Analiza krahasuese e qelizave mononukleare të gjakut periferik (PBMC): nëpër aplikime të specieve në imunologji dhe kërkime terapeutike

IProdukte fazore

Qelizat mononukleare të gjakut periferik (PBMC)

Qelizat mononukleare të gjakut periferik (PBMC)janë një popullsi heterogjene e qelizave imune që gjenden në gjakun periferik, të karakterizuar nga një bërthamë e vetme e rrumbullakët. Ato përfshijnë limfocitet - të tilla si qelizat T, qelizat B dhe qelizat vrasëse natyrore (NK) dhe monocitet, ndërsa përjashtojnë granulocitet (p.sh., neutrofilet) dhe eritrocitet. PBMC -të zakonisht izolohen përmes centrifugimit të gradientit të densitetit duke përdorur media si Ficoll, i cili ndan qelizat bazuar në buoyancy. Kjo metodë jo - pushtuese lejon qasje të lehtë në përbërësit kritikë imunitar, duke i bërë PBMC të paçmueshme në hulumtimin e imunologjisë dhe zhvillimin terapeutik.

PBMC Isotrap

Madhësia, morfologjia dhe graviteti specifik i qelizave të vetme nukleare ndryshojnë nga qelizat e tjera në gjakun periferik. Graviteti specifik i qelizave të kuqe të gjakut dhe leukociteve polimorfonukleare tejkalon 1.080, ajo e qelizave individuale të bërthamave është rreth 1.070, dhe ajo e trombociteve është rreth 1.030. Prandaj, ndryshimi midis gravitetit specifik të qelizave të ndryshme të gjakut dhe qelizave individuale të bërthamave mund të përdoret për të ndarë qelizat e ndryshme të gjakut nga qelizat individuale të bërthamave. Centrifugimi i gradientit të densitetit Ficoll është metoda më e përdorur përIzolimi i PBMCdhe pastrimi. Ficoll është një multimer i saharozës, neutral, me një peshë mesatare molekulare prej 400,000, dhe kur densiteti është 1.2 g/ml, ai nuk tejkalon presionin normal fiziologjik osmotik, dhe nuk kalon përmes membranave biologjike, kështu që zakonisht përdoret për PBMC. Prandaj, shpesh përdoret si zgjidhje e ndarjes për ndarjen e PBMC. Eritrocitet dhe granulocitet kanë një gravitet të madh specifik dhe lavaman në fund të tubit pas centrifugimit; Limfocitet dhe monocitet kanë një gravitet specifik më pak se ose të barabartë me gravitetin specifik të zgjidhjes së ndarjes, dhe notojnë në sipërfaqen e zgjidhjes së ndarjes pas centrifugimit, dhe një pjesë e vogël e qelizave gjithashtu mund të pezullohet në zgjidhjen e ndarjes. Duke aspiruar qelizat e shtresave të membranës së bardhë në sipërfaqen e lëngshme të tretësirës së ndarjes dhe duke i larë ato në mënyrë të përshtatshme, qelizat e vetme nukleated me pastërti më të lartë, d.m.th., PBMC, mund të izolohen nga gjaku periferik.

PBMC në specie të ndryshme

Në primatët jo - njerëzorë, veçanërisht majmunët Cynomolgus dhe Monkey Rhesus, hulumtimi PBMC vlerësohet shumë për shkak të ngjashmërive fiziologjike që ata ndajnë me njerëzit. Hulumtimi duke përdorurCynomolgus Monkey PBMCdheRhesus Monkey PBMCka mundësuar studime të hollësishme të mekanizmave imunitar, dhe studime të shumta që përdorin Monkey PBMC kanë nënvizuar potencialin e tyre të përkthimit për imunoterapinë njerëzore. Përdorimi i Monkey PBMC në testimin e vaksinave, ekzaminimin e ilaçeve dhe modulimin imunitar është bërë një gur themeli si në hulumtimin paraklinik ashtu edhe në klinik.

Në mënyrë të ngjashme, hetimet që përfshijnëqen pbmckanë kontribuar ndjeshëm në imunologjinë veterinare. Studimet që përdorin PBMC të qenve kanë ndriçuar shtigjet e përgjigjes imune në qenët, ndërsa kërkimet që përfshijnëPBMC qenitka nxjerrë në pah edhe paralelet me funksionin imunitar të njeriut. Në fushën e sëmundjeve zoonotike, të dy qentë PBMC dhe hulumtimi i qenit PBMC kanë siguruar të dhëna kritike mbi patogjenin - ndërveprimet e hostit, duke theksuar rolin e këtyre qelizave në mbikëqyrjen e sëmundjeve dhe zhvillimin e trajtimit. Përdorimi i përsëritur i qenve PBMC dhe PBMC qenit në studime krahasuese nënvizon rëndësinë e tyre si një sistem model.

Modelet e brejtësve, të cilat përfshijnëmiu pbmcdhemiu PBMC, kanë qenë tradicionalisht në pararojë të hulumtimeve imunologjike. Hetimet që përdorin Rat PBMC kanë ofruar një perspektivë të hollësishme mbi rregullimin e imunitetit në kushte kronike inflamatore, dhe përdorimi i gjerë i PBMC të miut ka qenë thelbësor për studimet gjenetike dhe mekanike të autoimunitetit dhe infeksionit. Studiuesit vazhdojnë të mbështeten në të dy Rat PBMC dhe Mouse PBMC për të eksploruar procese komplekse imunologjike, duke i bërë këto modele të domosdoshme. Për më tepër, integrimi illoj brejtësi PBMCNë vendosjet eksperimentale ka shtuar një dimension tjetër në hetimet imunologjike, pasi studimet e brejtësit PBMC shpesh ofrojnë njohuri të reja për patogjenezën virale dhe strategjitë e evazionit imunitar. Me brejtësi PBMC që plotëson hulumtimin mbi Rat PBMC dhe PBMC të miut, modelet e brejtësve formojnë kolektivisht një mjete gjithëpërfshirëse për studime imune.

Modelet e mëdha të kafshëve gjithashtu kanë pasuruar fushën, meMiniPig PBMCduke luajtur një rol kryesor në urimin e studimeve paraklinike dhe aplikimeve klinike. Përdorimi i MiniPig PBMC ka dëshmuar të dobishëm në mjekimin rigjenerues dhe hulumtimin e transplantimit të organeve, ku MiniPig PBMC siguron një platformë fiziologjikisht të rëndësishme për testimin e terapive të reja. Për më tepër, hetimet duke përdorurlepuri PBMCkanë qenë instrumentale në prodhimin e antitrupave dhe studimin e çrregullimeve autoimune, me hulumtimin e lepujve PBMC duke dhënë vazhdimisht njohuri imunologjike të vlefshme. Duke përdorur minipig PBMC dhe PBMC Rabbit në të njëjtën kohë, studiuesit mund të vlerësojnë efikasitetin dhe sigurinë e imunoterapive të reja në sistemet që imitojnë nga afër fiziologjinë e njeriut.

E maces dhemace pbmcHulumtimet kanë gdhendur ngrohtësinë e tij në studimin e infeksioneve retrovirale dhe mosfunksionimit imunitar. Hetimet duke përdorurmace PBMCkemi avancuar të kuptuarit tonë për sistemin imunitar të maces, ndërsa studimet me CAT PBMC kanë ofruar një dritare në përgjigjet imune të lidhura me infeksionet virale. Të dy PBMC të maces dhe CAT PBMC janë theksuar në mënyrë të përsëritur në hulumtime duke eksploruar paralelet midis viruseve të imunitetit të maces dhe imunitetit njerëzor, duke dëshmuar se përdorimi i përsëritur i PBMC të maces dhe CAT PBMC është thelbësor për zhvillimin e strategjive efektive diagnostikuese dhe terapeutike.

Imunologjia e shpendëve nuk ka mbetur pas, mepule PBMCdheDuck PBMCStudimet që ofrojnë njohuri kritike për mekanizmat imunitar të zogjve. Hulumtimi duke përdorur pulën PBMC ka zbuluar aspekte unike të përgjigjeve imune të shpendëve, ndërsa hetimet që përfshijnë Duck PBMC kanë pasuruar më tej kuptimin tonë për rezistencën patogjene në speciet e shpendëve. Përdorimi i përsëritur i PBMC të pulës dhe PBMC Duck në studimet që ekzaminojnë infeksionet virale dhe efikasitetin e vaksinave ilustron rëndësinë e tyre në kontrollin e sëmundjeve që prekin si popullsinë e kafshëve ashtu edhe ato njerëzore.
Për më tepër, studimet duke përdorurGuinea Pig PBMCkanë qenë thelbësore për tuberkulozin dhe hulumtimin e vaksinave, ku guine derra PBMC vazhdimisht shërben si tregues të besueshëm të përgjigjes imune. Paralelisht, hetimet që përfshijnëAlpaca PBMCdheDeve PBMCkanë tërhequr vëmendjen për shkak të strukturave unike të antitrupave të pranishëm në këto specie. Hulumtimet që përfshijnë Alpaca PBMC dhe Camel PBMC ka zbuluar aplikacione terapeutike të reja, me të dy Alpaca PBMC dhe Camel PBMC duke u përdorur vazhdimisht për të eksploruar teknologjitë inovative të nanobody dhe trajtimet e bazuara në imun.

Kontributet ePBMCdhedele PBMCPër imunologjinë bujqësore kanë qenë gjithashtu të jashtëzakonshme. Studimet me PBMC të gjedhit kanë dhënë njohuri të thella në mastitin e gjedhit dhe sëmundjet e frymëmarrjes, dhe hulumtime të gjera duke përdorur PBMC të gjedhit kanë informuar drejtpërdrejt strategji për të përmirësuar shëndetin e bagëtive. Në të njëjtën mënyrë, përdorimi i përsëritur i deleve PBMC në hetimet imunologjike ka pasuruar të kuptuarit tonë për përgjigjet imunitare ruminante, dhe hulumtimi i deleve PBMC vazhdon të udhëheqë zhvillimin e vaksinave efektive dhe protokolleve të menaxhimit të sëmundjeve.

Roli në kërkimin imunitar

PBMC mund të imitojë mjedisin in vivo dhe të sigurojë një model efektiv in vitro për zhvillimin e ilaçeve. Duke vëzhguar efektet e ilaçeve në përhapjen e PBMC, apoptozën dhe citotoksicitetin, efikasiteti dhe siguria e ilaçeve fillimisht mund të vlerësohen. Duke studiuar efektet e ilaçeve në objektivat e veprimit dhe rrugët e sinjalizimit të PBMC, ndihmon për të zbuluar objektiva të reja të veprimit të drogës, dhe këto gjetje mund të japin ide dhe udhëzime të reja për zhvillimin e ilaçeve.

Aplikimet në antitrupa - Qeliza e varur - Citotoksiciteti i ndërmjetësuar (ADCC)

Zbatimi i PBMC në zbulimin e drogës përfaqësohet ngaAntitrupa - Qeliza e varur - Citotoksiciteti i ndërmjetësuar (ADCC). Antitrupa - Qeliza e varur - Citotoksiciteti i ndërmjetësuar, siç sugjeron emri, mbështetet në antitrupat - Vrasja e qelizave të ndërmjetësuara për të vrarë qelizat e synuara. Procesi specifik mund të kuptohet si më poshtë: Segmenti Fab i antitrupave lidhet me një epitop antigjenik në qelizën e synuar. Segmenti FC i antitrupave lidhet me FCR në sipërfaqen e qelizës NK (pasi qelizat NK janë qelizat kryesore që mund të luajnë rolin e ADCC, kjo përdoret si një shembull), dhe kështu aktivizohet qeliza NK, dhe perforina dhe granzima lëshohen. Perforina dhe granzima hyjnë në qelizë përmes poreve të formuara në membranën e qelizës së synuar dhe bëjnë që qeliza e synuar të vdesë duke aktivizuar apoptozën - enzimat e lidhura.

Aplikimet nëouER Zhvillimi imunoterapeutik i ilaçeve

• - Reagimi i limfociteve të përziera (MLR)

Qelizat parësore DC dhe qelizat T janë të kulturuara në një sistem që mund të përdoret për të vlerësuar aktivizimin e qelizave T të ndërmjetësuar. Qelizat DC shprehin PD - L1 në sasi të mëdha në sipërfaqen e tyre, e cila lidhet me PD - 1 në sipërfaqen e qelizave T për ta penguar atë. Nëse ilaçi mund të bllokojë në mënyrë efektive rrugën e reagimit midis të dyve, ai mund të stimulojë përhapjen e qelizave T në sasi të mëdha, duke verifikuar kështu aktivitetin funksional të ilaçit.

- Analizat e qelizave T

Vlerësimi i aktivizimit të qelizave është një nga analizat e përdorura zakonisht për të vlerësuar efektet e ilaçeve të imunoterapisë. Në analizat e aktivizimit të qelizave T, qelizat T të kulturuara in vitro zakonisht përdoren dhe u jepen stimuj të duhur, siç janë antigjenet ose antitrupat, për të nxitur aktivizimin e qelizave T

- Vlerësimi i Përhapjes së Qelizave T

T - Analizat e Përhapjes së Qelizave mund të përdoren për të kontrolluar kandidatët e ilaçeve për imunoterapinë dhe për të vlerësuar efektivitetin e ilaçeve duke krahasuar shkallën e përhapjes së qelizave në ilaçe të ndryshme - Grupet e trajtuara kundrejt një grupi kontrolli

- Enterotoksina stafilokokale B Stimulimi i PBMCs

Enterotoksina stafilokokale B është një superantigjen që lidhet drejtpërdrejt me molekulat MHC në antigjen - qelizat prezantuese dhe i paraqitet receptorëve të qelizave T -. Enterotoksina stafilokokale B ka aftësinë për të mos aktivizuar në mënyrë specifike qelizat t - dhe të nxisë lëshimin e citokinave pro - inflamator, siç është IL - 2, IL - 6, etj.

Roli i PBMC në sindromën e lëshimit të citokinës

PBMC luan një rol kryesor në zhvillimin esindromi i lëshimit të citokinës(CRS), një përgjigje akute dhe potencialisht e rrezikshme për jetën sistemike inflamatore. Kur stimulohet - qoftë nga imunoterapitë si qelizat CAR - T, antitrupat monoklonal, ose nga infeksionet - këto qeliza bëhen shumë të aktivizuara dhe sekretojnë me shpejtësi një gamë të citokineve si IL - 6, IL - 1, IFN - γ, dhe TNF - α. Kjo prodhim i tepërt i citokinës mund të shkaktojë një kaskadë të ngjarjeve, duke përfshirë ethe, rrjedhje vaskulare, hipotension dhe mosfunksionim shumë -organ. Të kuptuarit e kontributit të PBMC në CRS ka çuar në zhvillimin e ndërhyrjeve të synuara, siç janë frenuesit e receptorit IL - 6, për të ndihmuar në zbutjen e sindromës duke kaluar stuhinë e citokinës duke ruajtur efektet e dëshiruara imunoterapeutike.

Konrrëmujë

Si përmbledhje, ky artikull nënvizon rolin kryesor që luajnë PBMC në avancimin e të kuptuarit tonë të mekanizmave imunitar në një spektër të gjerë të specieve. Duke ekzaminuar kontributet unike - nga modelet primare që pasqyrojnë fiziologjinë e njeriut në sistemet e brejtësve, kafshëve të mëdha dhe shpendëve që secila ofron avantazhe dalluese të hulumtimit - ky rishikim nënvizon se si studimet krahasuese jo vetëm që rafinojnë vlerësimet paraklinike, por edhe hapin rrugën për strategji imunoterapeutike inovative. Integrimi i hulumtimit të PBMC në fusha të ndryshme si zhvillimi i vaksinave, testimi i efikasitetit të ilaçeve dhe eksplorimi i rrugëve të reja imune ilustron rolin e tij të domosdoshëm si në shkencën themelore ashtu edhe në aplikimet klinike. Në fund të fundit, Kryqi - Analiza e specieve të PBMC riafirmon vlerën e këtyre modeleve qelizore si mjete themelore në përkthimin e zbulimeve të stolit në trajtime efektive për një gamë të gjerë të sfidave imunologjike.

KEywords: Qelizë mononukleare e gjakut periferik, Cynomolgus Monkey PBMC, Rhesus Monkey PBMC, Qen pbmc, PBMC qenit, Rat PBMC, Mouse PBMC, Minj PBMC, lloj brejtësi PBMC, MiniPig PBMC, Lepuri PBMC, Feline PBMC, Mace pbmc, PBMC PICKE, Duck PBMC, Guinea Pig PBMC, Alpaca PBMC, Deve PBMC, Bovine PBMC, Dele PBMC, Antitrupa - Qeliza e varur - Citotoksiciteti i ndërmjetësuar (ADCC), Sindromi i lëshimit të citokinës, PBMC i ngrirë, PBMC i cryopreservuar,Izolimi i PBMC, Shtrehje PBMC, Kultivim PBMC, Leukopak, Leukaphereza PBMC, HLA shtypur PBMC.