Analiżi Komparattiva taċ-Ċelloli Mononukleari tad-Demm Periferali (PBMCs): Applikazzjonijiet ta 'Speċi fl-Immunoloġija u Riċerka Terapewtika

IProdotti tal-fażi

Ċelloli Mononukleari tad-Demm Periferali (PBMCs)

Ċelloli Mononukleari tad-Demm Periferali (PBMCs)huma popolazzjoni eteroġenja ta 'ċelloli immuni misjuba fid-demm periferali, ikkaratterizzata minn nukleu tond wieħed. Jinkludu limfoċiti - bħal ċelloli T, ċelloli B, u ċelloli tal-qattiel naturali (NK) u monokiti, filwaqt li jiġu esklużi granuloċiti (per eżempju, newtrofili) u eritroċiti. Il-PBMCs huma tipikament iżolati permezz ta 'ċentrifugazzjoni tal-gradjent tad-densità bl-użu ta' midja bħal Ficoll, li jifred ċelloli bbażati fuq il-galleġġjatura. Dan il-metodu mhux invażiv jippermetti aċċess faċli għal komponenti immuni kritiċi, u jagħmlu l-PBMCs imprezzabbli fir-riċerka dwar l-immunoloġija u l-iżvilupp terapewtiku.

PBMC isolazzjoni

Id-daqs, il-morfoloġija u l-gravità speċifika ta 'ċelloli nukleati singoli huma differenti minn ċelloli oħra fid-demm periferali. Il-gravità speċifika taċ-ċelloli ħomor tad-demm u lewkoċiti polimorfonukleari taqbeż il-1.080, dik taċ-ċelloli nukleati individwali hija ta 'madwar 1.070, u dik tal-plejtlits hija ta' madwar 1.030. Għalhekk, id-differenza bejn il-gravità speċifika ta 'diversi ċelloli tad-demm u ċelloli nukleati individwali tista' tintuża biex tissepara diversi ċelloli tad-demm minn ċelloli nukleati individwali. Ċentrifugazzjoni tal-gradjent tad-densità tal-ficoll hija l-aktar metodu użat komunement għalIżolament PBMCu purifikazzjoni. Ficoll huwa multimer sukrosju, newtrali, b'piż molekulari medju ta '400,000, u meta d-densità hija ta' 1.2 g / mL, ma taqbiżx il-pressjoni osmotika fiżjoloġika normali, u ma tgħaddix minn membrani bijoloġiċi, u għalhekk hija komunement użata għall-PBMC. Għalhekk, ħafna drabi tintuża bħala s-soluzzjoni ta 'separazzjoni għas-separazzjoni PBMC. L-eritroċiti u l-granuloċiti għandhom gravità speċifika kbira u jegħrqu sal-qiegħ tat-tubu wara ċentrifugazzjoni; Il-limfoċiti u l-monokiti għandhom gravità speċifika inqas minn jew daqs il-gravità speċifika tas-soluzzjoni ta 'separazzjoni, u jitilgħu fuq il-wiċċ tas-soluzzjoni ta' separazzjoni wara ċentrifugazzjoni, u parti żgħira taċ-ċelloli tista 'wkoll tiġi sospiża fis-soluzzjoni ta' separazzjoni. Billi jaspiraw iċ-ċelloli tas-saff tal-membrana bajda fuq il-wiċċ tal-likwidu tas-soluzzjoni ta 'separazzjoni u jaħsluhom b'mod xieraq, ċelloli nukleati ta' purità ogħla, i.e., PBMC, jistgħu jiġu iżolati mid-demm periferali.

PBMCs fi speċi differenti

Fi primati mhux umani, partikolarment xadini Cynomolgus u rhesus xadina, ir-riċerka tal-PBMC hija vvalutata ħafna minħabba x-xebh fiżjoloġiku li jaqsmu mal-bnedmin. Riċerka bl-użuCynomolgus Monkey PBMCuRhesus Monkey PBMCippermetta studji dettaljati ta 'mekkaniżmi immuni, u bosta studji li jużaw PBMC tax-xadini enfasizzaw il-potenzjal ta' traduzzjoni tagħhom għall-immunoterapija umana. L-użu ta 'xadina PBMC fl-ittestjar tal-vaċċini, l-iskrining tal-mediċini, u l-modulazzjoni immuni sar pedament kemm fir-riċerka preklinika kif ukoll fir-riċerka klinika.

Bl-istess mod, investigazzjonijiet li jinvolvuKlieb PBMCikkontribwew b'mod sinifikanti għall-immunoloġija veterinarja. Studji li jużaw il-PBMC tal-klieb iddawwal il-mogħdijiet tar-rispons immuni fil-klieb, filwaqt li riċerka li tinvolviPBMC tal-kliebenfasizza wkoll paralleli mal-funzjoni immuni tal-bniedem. Fil-qasam tal-mard żoonotiku, kemm il-PBMC tal-klieb kif ukoll ir-riċerka tal-PBMC tal-klieb ipprovdew dejta kritika dwar l-interazzjonijiet tal-patoġen - ospitanti, li enfasizzaw ir-rwol ta 'dawn iċ-ċelloli fis-sorveljanza tal-mard u l-iżvilupp tat-trattament. L-użu rikurrenti ta 'PBMC tal-klieb u PBMC tal-klieb fi studji komparattivi jenfasizza l-importanza tagħhom bħala sistema mudell.

Il-mudelli tal-gerriema, li jinkluduPBMC tal-faruġurdien PBMC, tradizzjonalment kienu fuq quddiem fir-riċerka immunoloġika. L-investigazzjonijiet bl-użu ta 'PBMC tal-far offrew perspettiva dettaljata dwar ir-regolazzjoni immuni f'kundizzjonijiet infjammatorji kroniċi, u l-użu estensiv ta' PBMC tal-ġurdien kien kruċjali għal studji ġenetiċi u mekkanistiċi ta 'l-awtoimmunità u l-infezzjoni. Ir-riċerkaturi jkomplu jiddependu kemm fuq PBMC tal-far kif ukoll fuq PBMC tal-ġurdien biex jesploraw proċessi immunoloġiċi kumplessi, u jagħmlu dawn il-mudelli indispensabbli. Barra minn hekk, l - integrazzjoni ta 'Hamster PBMCFis-setups sperimentali żiedet dimensjoni oħra ma 'investigazzjonijiet immunoloġiċi, billi l-istudji tal-ħamster PBMC spiss jipprovdu għarfien ġdid dwar patoġenesi virali u strateġiji ta' evażjoni immuni. Bil-PBMC tal-ħamster li jikkumplimenta r-riċerka fuq PBMC tal-far u PBMC tal-ġurdien, il-mudelli tal-gerriema jiffurmaw għodda komprensiva għal studji immuni.

Mudelli kbar ta 'annimali wkoll arrikkew il-qasam, biMinipig PBMCGħandhom rwol ċentrali fit-tqassim ta 'studji prekliniċi u applikazzjonijiet kliniċi. L-użu ta 'Minipig PBMC wera li huwa ta' benefiċċju fir-riċerka dwar il-mediċina riġenerattiva u t-trapjant ta 'organi, fejn Minipig PBMC jipprovdi pjattaforma fiżjoloġikament rilevanti għall-ittestjar ta' terapiji ġodda. Barra minn hekk, investigazzjonijiet li jużawPBMC tal-fenekkienu strumentali fil-produzzjoni tal-antikorpi u fl-istudju ta 'disturbi awtoimmuni, b'riċerka tal-PBMC tal-fenek li tagħti b'mod konsistenti għarfien immunoloġiku siewi. Billi jimpjegaw Minipig PBMC u PBMC tal-fenek flimkien, ir-riċerkaturi jistgħu jevalwaw l-effikaċja u s-sigurtà ta 'immunoterapiji ġodda f'sistemi li jimitaw mill-qrib il-fiżjoloġija tal-bniedem.

Felin uCat PBMCIr-riċerka nqatlet in-niċċa tagħha fl-istudju ta 'infezzjonijiet retrovirali u disfunzjoni immuni. Investigazzjonijiet li jużawFeline PBMCAvvanzaw il-fehim tagħna tas-sistema immunitarja felina, filwaqt li studji ma 'PBMC tal-CAT offrew tieqa fir-risponsi immuni marbuta ma' infezzjonijiet virali. Kemm PBMC felina kif ukoll Cat PBMC ġew enfasizzati ripetutament fir-riċerka li tesplora l-paralleli bejn il-viruses felin u l-immunodefiċjenza umana, li juru li l-użu ripetut ta 'PBMC felina u PBMC tal-CAT huwa kruċjali għall-iżvilupp ta' strateġiji dijanjostiċi u terapewtiċi effettivi.

L-immunoloġija tat-tjur ma tħallietx warajha, biPBMC tat-tiġieġuPapra PBMCStudji li jipprovdu għarfien kritiku dwar il-mekkaniżmi immuni ta 'l-għasafar. Ir-riċerka bl-użu tat-tiġieġ PBMC żvelat aspetti uniċi tar-risponsi immuni tat-tjur, filwaqt li l-investigazzjonijiet li jinvolvu l-PBMC tal-papra komplew jarrikkixxu l-għarfien tagħna tar-reżistenza tal-patoġeni fl-ispeċi tat-tjur. L-użu ripetut ta 'PBMC tat-tiġieġ u PBMC tal-papri fi studji li jeżaminaw infezzjonijiet virali u l-effikaċja tal-vaċċini juri l-importanza tagħhom fil-kontroll tal-mard li jaffettwa kemm il-popolazzjonijiet tal-annimali kif ukoll tal-bniedem.
Barra minn hekk, studji li jużawPBMC tal-Ħnieżer tal-Guineakienu ċentrali għat-tuberkulożi u r-riċerka tal-vaċċini, fejn il-PBMC tal-indi konsistentement iservu bħala indikaturi affidabbli tar-rispons immuni. B'mod parallel, investigazzjonijiet li jinvolvuAlpaca PBMCuCamel PBMCġibdu l-attenzjoni minħabba l-istrutturi ta 'antikorpi uniċi preżenti f'dawn l-ispeċi. Riċerka li tinvolvi Alpaca PBMC u Camel PBMC żvelat applikazzjonijiet terapewtiċi ġodda, kemm bl-ALPACA PBMC kif ukoll il-PBMC Camel qed jintużaw ripetutament biex jesploraw teknoloġiji innovattivi ta 'nanobody u trattamenti bbażati fuq immuni.

Il-kontribuzzjonijiet ta 'PBMC bovinuPBMC tan-nagħaġgħall-immunoloġija agrikola kienu wkoll notevoli. Studji b'PBMC bovini pprovdew għarfien profond dwar mastite bovina u mard respiratorju, u riċerka estensiva bl-użu ta 'PBMC bovina infurmat direttament strateġiji biex ittejjeb is-saħħa tal-baqar. Bl-istess mod, l-użu ripetut ta 'PBMC tan-nagħaġ f'investigazzjonijiet immunoloġiċi għajjat ​​il-fehim tagħna tar-risponsi immuni li jixtarru, u r-riċerka tal-PBMC tan-nagħaġ tkompli tiggwida l-iżvilupp ta' vaċċini effettivi u protokolli ta 'ġestjoni tal-mard.

Rwol fir-riċerka immuni

PBMC jista 'jimita l-ambjent in vivo u jipprovdi mudell in vitro effettiv għall-iżvilupp tad-droga. Billi jiġu osservati l-effetti tal-mediċini fuq il-proliferazzjoni PBMC, l-apoptożi u ċ-ċitotossiċità, l-effikaċja u s-sigurtà tal-mediċini jistgħu jiġu evalwati inizjalment. Billi tistudja l-effetti tal-mediċini fuq il-miri ta 'azzjoni u l-mogħdijiet ta' sinjalazzjoni ta 'PBMC, dan jgħin biex jiskopri miri ġodda ta' azzjoni tad-droga, u dawn is-sejbiet jistgħu jipprovdu ideat u direzzjonijiet ġodda għall-iżvilupp tad-droga.

Applikazzjonijiet fl-antikorpi - Ċellula dipendenti - Ċitotossiċità medjata (ADCC)

L-applikazzjoni tal-PBMC fl-iskoperta tad-droga hija rrappreżentata minnAntikorp - Ċellula Dipendenti - Ċitotossiċità Medjata (ADCC)- Antikorp - Ċellula dipendenti - Ċitotossiċità medjata, kif jissuġġerixxi l-isem, tiddependi fuq l-antikorpi - qtil ta 'ċelluli medjati biex joqtlu ċelloli fil-mira. Il-proċess speċifiku jista 'jinftiehem kif ġej: Is-segment FAB ta' l-antikorp jeħel ma 'epitopi antiġeniċi fuq iċ-ċellula fil-mira. Is-segment FC ta 'l-antikorp jeħel mal-FCR fuq il-wiċċ taċ-ċellula NK (peress li ċ-ċelloli NK huma ċ-ċelloli ewlenin li jista' jkollhom ir-rwol ta 'ADCC, dan jintuża bħala eżempju), u għalhekk iċ-ċellula NK hija attivata, u Perforin u Granzyme huma rilaxxati. Il-perforin u l-granzyme jidħlu fiċ-ċellula permezz tal-pori ffurmati fil-membrana taċ-ċellula fil-mira u jikkawżaw li ċ-ċellula fil-mira tmut billi tattiva l-apoptożi - enzimi relatati.

Applikazzjonijiet fiothER Żvilupp ta 'Droga Immunoterapewtika

• - Reazzjoni tal-limfoċiti mħallta (MLR)

Iċ-ċelloli DC primarji u ċ-ċelloli T huma kkultivati ​​f'sistema li tista 'tintuża biex tevalwa l-attivazzjoni taċ-ċelluli T medjata minn DC. Iċ-ċelloli DC jesprimu PD - L1 fi kwantitajiet kbar fuq il-wiċċ tagħhom, li jeħel ma 'Pd - 1 fuq il-wiċċ taċ-ċelloli T biex jinibixxih. Jekk il-mediċina tista 'effettivament timblokka l-mogħdija ta' reazzjoni bejn it-tnejn, tista 'tistimula l-proliferazzjoni ta' ċelloli T fi kwantitajiet kbar, u b'hekk tivverifika l-attività funzjonali tal-mediċina.

- Testijiet ta 'Ċillattiazzjoni T

T - L-analiżi tal-attivazzjoni taċ-ċelloli hija waħda mill-analiżi użati b'mod komuni biex tevalwa l-effetti ta 'mediċini ta' immunoterapija. Fl-analiżi tal-attivazzjoni taċ-ċelloli T, ċelloli T ikkultivati ​​in vitro huma ġeneralment użati u jingħataw stimoli xierqa, bħal antiġeni jew antikorpi, biex jikkaġunaw l-attivazzjoni taċ-ċelloli T T

- Test tal-proliferazzjoni taċ-ċelloli T

T - testijiet ta 'proliferazzjoni taċ-ċelloli jistgħu jintużaw biex jiġu skrinjati kandidati ta' mediċini immunoterapija u biex tevalwa l-effikaċja tal-mediċini billi tqabbel il-grad ta 't - proliferazzjoni taċ-ċelluli fi mediċini differenti - gruppi trattati kontra grupp ta' kontroll kontra grupp ta 'kontroll

- Stimulazzjoni staphylococcal enterotoxin B ta 'PBMCs

Enterotoxin B staphylococcal huwa superantigen li jeħel direttament mal-molekuli MHC fuq l-antiġen - jippreżentaw ċelloli u huwa ppreżentat lil t - riċetturi taċ-ċelluli. Enterotoxin B staphylococcal għandu l-abbiltà li ma jattivax speċifikament t - ċelloli u jikkaġuna r-rilaxx ta 'ċitokini pro - infjammatorji, bħal IL - 2, IL - 6, eċċ.

Ir-rwol PBMC fis-sindromu tar-rilaxx taċ-ċitokina

PBMC għandu rwol ċentrali fl-iżvilupp ta 'Sindromu tar-rilaxx taċ-ċitokina(CRS), rispons infjammatorju sistemiku akut u potenzjalment li jhedded il-ħajja. Meta jkun stimulat - kemm jekk immunoterapiji bħal ċelloli CAR-T, antikorpi monoklonali, jew minn infezzjonijiet - dawn iċ-ċelloli jsiru attivati ​​ħafna u jnixxu malajr firxa ta 'ċitokini bħal IL-6, IL-1, IFN-γ, u TNF-α. Din il-produzzjoni eċċessiva ta 'ċitokina tista' tikkawża kaskata ta 'avvenimenti li jinkludu deni, tnixxija vaskulari, pressjoni baxxa u disfunzjoni b'ħafna organi. Il-fehim tal-kontribuzzjoni tal-PBMCs fis-CRS wassal għall-iżvilupp ta 'interventi mmirati, bħal inibituri tar-riċetturi IL-6, biex jgħinu biex itaffu s-sindromu billi jtejbu l-maltempata taċ-ċitokina waqt li jippreservaw l-effetti immunoterapewtiċi mixtieqa.

ConClusion

Fil-qosor, dan l-artikolu jenfasizza r-rwol ewlieni li l-PBMCs għandhom fl-avvanz tal-fehim tagħna tal-mekkaniżmi immuni f'fettru wiesa 'ta' speċi. Billi teżamina l-kontribuzzjonijiet uniċi - minn mudelli primati li jirriflettu l-fiżjoloġija umana għal sistemi ta 'annimali gerriema, annimali kbar u tat-tjur li kull wieħed joffri vantaġġi ta' riċerka distintivi - din ir-reviżjoni tenfasizza kif studji komparattivi mhux biss jirfinaw evalwazzjonijiet prekliniċi iżda wkoll iwittu t-triq għal strateġiji immunoterapewtiċi innovattivi. L-integrazzjoni tar-riċerka tal-PBMC f'diversi oqsma bħall-iżvilupp tal-vaċċini, l-ittestjar tal-effikaċja tad-droga, u l-esplorazzjoni ta 'mogħdijiet immuni ġodda jagħtu eżempju tar-rwol indispensabbli tagħha kemm fix-xjenza bażika kif ukoll fl-applikazzjonijiet kliniċi. Fl-aħħar mill-aħħar, l-analiżi tal-ispeċi trasversali tal-PBMCs terġa 'tafferma l-valur ta' dawn il-mudelli ċellulari bħala għodda fundamentali fit-traduzzjoni ta 'skoperti ta' bankijiet fi trattamenti effettivi għal firxa wiesgħa ta 'sfidi immunoloġiċi.

KEywords: Ċellola mononukleari tad-demm periferali, Cynomolgus Monkey PBMC, Rhesus Monkey PBMC, Klieb PBMC, PBMC tal-klieb, Rat PBMC, ġurdien PBMC, Ġrieden PBMC, Hamster PBMC, Minipig PBMC, Fenek pbmc, feline pbmc, Cat PBMC, PBMC tat-tiġieġ, papra PBMC, PBMC tal-Ħnieżer tal-Guinea, Alpaca PBMC, Camel PBMC, Bovin PBMC, PBMC tan-nagħaġ, Antikorp - Ċellula Dipendenti - Ċitotossiċità Medjata (ADCC), Sindromu tar-rilaxx taċ-ċitokina, PBMC iffriżat, PBMC Cryopreserved,Iżolament PBMC, PBMC li jinħall, Kultivazzjoni PBMC, Leukopak, Leukapheresis PBMC, HLA ittajpjat PBMC.