Splenocyty w badaniach immunologicznych: w różnych gatunkach i izolacji, zamrażanie, rozmrażanie

Słowa kluczowe:Splenocyty (SPLS); Splenocyty małpy Cynomolgus; Splenocyty małpy rezus; Splenocyty dla psów; Piejskie splenocyty; Splenocyty szczurów; Mysie splenocyty; Myszy splenocyty; Splenocyty królika; Izolacja splenocytów; Zamrażanie splenocytów; Rozmrażające splenocyty

Produkt iPhase

Splenocyty (SPLS)są heterogeniczną populacją komórek odpornościowych izolowanych z śledziony, istotnego narządu zaangażowanego w filtrowanie krwi, montażu odpowiedzi immunologicznej i utrzymywaniu homeostazy. Komórki te obejmują limfocyty (komórki T, komórki B), makrofagi, komórki dendrytyczne i komórek naturalnego zabójcy (NK), z których wszystkie odgrywają kluczową rolę w odporności adaptacyjnej i wrodzonej. Splenocyty są szeroko stosowane w badaniach przedklinicznych i translacyjnych w celu badania funkcji odpornościowej, rozwoju szczepionek, chorób autoimmunologicznych i immunoterapii raka.

Rola i skład splenocytów (SPLS)

W śledzionie splenocyty znajdują się w różnych obszarach: czerwona miazga, która filtruje krew i recyklinguje stare czerwone krwinki, oraz białą miazgę, w której inicjowane są odpowiedzi immunologiczne. Biała miazga jest uporządkowana w strefach komórek T i pęcherzykach B, ułatwiając interakcje między antygenem - prezentującymi komórki i limfocyty. Ta unikalna architektura sprawia, że ​​splenocyty (SPLS) jest potężnym narzędziem w testach immunologicznych, takich jak ELISPOT, Cytometria przepływowa i mieszane reakcje limfocytów.

Gatunki - specyficzne splenocyty (SPLS)

-Splenocyty małp Cynomolgus:Splenocyty małpy Cynomolgus są stosowane w badaniach przedklinicznych, ponieważ bardziej naśladują ludzkie odpowiedzi immunologiczne, dzięki czemu splenocyty małpy Cynomolgus są idealne do badań translacyjnych.

-Splenocyty małp Rezus:Splenocyty małpy rezus są podobnie cenione ze względu na ich bliskie podobieństwa immunologiczne do ludzi. Badania z wykorzystaniem splenocytów małp rezus pomagają wypełnić lukę między modelami zwierzęcych a zastosowaniem klinicznym.

-Splenocyty dla psów / splenocyty psów:W badaniach weterynaryjnych splenocyty dla psów (lub splenocyty psów) są wykorzystywane do badania zaburzeń immunologicznych w psach i do porównywania z ludzkimi odpowiedzi immunologicznymi.

-Splenocyty królika: Splenocyty królika są ważne w badaniach nad produkcją przeciwciał i rozwoju szczepionek. Splenocyty królika pomagają ujawnić szczegóły, które mogą różnić się od mysich splenocytów lub splenocytów szczura.

-Mysie splenocyty / myszy:Mysie splenocyty są jednym z najczęściej badanych splenocytów (SPLS) w immunologii. Protokoły do ​​izolacji splenocyty myszy są dobrze ustalone, a zarówno splenocyty myszy, jak i myszy są stosowane do cytometrii przepływowej, ELISPOT i innych testów funkcjonalnych.

-Splenocyty szczura:Splenocyty szczurów stanowią komplementarny model do badań immunotoksykologicznych i szczepionek. Splenocyty szczurów są często porównywane z mysim splenocytami w celu zrozumienia różnic międzygatunkowych.

Izolacja splenocytów

Izolacja splenocytówjest procesem ekstrakcji komórek odpornościowych ze śledziony, która ma być stosowana w różnych zastosowaniach badawczych, takich jak cytometria przepływowa, testy produkcyjne cytokin lub mieszane reakcje limfocytów.

Śledzionę usunięto w warunkach aseptycznych, mielony w roztworze izolacyjnym i przeniesiono do sterylnej rurki zawierającej pożywkę RPMI 1640. Warstwę leukocytów starannie zebrano po odwirowaniu. Komórki przemyto pożywką RPMI 1640, odwirowano i odrzucono supernatant. Ten etap mycia powtórzono 1 - 2 razy przed wykorzystaniem izolowanych komórek do dalszych eksperymentów.

Zamrażające splenocyty

Zamrażające splenocytyjest kluczowym krokiem dla zachowania komórek do wykorzystania w przyszłości. Kryokonserwacja pozwala badaczom przechowywać splenocyty przez dłuższe okresy bez uszczerbku dla ich żywotności lub funkcjonalności.

Supernatant zawiesiny komórkowej odwirowanej studni od etapu izolacji jest odrzucany i stężenie komórek rozcieńczono w pożywce zamrażającej. Dodaj porcję do każdej rurki zamrażającej i przenieś do pojemnika zamrażającego, zapewniając, że komórki pozostają w zawieszeniu. Szybko zamrozić zamrażające pojemniki w zamrażarce - 80 ° C. Przenieś do - 150 ° C pojemnika zamrażarki (lub ciekł zbiornik azotowy) na długoterminowe magazynowanie.

Rozmrażające splenocyty

Rozmrażające splenocytynależy dokładnie wykonać, aby zapewnić wysoką żywotność komórek i funkcjonalność po kriokonserwacji. Proces rozmrażania jest zazwyczaj szybki, aby zminimalizować szkodliwe skutki tworzenia się DMSO i kryształu lodu.

Cryotube są przenoszone do kąpieli wodnej o 37 ° C i rozmrożona, aż w rurkach pozostaną tylko drobne kryształy lodu. Dodaj 0,5 - 1 ml pożywki hodowlanej komórkowej do zamrożonej rurki, ponownie ponownie i przenieś zawiesinę do 15 ml rurki wypełnionej pożywką hodowlaną komórkową. Odśrodkowe, usuń supernatant i dotknij rurki, aby poluzować układ komórki. Dodaj 1 ml pożywki do hodowli komórkowej, wydmuchać i ponownie ponownie za pomocą pipety, dodaj medium do objętości 15 ml. wirówka, de - supernatyzuj, dodaj 1 ml pożywki hodowlanej, dodając pożywkę zgodnie z oczekiwanym stężeniem komórek. Umieść komórki w inkubatorze CO2 i inkubuj przez 1h z niewielką szczeliną w pokrywce. Pod koniec inkubacji ponownie zawieszaj i pozostawiaj na 1min, aby umożliwić wytrącanie się zbiorczych resztek komórek. Zawieszenie komórkowe bez opadów starannie przeniesiono do nowej rurki 15 ml. Komórki zliczono w celu określenia aktywności komórkowej.

Wniosek

Splenocyty, z ich różnorodnym składem i kluczową rolą w odpowiedzi immunologiczne, są nieocenionymi narzędziami w badaniach immunologicznych. Niezależnie od tego, czy pochodzą z gryzoni, naczelnych lub innych gatunków, takich jak króliki i psy, splenocyty ułatwiają krytyczne badania w funkcji odpornościowej, mechanizmach choroby, rozwoju szczepionek i immunoterapii raka. Procesy izolacji, zamrażania i rozmrażania są niezbędne do zachowania ich integralności i żywotności, umożliwiając badaczom badanie dynamiki komórkowej w różnych modelach. W miarę pogłębiania się naszego rozumienia immunologii zastosowanie splenocytów będzie nadal przyczynić się do wypełniania luki między badaniami przedklinicznymi a zastosowaniami klinicznymi, zapewniając postępy zarówno w medycynie ludzkiej, jak i weterynaryjnej.