दिले जाते; हायपोक्सॅन्थाईन - गॅनिन फॉस्फोरिबोसिलट्रान्सफेरेज जनुकातील केवळ फंक्शन उत्परिवर्तनांचे नुकसान करणारे केवळ क्लोन्स टिकून राहतात. उत्परिवर्ती कॉलनीची संख्या एकंदर व्यवहार्यतेशी तुलना करून, संशोधक एक उत्परिवर्तन वारंवारता निर्धारित करतात जे समवर्ती आणि ऐतिहासिक दोन्ही नियंत्रणे पुनरुत्पादकपणे उन्नत झाल्यास, जीनोटॉक्सिक संभाव्यता दर्शवितात.

टीके अससेस (ओईसीडी 490 आणि ओईसीडी 476)

दटीके परख एकतर एल 5178y माऊस लिम्फोमा पेशी (ओईसीडी 490) किंवा सीएचओ पेशी (ओईसीडी 476) थायमिडीन किनेस लोकसमध्ये इंजिनियर्ड हेटरोजिगस. रासायनिक एक्सपोजर ± एस 9 मिक्सनंतर, पेशी पुनर्प्राप्त होतात आणि ट्रायफ्लूरोथाइमिडीन असलेल्या मध्यममध्ये प्लेट केल्या जातात, ज्यामुळे टीके -प्रौढ पेशी नष्ट होतात. टीके ⁻ म्युटंट्स जिवंत राहून १०-१– दिवसांत वसाहती तयार करतात, लहान -कोलोनी म्युटंट्स अनेकदा गुणसूत्र इव्हेंट्स प्रतिबिंबित करतात आणि बिंदू उत्परिवर्तन प्रतिबिंबित करतात. एचपीआरटी/एचजीपीआरटी परखाप्रमाणे, कठोर सायटोटोक्सिसिटी नियंत्रणे आणि सकारात्मक म्युटेजेन बेंचमार्क हे सुनिश्चित करतात की उत्परिवर्तन वारंवारतेत साजरा केल्याने कंपाऊंडच्या जीनोटॉक्सिक जोखमीवर विश्वासार्ह प्रतिबिंबित होते.

4. 4. कर्करोगाच्या जोखमीचे मूल्यांकन

प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 देखील कर्करोगाचे मूल्यांकन करण्याच्या उद्देशाने अभ्यासात वापरला जातो - पदार्थांची संभाव्यता निर्माण करते. मानवी यकृतामध्ये उद्भवणार्‍या चयापचय प्रक्रियेचे अनुकरण करून, एस 9 अपूर्णांक डीएनएला बंधनकारक करण्यास सक्षम असलेल्या प्रतिक्रियाशील चयापचय तयार करण्यास आणि कर्करोगास कारणीभूत ठरणार्‍या उत्परिवर्तनास कारणीभूत असलेल्या संयुगे ओळखण्यास मदत करू शकते.

प्रेरित हॅमस्टर यकृत एस 9 सह वर्धित एएमईएस चाचणी

युरोपियन मेडिसीन एजन्सी (ईएमए) ने जारी केलेल्या ताज्या मार्गदर्शक सूचनांनुसार, पारंपारिक एएमईएस चाचणी काही विशिष्ट एन - नायट्रोसामाइन अशुद्धी, विशेषत: एन - नायट्रोसोडाइमेथिलेमाइन (एनडीएमए) ची म्युटेजॅनिक क्षमता शोधण्यासाठी पुरेशी संवेदनशील असू शकत नाही. म्हणूनच, नॅशनल सेंटर फॉर टॉक्सोलॉजिकल रिसर्च (एनसीटीआर), यू.एस. अन्न व औषध प्रशासन (एफडीए) च्या विभागाने विकसित केलेल्या वर्धित एएमईएस चाचणीला अधिक विश्वासार्ह पर्याय म्हणून शिफारस केली गेली आहे. वर्धित एएमईएस चाचणीने प्रेरित हॅमस्टर यकृत एस 9 ची जोड दिली गेली, ज्याने 30% उंदीर यकृत एस 9 आणि 30% हॅमस्टर यकृत एस 9 समाविष्ट केले. उंदीर आणि हॅमस्टर डेस्मोसोमल सुपरनेटॅन्टंट्स (एस 9) सायटोक्रोम पी 450 एंजाइम - प्रेरणा घेतलेल्या पदार्थांद्वारे उपचारित उंदीर सजीवांपासून तयार केले जावेत. प्रेरित हॅमस्टर यकृत एस 9 चा वापर करून, ही वर्धित चाचणी मानवी चयापचय चांगली बनवते आणि परिणामांची विश्वासार्हता वाढवते.

निष्कर्ष

प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 जीनोटॉक्सिसिटी चाचणीमध्ये एक महत्त्वपूर्ण साधन म्हणून काम करते, संशोधक आणि नियामक एजन्सींना रसायनांच्या उत्परिवर्तित आणि कार्सिनोजेनिक संभाव्यतेचे मूल्यांकन करण्यास मदत करते. एक चयापचय सक्रियता प्रणाली प्रदान करून, जीनोटॉक्सिक होण्यासाठी चयापचय सक्रियता आवश्यक असलेल्या पदार्थांना शोधण्यासाठी एएमईएस चाचणी, उत्परिवर्तन चाचण्या आणि सीवायपी 450 क्रियाकलाप अभ्यासासारख्या अ‍ॅसेजची क्षमता वाढवते. नवीन औषधे, रसायने आणि ग्राहक उत्पादनांची सुरक्षा सुनिश्चित करण्यासाठी त्याचे अनुप्रयोग आवश्यक आहेत. मानवी यकृत चयापचय अनुकरण करण्याच्या भूमिकेसह, प्रेरित उंदीर यकृत एस 9 अंश आधुनिक विषारीशास्त्र आणि नियामक सुरक्षा मूल्यांकनांचा अपरिहार्य भाग आहे.