Terapia Inovative CGT - Lentivirus - paketimi i makinës - qelizat imune

Terapia Inovative CGT - Lentivirus - paketimi i makinës - qelizat imune

Terapia e qelizave imune është një trajtim inovativ i kancerit që rrit sistemin imunitar të trupit për të synuar dhe eleminuar qelizat e kancerit. Format kryesore përfshijnë citokinë - Terapia e qelizave vrasëse të induktuar, T - Terapia e qelizave dhe terapia e qelizave CAR - T. Terapia e CAR - T përfshin riprogramimin e qelizave T për të shprehur receptorët kimerikë të antigjenit (CAR) që synojnë në mënyrë specifike qelizat e tumorit, duke treguar sukses të rëndësishëm në kanceret hematologjike si leuçemia dhe limfoma.

Fjalë kyçe: makina - t, lentiviral, vektori lentiviral, lentivirus gjurmues

Përgatitja e CAR - Terapia e qelizave T

Në përgjithësi, hapat kryesorë për të përgatitur qelizat e makinave - T janë si më poshtë:

Burimi i figurës: Dana - Instituti i Kancerit Farber - CAR T - Gjykimet Klinike të Qelizave Ndihmoni shumë pacientë me mieloma të kthehen në shëndet

1. 1.Sorting (T - Izolimi i Qelizës)

Hapi i parë në përgatitjen e qelizave të CAR - T është të izoloni qelizat T - nga qelizat e bardha të gjakut në gjakun periferik të pacientit. Teknika të tilla si ndarja e rruazave imunomagnetike ose citometria e rrjedhës zakonisht përdoren për të nxjerrë CD3+- Rich T - Qelizat nga gjaku. Për të siguruar pastërtinë e qelizave, procesi i klasifikimit duhet të jetë shumë i saktë, duke siguruar që të merren një numër i mjaftueshëm i qelizave të larta - Cilësia T -.

2. 2. Stimulimi (T - aktivizimi i qelizave)

Qelizat T - të nxjerra aktivizohen in vitro, zakonisht duke përdorur aCD3 /CD28 T - Kit aktivizimi /zgjerimi i qelizave. Qelizat T të aktivizuara hyjnë në një gjendje aktive, duke i përgatitur ato për transfeksionin e gjeneve. Përmes këtij procesi, funksioni i qelizave T është përmirësuar, duke kontribuar në modifikimin dhe amplifikimin e mëvonshëm gjenetik.

3. 3.Transfeksioni (redaktimi i gjenit)

Qelizat T të aktivizuara i nënshtrohen transfeksionit të gjeneve për të shprehur një receptor kimerik të antigjenit (CAR). Ky proces përdor zakonishtvektor lentiviralPër të futur gjenet e CAR në qelizat T. Lentivirus është një mjet efektiv i transduksionit të gjeneve, me avantazhin e integrimit të qëndrueshëm të gjenit të synuar (siç është gjeni CAR) në gjenomin e qelizave. Duke infektuar qelizat T dhe duke transferuar gjenin e CAR në ADN -në e qelizave T, lentivirusi u mundëson qelizave T të shprehin makina të gjata - afat. Geni CAR përfshin një fragment të vetëm - të ndryshueshme të zinxhirit (SCFV) të një antitrupi që mundëson qelizat T të njohin antigjene specifike në sipërfaqen e qelizave të tumorit dhe të fillojnë një përgjigje imune duke aktivizuar rajonet sinjalizuese të qelizave T. Siç tregohet në Figurën 2. Transfeksioni lentiviral ka karakteristikat e efikasitetit dhe stabilitetit të lartë, në mënyrë që gjeni CAR të shprehet në qelizat T për një kohë të gjatë.

Burimi i figurës: Singapori Car - Terapia e qelizave T

4. 4.Amplifikimi (përhapja e qelizave)

Pas transaksionit, qelizat CAR - T hyjnë në fazën e amplifikimit, ku faktorët e rritjes siç janëIl - 2shtohen për të promovuar përhapjen e qelizave. Qëllimi i këtij procesi është të sigurojë që një numër i mjaftueshëm i qelizave CAR - T janë në dispozicion për infuzion eventual në pacient. Procesi i amplifikimit duhet të bëhet në kushte sterile për të garantuar cilësinë dhe sasinë e qelizave.

5. 5. Kontrolli i Quality (QC)
6. Para rikthimit në pacient, kontrolli i cilësisë është thelbësor gjatë procesit të përgatitjes. Qelizat e përgatitura të makinës - T i nënshtrohen një testimi të rreptë për tëSiguroni pastërtinë, aktivitetin, efikasitetin e transaksionit dhe pajtueshmërinë e tyre me standardet e trajtimit. Për më tepër, testimi për ndotjen e qelizave ose reaksionet anësore është i nevojshëm për të siguruar sigurinë dhe efikasitetin terapeutik të qelizave pas riinfuzionit në pacient.

IMortshmëria e transaksionit të lentivirusit në qelizat imune

Teknologjia e transaksionit lentiviral është thelbësore në terapinë e qelizave imune, veçanërisht për redaktimin e gjeneve dhe inxhinierinë e qelizave. Vektorët lentiviral, që rrjedhin nga HIV i modifikuar - 1, përdoren gjerësisht për shkak të aftësisë së tyre për të integruar gjenet në gjenomin pritës, duke siguruar shprehje të qëndrueshme, të gjatë - afatgjatë. Ata mund të infektojnë qelizat ndarëse dhe jo - ndarëse, dhe siguria e tyre është përmirësuar duke modifikuar gjenet kryesore për të parandaluar përsëritjen. Këta vektorë tani përdoren zakonisht në terapinë e gjeneve, redaktimin e gjeneve dhe hulumtimin e biologjisë qelizore për efikasitetin dhe qëndrueshmërinë e tyre në shpërndarjen e gjeneve.

Burimi i figurës: obiosh.com/produc

1. Transduksioni i gjenit të efektshëm

Vektori lentiviral mund të japë në mënyrë efikase gjenet e synuara, siç është gjeni CAR, në qelizat imune dhe t'i integrojë këto gjene në mënyrë të qëndrueshme në gjenomin qelizor, duke siguruar që gjeni CAR të shprehet vazhdimisht gjatë ndarjes së qelizave dhe përhapjes. Kjo aftësi e lartë e transduksionit të efikasitetit është thelbësore për suksesin e imunoterapisë.

2. Imunogjeniteti i ulët 

Në krahasim me vektorët e tjerë viralë, lentiviruset kanë një imunogjenitet më të ulët. Si rezultat, kur lentiviruset përdoren për të shndërruar qelizat imune, sistemi imunitar i pacientit gjeneron një përgjigje imune relativisht më të dobët ndaj virusit. Kjo ndihmon për të minimizuar reagimet anësore, veçanërisht në mbijetesën e gjatë - afatgjatë të qelizave pas infuzionit, duke parandaluar kështu refuzimin e tepërt të imunitetit.

3. Përshtatshmëria e madhe për qelizat imune

Vektori lentiviral është i aftë të transmetojë në mënyrë efikase lloje të ndryshme të qelizave imune,Veçanërisht qelizat T dhe qelizat NK. Përmes transduksionit lentiviral, qelizat imune mund të fitojnë tumor - aftësi specifike të njohjes, duke rritur kështu aftësinë e tyre për të synuar dhe vrarë qelizat e tumorit.

4.Përcaktimi i qelizave efektive të transduktuara në njohjen e qelizave të synuara 

Në imunoterapi,qelizat efektive të transduktuaraReferojuni qelizave imune që, pas transmetimit, shprehin CAR dhe ushtrojnë aktivitet anti - tumor. Vektorët lentiviral mund të japin saktësisht gjenin e CAR në këto qeliza efektive, duke u mundësuar atyre të njohin dhe synojnë qelizat e tumorit.Qelizat e synuarajanë qelizat e tumorit që janë identifikuar dhe shkatërruar nga këto qeliza imune. Përmes transduksionit lentiviral, qelizat imune mund të përmirësojnë specifikën e tyre në njohjen dhe vrasjen e qelizave të tumorit, duke përmirësuar kështu efikasitetin terapeutik.

Në këtë kontekst, iPhase, një udhëheqës në reagentët e hulumtimit in vitro, ka zhvilluar një pajisje paketimi lentivirus dhe reagentin e përqendrimit të lentivirusit për të thjeshtuar kompleksitetin e transduksionit për klientët e imunoterapisë dhe për të përmirësuar shkallën e suksesit të transeksionit të qëndrueshëm të gjeneve. Këto produkte ofrojnë një zgjidhje një - Ndalesa për klientët.

Ifaza lentivirusPshes

Kompleti i paketimit të lentivirusit iPhasepërmban të gjithë reagentët thelbësorë të kërkuar për tëPaketimi i lentivirusit, duke thjeshtuar ndjeshëm procesin eksperimental dhe kursimin e kohës dhe përpjekjes. Ky komplet përfshin:

• Paketimi i lentivirusit përzierje plazmid
• Reagent
• plazmid igfp
• Reagenti i përqendrimit të lentivirusit iPhase

Ky komplet me të vërtetë rregullon eksperimentin! Pa nevojë për përgatitje të komplikuar të reagentit, paketimi i lentivirusit mund të përfundojë në mënyrë efikase duke ndjekur thjesht udhëzimet e përfshira.Përparësitë unike të kompletit përfshijnë kohën e shkurtër të paketimit, titrin e lartë viral dhe funksionimin e lehtë, duke e bërë atë ideal për fillestarët në paketimin e lentivirusit. Setdo grup i reagentëve i nënshtrohet një kontrolli të rreptë të cilësisë për të siguruar rezultate të sakta, të besueshme dhe të riprodhueshme, duke përmirësuar ndjeshëm efikasitetin e transfeksionit dhe stabilitetin e vektorëve viralë, duke siguruar kështu mbështetje të fuqishme teknike për përgatitjen e qelizave imune.

Për më tepër, për të ndihmuar klientët të kursejnë kostot, iPhase gjithashtu ka zhvilluar dhe prodhuar reagentin e përqendrimit të lentivirusit, duke ofruar një zgjidhje të shpejtë dhe të thjeshtë të përqendrimit.Duke përzier thjesht supernatantin e lentivirusit me reagentin e përqendrimit, i ndjekur nga një inkubacion i shkurtër dhe centrifugim duke përdorur një centrifugë standarde, grimcat lentivirale mund të përqendrohen me shpejtësi. Ky proces nuk kërkon një ultracentrifuge, duke e bërë atë një mundësi të përshtatshme dhe me kosto - efektive për shumicën e përdoruesve të laboratorit.

Shkurtimisht, reagenti i përqendrimit të lentivirusit iPhase jo vetëm që përmirëson ndjeshëm efikasitetin e transfeksionit, por gjithashtu siguron mbështetje të lartë - cilësi të vektorit viral për përgatitjen e qelizave imune. Shtë një produkt thelbësor për eksperimente rutinore, hulumtime paraklinike dhe fusha të tjera të aplikimit.

Si përmbledhje, imunoterapia, veçanërisht terapitë e qelizave CAR - T dhe CAR - NK, paraqet një drejtim të ri në trajtimin modern të kancerit. Përmes proceseve të sakta të tilla si klasifikimi i qelizave, aktivizimi, transduksioni, zgjerimi dhe kontrolli i cilësisë, shkencëtarët mund të përgatisin produkte efikase dhe të sigurta të qelizave imune për pacientët, duke mundësuar trajtimin e synuar të kancerit.Transduksioni lentiviral, si një teknologji thelbësore, luan një rol kritik në përgatitjen e qelizave CAR - T dhe CAR - NK për shkak të efikasitetit dhe stabilitetit të tij të lartë.Me përparime të vazhdueshme teknologjike, imunoterapia mban potencialin për të ofruar mundësi inovative të trajtimit për më shumë pacientë, duke siguruar vlerë më të madhe klinike. Në të ardhmen, imunoterapia pritet të sjellë shpresë terapeutike revolucionare për më shumë pacientë me kancer.

Për të përmbushur nevojat e transmetimit të gjeneve, shprehjes dhe hulumtimit të sëmundjeve, iPhase ofron komplete të paketimit të lentivirusit, reagentët e përqendrimit të lentivirusit dhe lentiviruset e gjurmuesve. Këto lentiviruse gjurmuese janë të paketuara me proteina fluoreshente jeshile (GFP), proteina fluoreshente të kuqe MCherry, dhe luciferase, duke mundësuar ndjekjen e lehtë të qelizave të synuara si in vitro ashtu edhe in vivo.

Përveç kësaj, iPhase mund të ofrojë edhe dy lentiviruse gjurmuese të paketuara: GFP & Luciferase dhe McHerry & Luciferase. Këta gjurmues mund të zgjidhen ose kombinohen bazuar në nevojat eksperimentale, rregullimin e rrjedhës së punës dhe rritjen e efikasitetit për gjurmimin e vërtetë - kohë dhe monitorimin e qelizave të synuara.

IfazaImmunoterapiRi gëzuarPshes

Përveç lentivirusit - Produkte të lidhura të përdorura në CAR - T ose CAR - Terapitë NK, iPhase, si një udhëheqës në reagentët e kërkimit in vitro, gjithashtu ka dhënë kontribute të rëndësishme për të mbështetur risitë në CGT (Cell dhe Gene Therapy) dhe fusha të tjera. IPhase ka zhvilluar dhe prodhuar leukocite dhe PBMC (qelizat mononukleare të gjakut periferik) të izoluara përmes leukaferezës, së bashku me komplete të ndryshme të izolimit të qelizave imune, për të mbështetur zhvillimin e shpejtë të imunoterapisë.

Produktet iPhase ofrojnë avantazhet e mëposhtme, dheNjë Certifikatë e Analizës (COA)Verifikuar nga iPhase është në dispozicion për secilën grumbull.

Siguri 

Produktet iPhase janë buruar nga donatorë/kafshë të shëndetshme që i janë nënshtruar ekzaminimit të plotë para -, me rezultate negative për testimin viral (HIV - 1/2, HBV, HCV, sifilis).

Pajtueshmëri  

IPhase siguron forma të pëlqimit të informuar të nënshkruar nga donatorët, me verifikim të qartë dhe të gjurmueshëm të burimit.

Profesionalizëm

Produktet e siguruara nga iPhase, të marra përmes leukapherezës, trajtohen nga profesionistë të trajnuar. Eachdo grumbull shoqërohet nga një COA përkatëse, dhe produktet transportohen nën një zinxhir të rreptë të ftohtë për të siguruar sigurinë, shpërndarjen e shpejtë dhe sigurimin e cilësisë.

Shërbim ndaj klientit

IPhase ofron të larta - cilësi pas - shërbimit të shitjeve, duke siguruar një përvojë të qetë dhe të pandërprerë gjatë gjithë procesit të provës.