Esplenócitos em pesquisa imunológica: entre espécies e isolamento, etapas congeladas, degelo

Palavras -chave:Esplenócitos (SPLs); Cynomolgus Monkey Splenocytes; Esplenócitos do macaco rhesus; Esplenócitos de cães; Esplenócitos caninos; Esplenócitos de ratos; Esplenócitos de camundongo; Ratos esplenócitos; Esplenócitos de coelho; Isolamento de esplenócitos; Esplenócitos congelados; Esplenócitos de descongelamento

Produto iphase

Esplenócitos (spls)são uma população heterogênea de células imunes isoladas do baço, um órgão vital envolvido na filtragem de sangue, montando respostas imunes e manutenção da homeostase. Essas células incluem linfócitos (células T, células B), macrófagos, células dendríticas e células assassinas naturais (NK), que desempenham papéis críticos na imunidade adaptativa e inata. Os esplenócitos são amplamente utilizados em pesquisas pré -clínicas e translacionais para estudar função imunológica, desenvolvimento de vacinas, doenças autoimunes e imunoterapia ao câncer.

O papel e a composição dos esplenócitos (SPLs)

Dentro do baço, os esplenócitos residem em regiões distintas: a polpa vermelha, que filtra o sangue e recicla glóbulos vermelhos antigos e a polpa branca, onde são iniciadas respostas imunes. A polpa branca é organizada em zonas de células T e folículos das células B, facilitando interações entre o antígeno - Apresentando células e linfócitos. Essa arquitetura única faz com que os esplenócitos (SPLs) uma ferramenta poderosa em ensaios imunológicos, como ELISPOT, citometria de fluxo e reações mistas de linfócitos.

Espécies - esplenócitos específicos (SPLs)

-Cynomolgus Monkey Splenocytes:Os esplenócitos de macacos Cynomolgus são usados ​​em pesquisas pré -clínicas porque imitam mais respostas imunes humanas, tornando os esplenócitos de Monkey Cynomolgus ideais para estudos translacionais.

-Esplenócitos do macaco rhesus:Os esplenócitos do macaco rhesus são igualmente valorizados por suas semelhanças imunológicas próximas aos seres humanos. Estudos usando esplenócitos rhesus macacos ajudam a preencher a lacuna entre modelos animais e aplicações clínicas.

-Esplenócitos de cães / esplenócitos caninos:Na pesquisa veterinária, os esplenócitos de cães (ou esplenócitos caninos) são usados ​​para estudar distúrbios imunológicos em caninos e fazer comparações com respostas imunes humanas.

-Esplenócitos de coelho: Os esplenócitos de coelho são importantes em estudos sobre produção de anticorpos e desenvolvimento de vacinas. Os esplenócitos de coelho ajudam a revelar detalhes que podem diferir dos esplenócitos ou esplenócitos de ratos.

-Esplenócitos / camundongos de camundongos:Os esplenócitos de camundongos são um dos esplenócitos mais frequentemente estudados (SPLs) em imunologia. Os protocolos para esplenócitos de isolamento de camundongos estão bem estabelecidos, e os esplenócitos de camundongo e os ratos são usados ​​para citometria de fluxo, elispot e outros ensaios funcionais.

-Esplenócitos de ratos:Os esplenócitos de ratos fornecem um modelo complementar para estudos de imunotoxicologia e vacina. Os esplenócitos de ratos são frequentemente comparados com os esplenócitos de camundongo para entender as diferenças entre espécies.

Isolamento de esplenócitos

Isolamento de esplenócitosé o processo de extrair células imunes do baço a ser usado em várias aplicações de pesquisa, como citometria de fluxo, ensaios de produção de citocinas ou reações de linfócitos mistos.

O baço foi removido em condições assépticas, solo em solução de isolamento e transferido para um tubo estéril contendo meio RPMI 1640. A camada de leucócitos foi cuidadosamente coletada após a centrifugação. As células foram lavadas com meio RPMI 1640, centrifugadas e o sobrenadante descartado. Esta etapa de lavagem foi repetida 1 - 2 vezes antes das células isoladas serem usadas para outras experiências.

Esplenócitos congelantes

Esplenócitos congelantesé uma etapa crucial para preservar as células para uso futuro. A criopreservação permite que os pesquisadores armazenem esplenócitos por períodos prolongados sem comprometer sua viabilidade ou funcionalidade.

O sobrenadante da suspensão celular bem centrifugada da etapa de isolamento é descartada e a concentração celular foi diluída em meio de congelamento. Adicione uma alíquota a cada tubo de congelamento e transfira para um recipiente de congelamento, garantindo que as células permaneçam em suspensão. Congele rapidamente os recipientes de congelamento em um freezer - 80 ° C. Transfira para - 150 ° C Contêiner de congelador (ou tanque de nitrogênio líquido) para armazenamento longo - termo.

Esplenócitos de descongelamento

Esplenócitos de descongelamentodeve ser feito com cuidado para garantir alta viabilidade e funcionalidade celular após a criopreservação. O processo de descongelamento é normalmente rápido para minimizar os efeitos prejudiciais do DMSO e da formação de cristais de gelo.

Os criotubos são transferidos para um banho de água de 37 ° C e descongelados até que apenas os cristais finos de gelo permanecessem nos tubos. Adicione 0,5 - 1 ml de meio de cultura de células ao tubo congelado, ressuspense e transfira a suspensão para um tubo de 15 ml cheio de meio de cultura de células. Centrífuga, remova o sobrenadante e toque no tubo para afrouxar o arranjo da célula. Adicione 1 ml de meio de cultura de células, sopro e ressuspense com uma pipeta, adicione o meio a um volume de 15 ml. centrífuga, de - sobrenatize, adicione 1 ml de meio de cultura celular, adicionando meio de acordo com a concentração celular esperada. Coloque as células em uma incubadora de CO2 e incubar por 1h com uma ligeira lacuna na tampa. No final da incubação, ressuspense e deixe por 1min para permitir que os detritos celulares agregados precipitem. A suspensão celular sem precipitação foi cuidadosamente transferida para um novo tubo de 15 ml. As células foram contadas para determinar a atividade celular.

Conclusão

Os esplenócitos, com sua composição diversificada e papel fundamental nas respostas imunes, são ferramentas inestimáveis ​​na pesquisa imunológica. Seja derivado de roedores, primatas ou outras espécies como coelhos e cães, os esplenócitos facilitam estudos críticos em função imunológica, mecanismos de doenças, desenvolvimento da vacina e imunoterapia ao câncer. Os processos de isolamento, congelamento e descongelamento são essenciais para preservar sua integridade e viabilidade, permitindo que os pesquisadores explorem a dinâmica celular em vários modelos. À medida que nossa compreensão da imunologia se aprofunda, o uso de esplenócitos continuará a ser fundamental para fazer a ponte entre estudos pré -clínicos e aplicações clínicas, garantindo avanços na medicina humana e veterinária.