Avvanzi fil-Bijoanalisi: Ir-Rwol ta 'LC - MS / MS fl-Iżvilupp tad-Droga Oftalmika u Studji ta' l-Umoriji A milwija u Vitrużi

Prodotti IPhase

Kromatografija likwida - Spettrometrija tal-Massa Tandem (LC - MS / MS)

Kromatografija likwida - spettrometrija tal-massa tandem (LC - MS / MS) hija teknika analitika qawwija li tgħaqqad il-kapaċitajiet ta 'separazzjoni ta' kromatografija likwida mal-kapaċitajiet ta 'analiżi tal-massa ta' spettrometrija tal-massa tandem. F'LC - MS / MS, taħlita ta 'kampjun hija l-ewwel separata mill-kromatografija likwida, fejn il-komponenti jinteraġixxu b'mod differenti ma' fażi wieqfa u fażi mobbli, li twassal għas-separazzjoni tagħhom hekk kif jgħaddu mill-kolonna. Il-komponenti separati huma mbagħad jonizzati u analizzati permezz ta 'spettrometrija tal-massa tandem, li taqsam il-joni f'jonji tal-prodott għal analiżi strutturali dettaljata.

Applikazzjonijiet ta 'LC - MS / MS fil-Bijoanalisi

Bijoanalisijinvolvi l-kejl tal-konċentrazzjonijiet tal-mediċina, metaboliti, u komposti bijoloġiċi oħra f'kampjuni bijoloġiċi, bħad-demm, il-plażma, l-awrina, u oħrajnBijofluwidi- LC - MS / MS huwa partikolarment tajjeb - adattat għal dawn l-applikazzjonijiet minħabba s-sensittività għolja tiegħu u l-abbiltà li tiskopri konċentrazzjonijiet baxxi ta 'analiti fil-mira fi ħdan matriċi bijoloġiċi kumplessi.

Lc - MS / MS Technology għall-analiżi ta 'kampjuni bijoloġiċi jiskopri kemm sustanzi eżoġeni kif ukoll endoġeni. Ir-riċerkaturi simulaw kampjuni attwali billi jżidu s-sustanza li għandha titkejjel ma 'matriċi vojtaBiex tifformula kampjun tal-kurva standard kwantitattiv u kampjun ta 'kontroll tal-kwalità. Il-konċentrazzjoni tas-sustanza li għandha titkejjel f'kampjun bijoloġiku hija kwantifikata minn kurva standard.

Sustanzi endoġeni huma sustanzi li jseħħu b'mod naturali fil-ġisem. Sustanza endoġenika - Il-mediċini relatati saru direzzjoni importanti għall-iżvilupp tal-mediċina ġdida f'dawn l-aħħar snin. Flimkien mat-twelid ta 'numru kbir ta' mediċini b'sustanzi endoġeni, il-bijoanalisi ta 'mediċini b'sustanzi endoġeni saret dejjem aktar importanti. Madankollu, fil-preżent, il-validazzjoni ta 'metodi ta' analiżi ta 'kampjuni bijoloġiċi mill-FDA u organizzazzjonijiet oħra ta' reviżjoni tal-mediċina domestika u barranija tiffoka prinċipalment fuq sustanzi eżoġeni, inklużi preċiżjoni, eżattezza, effett ta 'matriċi, rata ta' rkupru, u stabbiltà. Peress li l-iskoperta ta 'sustanzi endoġeni twassal għal problemi fir-riżultati tal-iskoperta minħabba l-effett tagħha stess meta tinkiseb matriċi vojta biex tissimula l-kampjun attwali, il-ħolqien ta' alternattivaMatriċi bijoloġika vojta (matriċi bijoloġika vojta artifiċjali) issolvi din il-problema.

Tabella 1: Deskrizzjoni tas-selettività fil-linji gwida ta 'validazzjoni tal-metodoloġija mainstream mainstream tal-industrija

Żvilupp tal-Metodu Analitiku u Validazzjoni tal-Metodu Analitiku

Fil-bijoanalisi, l-iżgurar tal-affidabbiltà u r-riproduċibilità tar-riżultati analitiċi huma tal-akbar importanza. Dan jeħtieġ l-iżvilupp rigoruż uValidazzjoni ta 'analitikametodi.

Żvilupp tal-Metodu Analitikutinvolvi l-ħolqien ta 'proċeduri ottimizzati għall-iskoperta u l-kwantifikazzjoni ta' analiti ta 'interess. Dan jinkludi l-għażla tal-kundizzjonijiet kromatografiċi xierqa (per eżempju, fażi wieqfa, fażi mobbli, rata tal-fluss) u parametri tal-SM (per eżempju, teknika ta 'jonizzazzjoni, enerġija tal-ħabta) biex tinkiseb sensittività ottimali, riżoluzzjoni, u selettività. Barra minn hekk, il-metodu għandu jkun kapaċi jikkwantifika b'mod preċiż l-analiti fil-preżenza ta 'matriċi bijoloġiċi kumplessi u varjabbli, li ħafna drabi huma magħmula minn proteini, lipidi, u komposti oħra li jistgħu jinterferixxu mal-analiżi.

Ladarba metodu jiġi żviluppat, għandu jgħaddi minnValidazzjoni tal-Metodu AnalitikuBiex tiżgura li tissodisfa l-kriterji ta 'prestazzjoni definiti minn qabel. Dan il-proċess ta 'validazzjoni huwa meħtieġ biex jikkonferma li l-metodu huwa adattat għall-iskop maħsub tiegħu u jikkonforma mar-rekwiżiti regolatorji. Għal metodi bijoanalitiċi, il-validazzjoni tipikament tinkludi bosta parametri ewlenin:

• - Eżattezza u preċiżjoni:L-iżgurar tal-metodu jipprovdi riżultati korretti u konsistenti.
• - Sensittività:Il-kapaċità li tiskopri konċentrazzjonijiet baxxi ta 'l-analit.
• - Selettività:L-abbiltà tal-metodu li tiddistingwi l-analit minn komposti oħra fil-matriċi.
• - Irkupru:L-effiċjenza li biha l-analit jiġi estratt mill-kampjun bijoloġiku.
• - Stabbiltà:L-istabbiltà tal-analiti taħt kundizzjonijiet differenti ta 'ħażna u immaniġġjar.
• - Linearità:Il-kapaċità tal-metodu li tipproduċi riżultati li huma direttament proporzjonali għall-konċentrazzjoni ta 'l-analiti fuq firxa speċifikata.

Matriċi bijoloġika vojta u matriċi vojta għandhom rwoli kritiċi f'dan il-proċess ta 'validazzjoni. Dawn il-kampjuni ta 'kontroll, li ma fihomx l-analit ta' interess, huma essenzjali għall-identifikazzjoni ta 'effetti ta' matriċi potenzjali jew interferenzi matul l-analiżi. Huma jgħinu biex jistabbilixxu livelli ta 'bażi ​​għall-analiti u jiżguraw li l-matriċi nnifisha ma tikkontribwixxix għal kontaminazzjoni jew soppressjoni tas-sinjal. Bl-istess mod, l-użu ta 'Droga - Matriċi Ħieleshuwa kruċjali għall-validazzjoni li l-ebda mediċina residwa jew metaboliti ma huma preżenti fil-kampjun li jista 'jxerred ir-riżultati.

Bijoanalisi ta 'mediċini oftalmiċi

Il-ħajt tal-boċċa huwa maqsum fi tliet saffi, is-saff ta 'barra huwa l-membrana fibruża; Il-membrana tan-nofs hija l-membrana tal-pigment, il-membrana vaskulari jew l-uvea; U l-membrana ta 'ġewwa hija r-retina. Il-boċċa hija maqsuma f'żewġ partijiet, ir-reġjuni ta 'qabel u ta' wara tal-għajn, imdawra mid-dahar tal-lenti.

Figura 1. Anatomija tal-għajn tal-bniedem.

L-istrutturi ewlenin involuti fil-metaboliżmu tad-droga jinkludu:

• Kornea- Is-sit primarju għall-assorbiment topiku tal-mediċina, li fih esterases u enzimi taċ-ċitokromu P450 (CYP) li jimmetabolizzaw il-prodrugs.
• Konġuntiva- Rich fil-mediċina - metabolizzazzjoni ta 'enżimi (per eżempju, esterases u CYPs), li tikkontribwixxi għall-ewwel - tgħaddi l-metaboliżmu qabel l-assorbiment sistemiku.
• Umoriżmu milwiem- Attività metabolika limitata iżda għandha rwol fid-distribuzzjoni u t-tneħħija tad-droga.
• Vitreous- Injezzjoni intravitreali tista 'taġixxi direttament fuq ir-retina u tnaqqas it-tossiċità fiċ-ċirkolazzjoni somatika. Drogi żgħar tal-molekula jinxterdu malajr, u l-mediċini kbar tal-molekula għandhom nofs itwal - ħajja. Bidliet vitrużi bl-età jaffettwaw il-farmakokinetika.
• Sclera- Sclera huwa aktar permeabbli għal mediċini molekula kbar u l-passaġġ tad-droga permezz tal-sclera huwa affettwat prinċipalment mid-daqs molekulari. Injezzjonijiet subconjunctival jippermettu d-drogi jidħlu fil-korojd, iżda l-proċess huwa kkumplikat. Il-melanin scleral jgħaqqad il-mediċina u jaffettwa r-rilaxx u t-tul tal-azzjoni tagħha.
• Reġjun ta 'l-għajnejn posterjuri- It-tessuti retrookulari huma sinjuri fil-fluss tad-demm u d-drogi jistgħu jiġu eliminati permezz taċ-ċirkolazzjoni tal-ġisem jew tal-limfa. L-iperpermeabilità vaskulari korojdali tippermetti li l-mediċini jidħlu faċilment fl-ispazju ta 'barra, iżda huwa diffiċli li taqsam l-epitelju tal-pigment tar-retina, li jaffettwa l-effikaċja u jwassal għal telf. Melanin - Drogi li jorbtu jistgħu jtawlu t-tul tal-azzjoni.

Umoriżmu milwiem u umoriżmu vitruż

Ilumoriżmu milwiemuumoriżmu vitrużhuma fluwidi okulari essenzjali li għandhom rwoli kritiċi fiż-żamma tal-pressjoni intraokulari, jipprovdu nutrijenti u jiffaċilitaw iċ-ċarezza ottika. L-umoriżmu milwiem huwa l-fluwidu rqiq, ċar u mxarrab li jimla kemm il-kmamar ta 'qabel kif ukoll ta' wara tal-għajn, li fihom joni, proteini, karboidrati, u ossiġenu. Il-biċċa l-kbira tal-umoriżmu milwiem prodott mill-ġisem ciliary, joħroġ mill-għajn fuq l-angolu ffurmat mill-ġonta tal-iris u l-kornea. Dawn il-fluwidi jvarjaw bejn speċi, inklużi bnedmin, xadini, fniek, u primati oħra mhux umani. Is-soltu jinġabru b'daqsijiet kbar ta 'lott minn annimali jew pixxini individwali.

Umoriżmu milwiem madwar l-ispeċi

Umor ta 'l-ilma uman

IlUmor ta 'l-ilma umanhuwa fluwidu ċar, nutrijent - rikk li jżomm pressjoni intraokulari u jappoġġja funzjonijiet metaboliċi tal-kornea u lenti. Huwa prodott mill-korp ciliary u joħroġ mill-kamra ta 'qabel qabel ma jiskula permezz tal-malja trabecular.

Umoriżmu milwiem tax-xadina

Ilumoriżmu milwiem tax-xadinatixbah mill-qrib dak tal-bnedmin fil-kompożizzjoni u d-dinamika. Minħabba x-xebh anatomiku bejn il-primati u l-bnedmin,umoriżmu ta 'l-ilma mhux - primat umanIservi bħala referenza essenzjali għal studji oftalmiċi.

Umoriżmu milwiem tal-fenek

Ilumoriżmu milwiem tal-fenekTvarja b'mod sinifikanti minn dak tal-primati, partikolarment fil-konċentrazzjoni tal-proteina u r-rata tal-fatturat tagħha. Il-fniek huma komunement użati fir-riċerka okulari, għalkemm l-ispeċi - varjazzjonijiet speċifiċi għandhom jiġu kkunsidrati.

Umoriżmu vitruż bejn l-ispeċi

Umoriżmu vitru uman

Ilumoriżmu vitru umanhuwa ġel - bħal sustanza magħmula primarjament minn ilma, kollaġen u aċidu hyaluronic. Iżomm il-forma okulari, jassorbi xokkijiet, u jservi bħala kondjuwit għat-trasport tan-nutrijenti.

Monkey Vitreous Humer

IlMonkey Vitreous Humertaqsam kompożizzjoni simili għall-umoriżmu vitru uman, li tagħmelumoriżmu vitruż mhux primat umanMudell imprezzabbli għall-istudju tal-età - deġenerazzjoni vitruża relatata u patoloġiji relatati.

Fniek tal-Fniek Vitreous

IlFniek tal-Fniek Vitreoushuwa strutturalment differenti, li huwa aktar likwidu - bħal u għandu densità aktar baxxa tal-kollaġen. Dawn id-differenzi jinfluwenzaw ir-rispons tiegħu għal interventi kirurġiċi u trattamenti farmakoloġiċi.

Żvilupp ta 'fluwidi okulari artifiċjali u simulati

Artifiċjali Artifiċjali u Artifiċjali ta 'l-umoriżmu Vitreous Artifiċjali

Umoriżmu milwiem artifiċjaliuHumer vitreous artifiċjalihuma sostituti inġinerija ddisinjati għall-użu f'kirurġiji oftalmiċi, kunsinna ta 'mediċini, u applikazzjonijiet ta' riċerka. Dawn il-fluwidi sintetiċi jimitaw il-proprjetajiet bijokimiċi u fiżiċi tal-kontropartijiet naturali tagħhom.

Umoriżmu vitreous akweju u simulat simulat

Umoriżmu akweja simulatuHumer vitreous simulathuma laboratorji - soluzzjonijiet ippreparati użati għall-esperimentazzjoni in vitro u l-immudellar tal-fiżjoloġija okulari. Huma jiffaċilitaw studji kkontrollati mingħajr ir-restrizzjonijiet etiċi assoċjati ma 'kampjuni ta' annimali jew umani.

Konklużjoni

L-użu ta 'kromatografija likwida - spettrometrija tal-massa tandem (LC - MS / MS) fil-bijoanalisi tirrappreżenta avvanz kruċjali fit-tekniki analitiċi għall-iskoperta u l-kwantifikazzjoni tal-komposti bijoloġiċi, inklużi mediċini u metaboliti fil-matriċi bijoloġiċi. Is-sensittività għolja, il-preċiżjoni u s-selettività tal-metodu jagħmluha imprezzabbli kemm fl-analiżi ta 'sustanzi eżoġeni u endoġenji, speċjalment fl-iżvilupp tal-mediċina oftalmika. Il-fehim dettaljat tal-anatomija okulari u r-rwol tal-fluwidi bħall-umoriżmu milwiem u vitruż jenfasizza l-importanza ta 'dawn il-komponenti tal-ġisem fis-sistemi tal-kunsinna tad-droga. Barra minn hekk, l-iżvilupp ta 'fluwidi okulari artifiċjali u simulati jkompli l-possibbiltajiet ta' riċerka filwaqt li jiżgura li jiġu ssodisfati konsiderazzjonijiet etiċi. Hekk kif il-validazzjoni tal-metodu analitiku tkompli tevolvi, tiżgura l-affidabbiltà u r-riproduċibilità meħtieġa għal applikazzjonijiet kliniċi effettivi, partikolarment fl-oftalmoloġija.

Keywords: LC - MS / MS, Matriċi Bijoloġika Blank, Matriċi Blank, Droga - Matriċi Ħieles, Bijofluwidi, Bijoanalisi, Analiżi Bijoloġika, Validazzjoni ta 'Validazzjoni Analitika, Metodu Analitiku, Żvilupp ta' Metodu Analitiku, Humer Akkeu tal-Bniedem, Humor Akkeu tal-Bniedem, umoriżmu akweju tal-fenek, umoriżmu akweju tal-bniedem, umoriżmu tal-uman uman, umoriżmu vitreous tal-fniek. Primat umoriżmu vitruż,Humer akweja simulat, umoriżmu vitreous simulat, umoriżmu akweju artifiċjali, umoriżmu vitruż artifiċjali.

Referenza

Seyedpour, S. M., Lambers, L., Rezazadeh, G., & Ricken, T. (2023). Immudellar matematiku tar-rispons dinamiku ta 'sensur tal-pressjoni tal-glawkoma kapaċitattiva mtejba.Kejl: Sensers, 30, 100936. Https://doi.org/10.1016/j.measen.2023.100936