इम्यूनोलॉजिकल रिसर्चमधील स्प्लेनोसाइट्स: प्रजाती आणि अलगाव, अतिशीत, वितळवण्याच्या पायर्‍या ओलांडून

कीवर्डःस्प्लेनोसाइट्स (एसपीएलएस); सायनोमोलगस माकड स्प्लेनोसाइट्स; रीसस माकड स्प्लेनोसाइट्स; कुत्रा स्प्लेनोसाइट्स; कॅनिन स्प्लेनोसाइट्स; उंदीर स्प्लेनोसाइट्स; माउस स्प्लेनोसाइट्स; उंदीर स्प्लेनोसाइट्स; ससा स्प्लेनोसाइट्स; स्प्लेनोसाइट्स अलगाव; अतिशीत स्प्लेनोसाइट्स; स्प्लेनोसाइट्स वितळवित आहे

आयफेस उत्पादन

स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएलएस)प्लीहापासून विभक्त रोगप्रतिकारक पेशींची एक विषम लोकसंख्या आहे, रक्त फिल्टरिंग, रोगप्रतिकारक प्रतिक्रिया वाढविण्यात आणि होमिओस्टॅसिस राखण्यात एक महत्त्वपूर्ण अवयव आहे. या पेशींमध्ये लिम्फोसाइट्स (टी पेशी, बी पेशी), मॅक्रोफेज, डेन्ड्रिटिक पेशी आणि नैसर्गिक किलर (एनके) पेशी समाविष्ट आहेत, या सर्व गोष्टी अनुकूली आणि जन्मजात प्रतिकारशक्तीमध्ये गंभीर भूमिका बजावतात. स्प्लेनोसाइट्स रोगप्रतिकारक कार्य, लस विकास, ऑटोइम्यून रोग आणि कर्करोग इम्युनोथेरपीचा अभ्यास करण्यासाठी प्रीक्लिनिकल आणि ट्रान्सलेशनल रिसर्चमध्ये मोठ्या प्रमाणात वापरल्या जातात.

स्प्लेनोसाइट्सची भूमिका आणि रचना (एसपीएल)

प्लीहाच्या आत, स्प्लेनोसाइट्स वेगळ्या प्रदेशात राहतात: लाल लगदा, जो रक्त फिल्टर करतो आणि जुन्या लाल रक्त पेशींचे पुनर्वापर करतो आणि पांढरा लगदा, जेथे रोगप्रतिकारक प्रतिक्रिया सुरू केल्या जातात. पांढरा लगदा टी सेल झोन आणि बी सेल फोलिकल्समध्ये आयोजित केला जातो, ज्यामुळे प्रतिजन - सादरीकरण पेशी आणि लिम्फोसाइट्स दरम्यान परस्परसंवाद सुलभ होते. हे अद्वितीय आर्किटेक्चर स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएल) ला एलिस्पॉट, फ्लो सायटोमेट्री आणि मिश्रित लिम्फोसाइट प्रतिक्रियांसारख्या इम्यूनोलॉजिकल अ‍ॅसेजमध्ये एक शक्तिशाली साधन बनवते.

प्रजाती - विशिष्ट स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएल)

-सायनोमोलगस माकड स्प्लेनोसाइट्स:सायनोमोलगस माकड स्प्लेनोसाइट्सचा उपयोग प्रीक्लिनिकल रिसर्चमध्ये केला जातो कारण ते मानवी रोगप्रतिकारक प्रतिक्रियांची अधिक लक्षपूर्वक नक्कल करतात, ज्यामुळे सायनोमोलगस माकड स्प्लेनोसाइट्स भाषांतर अभ्यासासाठी आदर्श बनवतात.

-रीसस माकड स्प्लेनोसाइट्स:रिसस माकड स्प्लेनोसाइट्सचे मानवांच्या जवळच्या इम्यूनोलॉजिकल समानतेसाठीही मूल्य आहे. रीसस माकड स्प्लेनोसाइट्सचा वापर केल्याने प्राणी मॉडेल आणि क्लिनिकल अनुप्रयोगांमधील अंतर कमी करण्यास मदत करते.

-कुत्रा स्प्लेनोसाइट्स / कॅनाइन स्प्लेनोसाइट्स:पशुवैद्यकीय संशोधनात, कुत्रा स्प्लेनोसाइट्स (किंवा कॅनिन स्प्लेनोसाइट्स) कॅनिनमध्ये रोगप्रतिकारक विकारांचा अभ्यास करण्यासाठी आणि मानवी रोगप्रतिकारक प्रतिक्रियेशी तुलना करण्यासाठी वापरला जातो.

-ससा स्प्लेनोसाइट्स: प्रतिपिंडे उत्पादन आणि लस विकासाच्या अभ्यासामध्ये ससा स्प्लेनोसाइट्स महत्त्वपूर्ण आहेत. ससा स्प्लेनोसाइट्स माउस स्प्लेनोसाइट्स किंवा उंदीर स्प्लेनोसाइट्सपेक्षा भिन्न असू शकतात असे तपशील प्रकट करण्यात मदत करतात.

-माउस स्प्लेनोसाइट्स / उंदीर स्प्लेनोसाइट्स:माउस स्प्लेनोसाइट्स इम्यूनोलॉजीमधील सर्वात वारंवार अभ्यासलेल्या स्प्लेनोसाइट्स (एसपीएल) पैकी एक आहे. उंदीरपासून अलगावसाठी प्रोटोकॉल चांगले स्थापित केले आहेत आणि दोन्ही माउस स्प्लेनोसाइट्स आणि उंदीर स्प्लेनोसाइट्स फ्लो सायटोमेट्री, एलिस्पॉट आणि इतर फंक्शनल अ‍ॅसेजसाठी वापरले जातात.

-उंदीर स्प्लेनोसाइट्स:उंदीर स्प्लेनोसाइट्स इम्यूनोटॉक्सिकोलॉजी आणि लस अभ्यासासाठी पूरक मॉडेल प्रदान करतात. अंतर्भागातील फरक समजण्यासाठी उंदीर स्प्लेनोसाइट्सची तुलना बर्‍याचदा माउस स्प्लेनोसाइट्सशी केली जाते.

स्प्लेनोसाइट्स अलगाव

स्प्लेनोसाइट्स अलगावफ्लो सायटोमेट्री, साइटोकाइन उत्पादन अससेस किंवा मिश्रित लिम्फोसाइट प्रतिक्रिया यासारख्या विविध संशोधन अनुप्रयोगांमध्ये वापरल्या जाणार्‍या प्लीहापासून रोगप्रतिकारक पेशी काढण्याची प्रक्रिया आहे.

प्लीहाला सेप्टिक परिस्थितीत, अलगाव द्रावणामध्ये ग्राउंड आणि आरपीएमआय 1640 मध्यम असलेल्या निर्जंतुकीकरण ट्यूबमध्ये हस्तांतरित केले गेले. सेंट्रीफ्यूगेशननंतर ल्युकोसाइट थर काळजीपूर्वक गोळा केला गेला. पेशी आरपीएमआय 1640 मध्यम, सेंट्रीफ्यूज आणि सुपरनाटंट टाकून दिली गेली. पुढील प्रयोगांसाठी वेगळ्या पेशी वापरण्यापूर्वी 2 वेळा ही वॉशिंग स्टेप 1 - पुनरावृत्ती केली गेली.

फ्रीझिंग स्प्लेनोसाइट्स

फ्रीझिंग स्प्लेनोसाइट्सभविष्यातील वापरासाठी पेशी जपण्यासाठी एक महत्त्वपूर्ण पायरी आहे. क्रायोप्रिझर्वेशन संशोधकांना त्यांच्या व्यवहार्यतेची किंवा कार्यक्षमतेशी तडजोड न करता विस्तारित कालावधीसाठी स्प्लेनोसाइट्स संचयित करण्याची परवानगी देते.

अलगाव चरणातून विहीर केंद्रीत सेल निलंबनाचा सत्राचा शोध टाकला जातो आणि सेल एकाग्रता अतिशीत माध्यमात पातळ केली गेली. प्रत्येक अतिशीत ट्यूबमध्ये एक अ‍ॅलिकॉट जोडा आणि गोठवणा content ्या कंटेनरमध्ये हस्तांतरित करा, हे सुनिश्चित करून की पेशी निलंबनात राहतील. ए - 80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजरमध्ये अतिशीत कंटेनर द्रुतपणे गोठवा. - 150 डिग्री सेल्सियस फ्रीझर कंटेनर (किंवा लिक्विड नायट्रोजन टाकी) ला लांब - टर्म स्टोरेजवर हस्तांतरित करा.

स्प्लेनोसाइट्स वितळवित आहे

स्प्लेनोसाइट्स वितळवित आहेक्रायोप्रिझर्वेशन नंतर उच्च सेल व्यवहार्यता आणि कार्यक्षमता सुनिश्चित करण्यासाठी काळजीपूर्वक केले जाणे आवश्यक आहे. डीएमएसओ आणि आयसीई क्रिस्टल निर्मितीचे हानिकारक प्रभाव कमी करण्यासाठी वितळण्याची प्रक्रिया सामान्यत: वेगवान असते.

क्रिओट्यूब्स 37 डिग्री सेल्सियस वॉटर बाथमध्ये हस्तांतरित केले जातात आणि फक्त बारीक बर्फाचे स्फटिक ट्यूबमध्ये राहिले नाही तोपर्यंत वितळवले जातात. गोठलेल्या ट्यूबमध्ये 0.5 - 1 मिली सेल कल्चर माध्यम जोडा, सेल संस्कृती माध्यमाने भरलेल्या 15 मिली ट्यूबमध्ये निलंबन पुन्हा हस्तांतरित करा आणि स्थानांतरित करा. सेंट्रीफ्यूज, सेलची व्यवस्था सैल करण्यासाठी सुपरनेटॅन्टंट काढा आणि ट्यूब टॅप करा. सेल कल्चर माध्यमाचे 1 एमएल जोडा, पिपेटसह उडवा आणि पुन्हा तयार करा, 15 मिलीच्या प्रमाणात मध्यम जोडा. सेंट्रीफ्यूज, डी - सुपरनेटायझ करा, सेल संस्कृती मध्यम 1 मिली जोडा, अपेक्षित सेल एकाग्रतेनुसार मध्यम जोडा. पेशींना सीओ 2 इनक्यूबेटरमध्ये ठेवा आणि झाकणात थोडीशी अंतर देऊन 1 एचसाठी उष्मायन करा. उष्मायनाच्या शेवटी, एकत्रित सेल मोडतोड होण्यास अनुमती देण्यासाठी 1 मिनिटासाठी पुन्हा जा आणि सोडा. पर्जन्यविना सेल निलंबन काळजीपूर्वक नवीन 15 एमएल ट्यूबमध्ये हस्तांतरित केले गेले. सेल क्रियाकलाप निश्चित करण्यासाठी सेल मोजले गेले.

निष्कर्ष

स्प्लेनोसाइट्स, त्यांच्या विविध रचना आणि रोगप्रतिकारक प्रतिक्रियांमध्ये महत्त्वपूर्ण भूमिकेसह, इम्यूनोलॉजिकल संशोधनात अमूल्य साधने आहेत. उंदीर, प्राइमेट्स किंवा ससे आणि कुत्री यासारख्या इतर प्रजातींमधून काढलेले असो, स्प्लेनोसाइट्स रोगप्रतिकारक कार्य, रोग यंत्रणा, लस विकास आणि कर्करोग इम्युनोथेरपीमध्ये गंभीर अभ्यास सुलभ करतात. अलगाव, अतिशीत आणि वितळण्याच्या प्रक्रियेस त्यांची अखंडता आणि व्यवहार्यता जतन करण्यासाठी आवश्यक आहे, संशोधकांना विविध मॉडेल्समध्ये सेल्युलर गतिशीलता एक्सप्लोर करण्यास सक्षम करते. इम्युनोलॉजीबद्दल आमची समज वाढत असताना, स्प्लेनोसाइट्सचा वापर मानवी आणि पशुवैद्यकीय दोन्ही औषधांमध्ये प्रगती सुनिश्चित करण्यासाठी प्रीक्लिनिकल अभ्यास आणि क्लिनिकल अनुप्रयोगांमधील अंतर कमी करण्यासाठी महत्त्वपूर्ण ठरेल.