Hépatatocytes primér: Alat penting pikeun maju - Klinik Inters Interro

Hépatatocytes primér: Alat penting pikeun maju - Klinik Inters Interro

Our, salaku organ primér pikeun paparan ubar, pholes peran anu penting dina métabolisme ubar sareng prosés toksitas. Hépatathaty mim primér gaduh spektrum pinuh karakteristik sélulér sareng tingkat fisiologis sareng kerian, kalebet mémbran okokolik pikeun salepatan métablikase) sareng perbatatan retoda. Kusabab éta, hépatosephari primér sacara lega dianggap standar emas pikeun diwangun model-model ati, métabatitas ubar, sareng studi keterjaar, sareng studibikitas. Artikel ieu nyayogikeun gambaran modél budaya 2D sareng 3D Dasarana dumasar kana HOSatocies primér sareng aplikasi na waktu pangwangunan.

Konci: Hepatocytes primér, budidaya awéwé 2D, budidaya 3D 3D, organoid, CO - budaya.

1. 1. Anolasi hépatosit primér

Goleration hépatosit primér mangrupikeun léngkah kritis dina ngadegkeun modél ati vith, kalayan dua - Léngkah Coldaetase minyak wangangan anu paling sering dianggo. Dina sato anu langkung alit, pernik ati tiasa didamel ku urat portal atanapi leuwih lemah, sedengkeun sato langkung ageung biasana ngabutuhkeun perawat atanapi bagéan. Sababaraha faktor konci pangaruh isolasi anu suksés Hepatocies: Mimiti, kolaagatase kedah janten sanés - sistotoxic. Kadua, waktosna diganti pentingKadua di handapeun nyerna - nyerna sareng overnes - nyerep tiasa badtion sareng daya maju. Katilu, kaayaan ati kedah optimal, sapertos hépatosit anu sénsitip ka whochik. Ahita anu dianggo pikeun persiapan hotorangki kedah keren beresih pikeun ngirangan saluran métabolik sareng nyegah hypoxia motixia sareng iSchemia tetep.

Standar pikeun hépatosit primér anu dianggo dina panalungtikan narkoba sapertos kieu:

1. 2..

Modél Hepatocyte

Éta ngandung ubar lengkep - énzim mérabolizing sareng kracactor, ngajantenkeun cocog pikeun diajar jalan métabolik métabolik. Tapi, konsepsi hépatosit gurosa sareng kagiatan ubar - énzim modabolize én laun turun ngurangan waktos incubation jaman Exro nambahan 4 jam incubation. Modél ieu biasana dianggo pikeun ngira-ngira tina obat ubar sareng sedeng pikeun harga anu jelas. Nalika laju clearance kirang ti 20%, nilai clearance akurat teu tiasa ditangtukeun. Gantung terikat hépatocyte - dumasar kana modél metabét vithech henteu cekap pikeun ngahasilkeun réaksi métabolik anu terering - sanyawa metabolize, sahingga nyusun kamampuan ieu sareng produk métabolisme sareng produk métabolize. Metode Hepatocyte Lepathocyte (Gambar 1) tiasa dianggo pikeun ngalegaan waktos inkubasi ka 20 jam atanapi langkung panjang.

Aplikasi:Aktivitas énzim sareng pemilihan stabilitas métabolik pikeun ubar molekul leutik.

Gambar 1. Gantung Hepatocyte Proses Mindahkeun Mode

Sumber: Pelabag Metab, 2012,40 (9): 1860-1865

Model Hepatocyte Platabyte

Hobatosit primér diurus dina sistem 2D dina kolega - piring kabeneran ditanam. Hépathocytes nunjukkeun morfologi epitelial, kalayan inti protruding, sering nunjukkeun dina bentuk binuceated. Sejars of hépatebocyte tunggal monathocyte tunggal kalebet: 1. Pencinta polaritas sél sareng fungsina. Kurangna jenis sél anu sanés (I.e., N Henteu - sél parlenchal) anu diperyogikeun pikeun fungsi normal.3. Istabilitas pikeun nyayogikeun gizi sareng faktor lacori pikeun ngadukung hépatosit dina ngalaksanakeun pungsieulana (sapertos asam bili batuan sareng asam protéin).

Aplikasi:

1). Evaluasi ubar - Interaksi obat:Ieu kalebet Induksi Énzim, énzim Énggal, sareng studi transporter. Anu mimiti, nalika ubar ubar salaku langkung indahat ningkat ekspréskeun ubar - énzim monabolize sareng pangiriman. Anu kuat anu tiasa dicandakulutan sabagian sabagian sakaligus, sapertos indenobankital cyp2barbital, cyp3eb6, cyp3a4, cypp9, kemarna aya MRP2. Bréh, aya spésiés - bédana husus dina kumaha hépatosithes ngabales induger. Contona, Roticicin mangrupikeun anu pikaresepeun pikeun hidung sareng kelenci sareng kelencii motongiintit, tapi teu ngagaduhan pangaruh indukna dina beurit hépatosytes. Akhirna kunjungan platumpy plattik catekat catingan anu tiasa ngabalukarkeun ekspresi basal tina p450-an sareng artifisial ngaropéa. Sakumaha anu dipidangkeun di Gambar 3, hepatosit dina kapadetan plating anu handap nunjukkeun kagiatan basalal harlog, cyp2b6, sareng cyp2eb6, sareng cyp3a. Tapi réspon induksi kuat. Ku sabab éta, hépatoki sehat dina kapururan plating anu cocog pikeun meunangkeun data Fisiologis anu relevan.

Gambar 2. Hubungan antara ménrik kecatatan manusa ceurik sareng induksi énzim sareng énzim

Sumber: téknologi penemuan ubar ayeuna, 2010, 7: 188 - 198

2). Penilaian Hepatoticity: Panggespon parobahan megorik handapeun mikroskop lampu, sapertos morfologi sél, voluole sareng gaganti Toplop Lipid, sareng gagantel sél / dampak sélutan. Ketersi hépatocyte Hepatocyte (sakumaha anu ditunjuk ku Assinotransfenerase, dehydrogenase lactrogenase, sareng alanin aminografase) sareng apoposis). Pikeun sitokin - Synotobility medication, budaya Motorayay hobatosit hase teu tiasa ngaduga réspon anu dirobih aliran anu henteu diasah tina sél anu dangkal, sél kerah sinarmade, sél sushydal, sél leprocifer.

3). "Métode relay" kanggo diajar tina clearance sanyawa anu laun sareng métabolit: Kagiatan ubar - énzim monabolizing dina hépatocyte compét anu mimiti mimiti turun saatos 24 jam plating. Saatos henteu menyarkeun hépatosit anu tiasa dicampur nganggo sérum - sedeng bébas ngandung sanyawa anu tiasa ku 24 jam, masang dikumpulkeun teras dialihkeun ka kartu hancis anu énggal (inohong 3).

Gambar 3. Polandian Metode Metode Métode

Sumber: hurup metabolisme narkoba, 2016, 10: 3 - 15

3). Patali ka tukang consol, akhir baduttosis, lakan endemomal, sareng seru wates wates dina target hepatosit leutik - Dina obat asam leutik - Dinaék ubar beuteung leutik.

Model budidaya Sandwich

Di Vitro, hépatosites tiasa dikuburkeun antara dua lapisan kolaben atanapi matrigel pikeun ngarekolah pikeun ngarobalkeun struktur-struktur skor, anu katelah buuk Sandwich. Hobatisoses diwatabileun antara dua lapisan gél - kolanden (struktur sandwich) tiasa ningkatkeun mayit sareng ngajaga fungsionalitasna. Leuwih jauh, hepatosit di budaya Sandwich tiasa malikkeun polariti, ngantep pikeun di Loksumeral sareng Angkat Virculular,.

Gambar 4. Ekspresi Polarched of Transporters di modél Sandwich Hepathocyte

Sumber: téknologi penemuan ubar ayeuna, 2010, 7, 188 - 198

Aplikasi:

1. 1). Perkiraan ékskrési biliian sanyawa.
2. 2). Evaluasi kabebaran hepical sareng biliwier tina sanyawa ropogenous sareng métabolite.
3. 3). Peryogikeun ciraran didorong ku métabolisme sareng pamuter, sareng diwangun diwangun Fipteriological Organe basis.
4. 4). Ngajalikeun Hepatotherity sareng mékanisme nyayogikeun kana ubar klinik - Lampu Uyah. Dibédikasi teratur kana modél System Sistem Farmacology pikeun ngaduga poténsial ubar - tatu ati dina manusa.
5.  
   1. 3. Budaya 3d Hepatocyte

6. Dina sistem budaya 3 3D, hépatososit dina tilu asijana asiog asims, anu langkung saé dina hiji budaya orok riveay. Sistem ieu prioskeun sél - sél sareng sél - interaksi matrix, anu tiasa mulangkeun seueur fitur fisiologis ati, kabentukna polusi, sareng fasilitas lemes. Budaya HepatocyTocte primér munggaran tiasa dianggo pikeun sina diajar ati - fungsi khusus dina vivo, ménélafa.

   Modél Spheroid

Ngaliwatan téknik sapertos Ultra - Aya budaya serupakan rendah, ngagantung budaya serelek, sareng budaya anu mmodét (hépatosity naék kana agriks jero sareng diaméter es. Hiji kauntungan tina budaya spheroid nyaéta unggal sphero hungkul ukur aya 1,330 - 2,000 sél, nyata ngirangan jumlah sél disurnikeun ku téhnik jiwa 3D sanés. Panaliti anyar anu parantos nunjukkeun yén budaya spheroste héptoyte prime bisa ngadukung nepi ka 5 minggu, kalayan kagiatan rézim kana kagiatan énzim sésana ampir, ku ékskrési, metabétik, metabonia anu langkung dilestarikeun. Nanging, ati jauh dillasik tibatan agrégat sél. Sisi tiras dasarna jalan-jalan asam, bari bimbah ngalelep kaluar tina sisi anu jangkungna, anu fitur konci tina struktur lembut anu kompléks, sareng ieu henteu tiasa diruntikan di modél sphuloid.

Aplikasi:

1. 1). Studi spésipasi sanyawa rengkuh sareng métabolit na.
2. 2). Panaliti Hepatoticity.
3. 3). Evaluasi ka satél jero, endocytosis, lahan endosomi, sareng épék siliting ukuran gentos HobatisHoste - kapasitas Udbar anu nyaring ubar leutik -

Gambar 5. Metoda biro berkarat

Modél Organoid ati

Sahesan konspensasi tina organoida nyaéta: struktur 3 di diturunkeun tina sél cat, sél progenitor, atanapi bentuk anu digedékeun ngahasilkeun fungsi in vivro. Organoid ati anu dikenal salaku modél paling paling maju pikeun Panaliti biologi kumisan.

Sumber sél pikeun konstruksi organoid ati:

① sél sirung pluripotent (pscs):

Sél batang cyronyonic (Mona sareng ngaleungitkeun sél batang anu pluring) ngagaduhan sabeulah pluripotensi luhur, plastik, sareng kapasitas anu henteu terlukat. Dina pangaruh faktor sinyal khusus, aranjeunna ngabédakeun kana Hepatocyte - sapertos sél kalayan kagiatan sareng fungsina. Naduh, O organooad diturunkeun tina pscs tiasa divasi épigenet atanapi gentos genetik sareng robahan genetik, nunjukkeun kagiatan aneeploom kritikalhomallibal kritik akrostomal kritik.

Aplikasi:

1. 1). Modél panyakit ati
2. 2). Modél panyakit ati
3. 3). Tés cytotoxity ubar

② jaringan alami - sél diturunkeun: ieu kalebet cholangiithes sareng hépatosit. Kasepitat anu dewasa nahan poténsiat sél sél sareng kamampuan proliferative dina lingkungan umum. Dibandingkeun sareng PSC - asalna organoid, Intriouss diturunkeun tina ieu langkung dewasa, kalayan gipen langkung stabil sareng sasarana - kasohor. Tapi, lila - sistimasi kapasitas prolifahation sareng organoid héptida dewasa urang terbatas dibandingkeun sareng hépatosit sareng hépatosit manusa fétal atanapi hépatosit minimal. Organooooo solioid dewasao dewasa dewasa tetep nangtang.

Cétode budaya (Gambar 6): Weging ati dicerna dina sél tunggal, sareng campuran matrigel sareng sélna dibersih dina 24 ngawangun - struktur ngawangun - struktur ngawangun - struktur ngawangun - struktur ngawangun - struktur ngawangun - struktur anu ngawangun. Insubate dina incubator budaya sél (37 ° C) salila 15 menit. Sanggeus ieu, tambahkeun médiasi budaya khusus. Petikan saatos sakitar 14 dinten. Ganti sedeng aslina sareng sedeng gratis saatos 7 - 10 dinten.

Aplikasi:

1. 1). Modél Hepatis
2. 2). Dina nasabah vith ampolisme
3. 3). Non - panyakit ati lemak
4. 4). Pangwangunan ubar pikeun kasakit ati atanapi panyakit ati

Gambar 6. Prakak sareng prosés jalur jaringan - Organo Superoid

Sumber: Sél & Brosse (2023) 13: 197

Bandingkeun budaya budaya sareng budaya organroid

4. Hépatocyte Hepatocyte - Modél budaya

1. 1. 2d primér hépatocyte co - Modél budaya
      

      Dina 2D utami Hobiocyte CO - Model Bud, dua atanapi langkung jinis sél anu béda dicampur sareng beromabileun dina dua diménsi. Lambangan Peta resmi Ieu interaksi langsung diantara jinis sél antawisna, interaksi antara Mérr (Entrogo anu Organikasi. Fungsi hépatosit m primentocyte, sapertos produksizina sareng kamampuan métabolisme ubar, tiasa dijaga dugi ka tilu minggu.

      Aplikasi:

      1. 1). Hépatocytes primér ko - Budaya sareng FIBROBLAclast: Model ieu dianggo pikeun diajar laju clearance anu laun - sanyawa monabolizing sareng metabolit na.
      2. 2). Hépatatocytes primén Co - budaya ku henteu - sél ati parlincymal (e.g., sél endussoa sinus, sareng faktor ieu (faktor ieu kedah ngadamel peran institasi saatos kecepatan narkoba édisi.
      3. 3). Hépatatocytes primér ko - tani nganggo sél: Model Ieu dianggo pikeun ngadeteksi métabolisme narkoba khusus. Responing t sél khusus.
      4. 4). Hepatomax IphaseSistem - Sistem budaya: Iphase parantos ngembangkeun co - Sistem Kudu sareng Hepatosocyes primér tina spésiés anu béda tina Hepatonax™. Ku co - sumpah opejivoya musium manusa sareng sél stromal, mungkin ngajaga ubar anu saé - kagiatan énzim énzim dina hépatosit manusa dugi ka 3 minggu. Sistem ieu cocog pikeun diajar laun - Cerabolizing Tredance Searound sareng metabolit na.

      Ieu Co - Perusahaan budaya nyayogikeun plofal anu langkung hubungan fisiologis pikeun naksir métabolisme narkoba, lampikatarna érékeun fungsi ati.
      
      

      3d Hépatocyte Hepatocyte CO - Modél budaya

      Langsung 3d co - budaya: Model ieu ngalibatkeun nyampur dua atanapi langkung tipeu sél ati (E.g., sél endathelal hurung, sél stellating sél krimik). Langsung 3D Co - Barani ngamungkinkeun interaksi nutup antara sél ati anu béda dina potitas sareng sél - sareng advain sél, sareng adaptasi matriksik.

      Aplikasi:

      1. 1). Model fibrosisy ati: dipaké pikeun ngulik mékanisme sareng kamajuan fibrosis ati.
      2. 2). Ubar - Leungit Luka Dada (Asli) Modél: Ngabantosan Sudrate sareng ngumbar karusakan ati anu disababkeun ku ubar.
      3. 3). Interaksi ubar, métabolisme narkoba, sareng Indukik énah: Ngaksat kumaha beda-beda jalan berakna, kumaha aranjeunna metololuciisasi, kumaha aranjeunna metaboléh énzim.

      Teu langsung 3D Co - budaya: Pinoda ieu nganggo sistem pamisahan fisik (E.g., Transwell atanapi bahan sanés) pikeun kabudayaan dua atanapi langkung opimia (sapertos form) ka - kontak ka ENTFIFIF. Komunikasi antara sél lumangsung liwat séndokin larut.

      Aplikasi:
      Dianggo pikeun diajar NO - komunikasi kontak antara sél ati dina awak.

      
      Kasimpulan, Iphate, janten pangamimpen dina panalungtikan biologis vitnr. Nyayogikeun solusi komprehensiftr ngarék pisan pikeun henteu - kampi ubar klinis. Tina isalan sareng budaya hépatosit primér ti sababaraha spésiés pikeun para pangwangunan produk dukung sapertos aplikasi panawaran anu saé atanapi procerasi. Kami pasangan anu dipercaya pikeun klien di industri fakmasi, komitmen pikeun ngayakeun motong - solusi tepi pikeun panalungtikan anu sanés - Panaliti.