Ľudská a živočíšna žlčka slepej biologickej matrice pre vývoj bioanalytickej metódy a overenie bioanalytickej metódy

1 produkty ipházy

2 prázdne biomatrix

Rôzne typybiologické matice, vrátane prázdnej celej krvi, séra, plazmy, žlčka, Mlieko, moč, výkaly, črevné obsahy, viscerálny orgán, sklovitý humor, vodný humor, mozgovomiechové močenie atď. Zhromaždené od zdravých jedincov alebo zdravých experimentálnych zvierat sa kolektívne označuje ako prázdne biologické matice.

3 Potreba použitia prázdnych biologických matíc v predklinických štúdiách

In predklinický výskum, Blank Biological Matrix je základným kameňom na založenie a potvrdenieMetódy biologickej analýzy. Použitím prázdnych matíc od zdravých subjektov alebo experimentálnych zvierat môžu vedci presne pripraviť kalibračné normy a vzorky kontroly kvality, vyhodnotiť špecifickosť, citlivosť, presnosť a matricové účinky analytických metód a zabezpečiť spoľahlivosť výsledkov kvantifikácie koncentrácie liečiva.

4 Overenie a založenie biologickej metódy a uplatňovanie prázdnej biologickej matrice

Ako sa vyžaduje v usmerneniach FDA/EMA, na zabezpečenie presnosti a spoľahlivosti metódy analýzy sa musia použiť prázdne biologické matice. Najmä pri analýze LC - MS/MS môžu rozdiely v zložkách matrice z rôznych zdrojov významne ovplyvniť účinnosť ionizácie. Blank Matica sa používa hlavne na prípravu kalibračných štandardov, prípravu vzoriek kontroly kvality na preskúmanie špecifickosti, selektivity, presnosti, presnosti, účinkov matíc, rýchlosti zotavenia, stability, riedenia linearity, interferenčných účinkov atď. Analytických metód. Selektivita a účinok matrice metódy detekcie vyžadujú vyššie požiadavky na prázdnu maticu.

5 Aplikačné scenáre žlčovej slepej matrice vo vývoji liekov

Umelá žlčová matica (simulovaná matrica žlče)je syntetické riešenie, ktoré simuluje prírodné zložky žlče a používa sa na metabolizmus liekov, toxikológiu a výskum biologickej analýzy.Žlčová maticaMá dôležitú hodnotu aplikácie v nasledujúcich scenároch vývoja liečiva: Farmakokinetické (PK) štúdie liekov na hepatobiliárny systém, absorpčné a prvé priechodné štúdie metabolizmu orálnych liekov, štúdie interakcie žlčových kyselín liečivami, hodnotenie hepatotoxicity a štúdie žlčovej stagy a vývoji biologickej analýzy (LC - MS/MS).

6 liekov na hepatobiliárny systém

Pri vývoji liekov pre hepatobiliárny systém hrá žlčová slepá matrica nenahraditeľnú úlohu ako štandardizovaného in vitro simulačného systému vo farmakokinetike (PK), toxikologickom a biologickom analýze.

6.1 Vyhodnoťte charakteristiky vylučovania žlče drog

Výskum hepatoentestinálneho obehu: Žlč je jednou z dôležitých ciest pre vylučovanie liekov a ich metabolitov. Použitím umelej žlčovej matrice je možné simulovať zmeny koncentrácie liečiv v žlče, aby sa vyhodnotilo, či sa reabsorbujú cez cirkuláciu pečene.

Stanovenie rýchlosti klírensu žlče: Pre lieky, ktoré sa aktívne vylučujú žlčou (ako sú statíny a určité antibiotiká), môže umelá žlčka (simulovaná žlčka) pomôcť kvantifikovať ich účinnosť klírensu a optimalizovať režim dávkovania.

6.2 Študujte účinok žlčových kyselín na absorpciu liečiva

Solubilizačný účinok: Žlčové kyseliny môžu podporovať rozpúšťanie a črevnú absorpciu lipofilných liekov, ako je vitamín D. Umelá žlčka môže simulovať rôzne zloženia žlčových kyselín a vyhodnotiť ich vplyv na biologickú dostupnosť liečiva.

Interakcie liečivých žlčových kyselín: Niektoré liečivá (ako je liraglutid) môžu konkurovať transportérom žlčových kyselín (ako sú BSEP, MRP2) a umelá žlčka sa môžu použiť na štúdium takýchto interakcií, aby sa zabránilo potenciálnemu rizikám stálovania žlčových ciest.

6.3 Posúdenie rizika hepatotoxicity a cholestatázy

Model cholestázy indukovanej liečivom: Umelá žlčka môže simulovať patologické stavy, ako je obštrukcia žlčových ciest a hyperbilirubinémia, a používa sa na zistenie toho, či lieky interferujú s prietokom žlče alebo poškodenia buniek žlčových ciest.

Analýza biomarkerov: Pridaním špecifických komponentov, ako je bilirubín, žlčové kyseliny a zápalové faktory, je možné vyhodnotiť vplyv liekov na zložky žlče a je možné predpovedať klinickú bezpečnosť.

6.4 Etické a praktické výhody nahradenia prírodnej žlče

Riešenie problému nedostatku vzorky: Prírodná žlba je potrebné získať invazívnymi metódami, ako je katetrizácia žlčových ciest, zatiaľ čo umelá žlčka môže byť nekonečne pripravená, aby sa zabránilo etickým obmedzeniam.

Dávka konzistencie: Zloženie umelej matice (simulovaná matica) je kontrolovateľná, čím sa znižuje vplyv individuálnych rozdielov v prírodnej žlčovej úrovni na experimentálne výsledky.

6.5 Podporte vývoj metód biologickej analýzy LC - MS/MS

Korekcia účinku matrice: Komplexné zloženie prírodnej žlče (vysoké žlčové soli, fosfolipidy, pigmenty) môže ľahko viesť k potlačeniu alebo vylepšeniu iónov v analýze LC - MS/MS. Umelá matrica žlče (simulovaná matrica žlče) môže poskytnúť stabilné pozadie, optimalizovať citlivosť a presnosť metódy.

7 Výskum krížových druhov

Zloženie žlče sa veľmi líši medzi rôznymi zvieratami (potkany, psy, opice) a umelá žlčka môže štandardizovať rozdiely v druhoch a zlepšiť translabilitu predklinických údajov.

7.1 Žlčka opice cynomolgus (žlčka NHP)

Žlčka opice cynomolgus je veľmi podobná ako u ľudí, pokiaľ ide o zloženie (ako je profil žlčových kyselín) a expresia transportéra liečiva (ako je BSEP, MRP2), čo z nej robí zlatý štandardný model, ktorý nie je ľudským primátom na hodnotenie interakcií biliárnych biliárnych kyselín a liečiv.

7.2 Žlčová žlčka

Obsah fosfolipidov v žlčovej breme je relatívne vysoký, vďaka čomu je vhodný na štúdium vylučovania žlče a absorpcie lipofilných liekov závislých od žlčovej soli. Rozdiely v zložení žlčových kyselín medzi bíglom a ľuďmi však vyžadujú kalibráciu prostredníctvom umelých matíc.

7.3 Žlčová žlčka SD

Objem zberu žlčov u potkanov SD je relatívne veľký (~ 1 ml/čas), ktorý sa široko používa na štúdie črevného obehu pečeňového čreva a štúdie hepatotoxicity liečiva. Malo by sa však poznamenať, že ich vysoká základná hodnota bilirubínu môže interferovať s LC - MS/MS analýzou.

7.4 ICR/CD - 1 žlč myši

CD - 1 myš má malý objem žlče (50 - 200 μl), vďaka čomu sú vhodné na štúdium mechanizmov modelov génovej modifikácie (ako je dráha FXR/PXR), ale na prispôsobenie sú potrebné mikro kvantifikačné techniky.

7.5 Žlč C57BL/6 myši

Myš C57BL/6 sa bežne používa v modeloch metabolických chorôb a zmeny v ich zložení žlče môžu odrážať patologické podmienky, čo si vyžaduje použitie umelej žlčovej matrice na simuláciu patológie.

Vyššie uvedené modely sa musia kombinovať s umelou žlčovou matricou, aby sa kontrolovali rozdiely v druhoch a optimalizáciu porovnateľnosti krížových druhov metód LC - MS/MS.

Záver

Umelá matrica žlče, ako kľúčový nástroj na simuláciu funkcie prírodnej žlče, hrá nenahraditeľnú úlohu pri vývoji hepatobiliárnych liekov. Štandardizáciou zloženia žlče rôznych druhov (ako sú napríklad opice cynomolgus, bíglové psy, potkany SD, potkany CD - 1, C57BL/6), umelá matrica žlče efektívne rieši základné výzvy, ako sú etické obmedzenia, individuálne rozdiely a patologická stavová simulácia prírodných vzoriek, významne zvyšuje spoľahlivosť a translačnú hodnotu drogového výskumu.

S vývojom presnej medicíny bude umelá žlčová matrica ďalej kombinovať patologické špecifické komponenty a mikrofluidné technológie na dynamické simuláciu mikroprostredia pečene a žlčníka, čím poskytne silnejšiu podporu inovatívnemu vývoju liekov.

Kľúčové slová:Prázdna biologická analýza, vzorka biologickej matrice, analýza biomatrixu, ľudská žlčka, žlčka zvierat, žlčová vzorka, umelá žlčka, simulovaná žlčka, NHP Žlč, LC - MS/MS, Bioanalytical Method Method Method Method Methoding, Bise Dog Bile, Bile Bile.

Referencia

Li T, Chiang JY. Signalizácia žlčovej kyseliny pri metabolických ochoreniach a liečivej terapii. Pharmacol Rev. 2014 okt; 66 (4): 948 - 83. Doi: 10.1124/pr.113.008201. PMID: 25073467; PMCID: PMC4180336.