Splenocyty v imunologickom výskume: naprieč druhmi a izoláciami, mrazivé, rozmrazovacie kroky

Kľúčové slová:Splenocyty (SPLS); Splenocyty cynomolgus; Splenocyty rhesus opíc; Splenocyty psov; Splenocyty psie; Potkany splenocyty; Myšacie splenocyty; Myši splenocyty; Králičie splenocyty; Izolácia splenocytov; Mrazivé splenocyty; Rozmrazujúce splenocyty

Produkt

Splenocyty (SPLS)sú heterogénnou populáciou imunitných buniek izolovaných z sleziny, životne dôležitým orgánom zapojeným do filtrovania krvi, montážnych imunitných reakcií a udržiavaní homeostázy. Tieto bunky zahŕňajú lymfocyty (T bunky, B bunky), makrofágy, dendritické bunky a prírodné zabíjačky (NK), ktoré všetky hrajú kritickú úlohu v adaptívnej a vrodenej imunite. Splenocyty sa široko používajú v predklinickom a translačnom výskume na štúdium imunitných funkcií, vývoja vakcíny, autoimunitných chorôb a imunoterapii rakoviny.

Úloha a zloženie splenocytov (SPLS)

V slezine sa splenocyty nachádzajú v rôznych oblastiach: červená dužina, ktorá filtruje krv a recykluje staré červené krvinky a biela buničina, kde sa začínajú imunitné reakcie. Biela buničina je usporiadaná do zón T buniek a Folikuly B -buniek, čo uľahčuje interakcie medzi bunkami prezentujúcimi antigén a lymfocytmi. Táto jedinečná architektúra robí splenocyty (SPLS) silným nástrojom v imunologických testoch, ako je Elispot, prietoková cytometria a zmiešané lymfocytové reakcie.

Druh - Špecifické splenocyty (SPLS)

-Splenocyty cynomolgus:Splenocyty cynomolgus opíc sa používajú v predklinickom výskume, pretože viac napodobňujú ľudské imunitné reakcie, vďaka čomu sú splenocyty opíc cynomolgus ideálne pre translačné štúdie.

-Splenocyty rhesus:Splenocyty rhesus opíc sa podobne oceňujú pre svoje úzke imunologické podobnosti s ľuďmi. Štúdie využívajúce splenocyty rhesus opíc pomáhajú preklenúť priepasť medzi zvieracími modelmi a klinickými aplikáciami.

-Splenocyty / psie splenocyty:Vo veterinárnom výskume sa splenocyty psov (alebo psie splenocyty) používajú na štúdium imunitných porúch v psoch a na porovnanie s ľudskými imunitnými reakciami.

-Králičie splenocyty: Králičie splenocyty sú dôležité v štúdiách o produkcii protilátok a vývoji vakcíny. Králičie splenocyty pomáhajú odhaliť detaily, ktoré sa môžu líšiť od splenocytov myší alebo splenocytov potkanov.

-Myšacie splenocyty / myši splenocyty:Myšie splenocyty sú jedným z najčastejšie študovaných splenocytov (SPLS) v imunológii. Protokoly na izolačné splenocyty z myší sú dobre stanovené a splenocyty myši a splenocyty myší sa používajú na prietokovú cytometriu, ELISPOT a ďalšie funkčné testy.

-Splenocyty potkanov:Splenocyty potkanov poskytujú komplementárny model pre imunotoxikológiu a štúdie vakcíny. Splenocyty potkanov sa často porovnávajú s myšacím splenocytmi, aby sa pochopili rozdiely v medzišpeciciách.

Izolácia splenocytov

Izolácia splenocytovje proces extrahovania imunitných buniek z sleziny, ktorá sa používa v rôznych výskumných aplikáciách, ako je prietoková cytometria, testy produkcie cytokínov alebo zmiešané reakcie lymfocytov.

Slezina sa odstránila za aseptických podmienok, zem v izolačnom roztoku a prenesená do sterilnej trubice obsahujúcej médium RPMI 1640. Vrstva leukocytov sa po odstredení starostlivo zhromaždila. Bunky boli premyté médiom RPMI 1640, odstredené a supernatant zlikvidovaný. Tento krok premytia sa opakoval 1 - 2 -krát predtým, ako sa izolované bunky použili na ďalšie experimenty.

Mrazivé splenocyty

Mrazivé splenocytyje rozhodujúcim krokom pre zachovanie buniek pre budúce použitie. Kryokonzervácia umožňuje vedcom ukladať splenocyty na dlhšie obdobia bez toho, aby ohrozila ich životaschopnosť alebo funkčnosť.

Supernatant dobre odstredenej bunkovej suspenzie z izolačného kroku sa zlikviduje a koncentrácia buniek sa zriedila v zmraziacom médiu. Pridajte alikvot do každej mraziacej trubice a preneste do mrazivej nádoby, čím sa zaistite, aby bunky zostali v suspenzii. Rýchlo zmrazte mrazivé nádoby v mrazničke - 80 ° C. Prenos do nádoby na mrazničku 150 ° C (alebo nádrž na kvapalný dusík) na dlhodobé skladovanie.

Rozmrazujúce splenocyty

Rozmrazujúce splenocytyMusí sa robiť opatrne, aby sa zabezpečila vysoká životaschopnosť a funkčnosť buniek po kryokonzervácii. Proces rozmrazovania je zvyčajne rýchly, aby sa minimalizovali škodlivé účinky tvorby DMSO a ľadových kryštálov.

Kryotuby sa prenášajú do vodného kúpeľa 37 ° C a rozmrazia sa, až kým v skúmavkách nezostanú iba jemné ľadové kryštály. Pridajte 0,5 - 1 ml bunkového kultivačného média do mrazenej trubice, resuspend a preneste suspenziu do 15 ml skúmavky naplnenej bunkovým kultivačným médiom. Centrifuge, odstráňte supernatant a klepnutím na trubicu uvoľnite usporiadanie buniek. Pridajte 1 ml média bunkovej kultúry, vyfúknite a resuspend s pipetou pridajte médium do objemu 15 ml. Centrifuge, de - supernatizovať, pridať 1 ml média bunkového kultivácie, čím pridajte médium podľa očakávanej koncentrácie buniek. Bunky vložte do inkubátora CO2 a inkubujte 1 hodinu s miernou medzerou v veku. Na konci inkubácie resuspend a nechajte 1 minútu, aby sa umožnilo zrážanie agregovaných zvyškov buniek. Bunková suspenzia bez zrážok bola starostlivo prenesená do novej 15 ml trubice. Bunky sa spočítali na stanovenie aktivity buniek.

Záver

Splenocyty s rozmanitým zložením a kľúčovou úlohou v imunitných reakciách sú neoceniteľnými nástrojmi v imunologickom výskume. Či už je odvodený od hlodavcov, primátov alebo iných druhov, ako sú králiky a psy, splenocyty uľahčujú kritické štúdie imunitných funkcií, mechanizmov chorôb, vývoja vakcíny a imunoterapie rakoviny. Procesy izolácie, zmrazenia a rozmrazovania sú nevyhnutné na zachovanie ich integrity a životaschopnosti, čo vedcom umožňuje skúmať bunkovú dynamiku v rôznych modeloch. Keď sa naše chápanie imunológie prehlbuje, použitie splenocytov bude naďalej nápomocné pri preklenutí priepasti medzi predklinickými štúdiami a klinickými aplikáciami, čím sa zabezpečí pokrok v ľudskej aj veterinárnej medicíne.