Splenocytes katika utafiti wa kinga: kwa spishi na kutengwa, kufungia, hatua za kuchukiza

Maneno muhimu:Splenocytes (SPLs); Cynomolgus tumbili splenocytes; Rhesus tumbili splenocytes; Splenocytes ya mbwa; Splenocytes ya canine; Panya splenocytes; Splenocytes ya panya; Panya splenocytes; Splenocytes ya sungura; Kutengwa kwa splenocyte; Kufungia splenocytes; Kupunguza splenocytes

Bidhaa ya iphase

Splenocytes (SPLs)ni idadi kubwa ya seli za kinga zilizotengwa na wengu, chombo muhimu kinachohusika katika kuchuja damu, majibu ya kinga, na kudumisha homeostasis. Seli hizi ni pamoja na lymphocyte (seli za T, seli za B), macrophages, seli za dendritic, na seli za muuaji wa asili (NK), ambazo zote zina jukumu muhimu katika kinga ya ndani na ya ndani. Splenocytes hutumiwa sana katika utafiti wa mapema na wa kutafsiri kusoma kazi ya kinga, maendeleo ya chanjo, magonjwa ya autoimmune, na immunotherapy ya saratani.

Jukumu na muundo wa splenocytes (SPLs)

Ndani ya wengu, splenocytes hukaa katika maeneo tofauti: massa nyekundu, ambayo huchuja damu na kuchakata seli za damu nyekundu za zamani, na kunde nyeupe, ambapo majibu ya kinga huanzishwa. Pulp nyeupe imeandaliwa katika maeneo ya seli ya T na visukuku vya seli ya B, kuwezesha mwingiliano kati ya antigen - kuwasilisha seli na lymphocyte. Usanifu huu wa kipekee hufanya splenocytes (SPLS) chombo chenye nguvu katika uainishaji wa kinga kama vile Elispot, mtiririko wa mzunguko, na athari za mchanganyiko wa lymphocyte.

Spishi - splenocytes maalum (SPLs)

-Cynomolgus tumbili splenocytes:Cynomolgus tumbili splenocyte hutumiwa katika utafiti wa mapema kwa sababu huiga majibu ya kinga ya binadamu kwa karibu, na kufanya cynomolgus tumbili splenocyte kuwa bora kwa masomo ya tafsiri.

-Rhesus tumbili splenocytes:Rhesus tumbili splenocytes inathaminiwa vivyo hivyo kwa kufanana kwao kwa karibu kwa wanadamu. Utafiti unaotumia splenocytes ya tumbili ya Rhesus husaidia kuziba pengo kati ya mifano ya wanyama na matumizi ya kliniki.

-Mbwa splenocytes / canine splenocytes:Katika utafiti wa mifugo, splenocytes ya mbwa (au splenocytes ya canine) hutumiwa kusoma shida za kinga katika canines na kuteka kulinganisha na majibu ya kinga ya binadamu.

-Splenocytes ya sungura: Splenocytes ya sungura ni muhimu katika masomo juu ya uzalishaji wa antibody na maendeleo ya chanjo. Splenocytes ya sungura husaidia kufunua maelezo ambayo yanaweza kutofautiana na splenocytes ya panya au splenocytes ya panya.

-Panya splenocytes / panya splenocytes:Splenocytes ya panya ni moja wapo ya splenocytes iliyosomwa mara kwa mara (SPLs) katika chanjo. Itifaki za splenocytes za kutengwa kutoka kwa panya zimeanzishwa vizuri, na splenocytes zote mbili za panya na splenocytes za panya hutumiwa kwa mtiririko wa cytometry, Elispot, na ubadilishaji mwingine wa kazi.

-Panya splenocytes:Splenocytes ya panya hutoa mfano wa ziada wa masomo ya immunotoxicology na chanjo. Splenocytes za panya mara nyingi hulinganishwa na splenocytes za panya kuelewa tofauti za ndani.

Kutengwa kwa splenocytes

Kutengwa kwa splenocytesni mchakato wa kutoa seli za kinga kutoka kwa wengu kutumiwa katika matumizi anuwai ya utafiti, kama vile mtiririko wa mzunguko, athari za uzalishaji wa cytokine, au athari za mchanganyiko wa lymphocyte.

Wengu iliondolewa chini ya hali ya aseptic, ardhi katika suluhisho la kutengwa na kuhamishiwa kwa bomba lenye kuzaa lililo na RPMI 1640 kati. Safu ya leukocyte ilikusanywa kwa uangalifu baada ya centrifugation. Seli zilioshwa na RPMI 1640 kati, centrifuged na supernatant kutupwa. Hatua hii ya kuosha ilirudiwa mara 1 - mara 2 kabla ya seli zilizotengwa kwa majaribio zaidi.

Kufungia splenocytes

Kufungia splenocytesni hatua muhimu ya kuhifadhi seli kwa matumizi ya baadaye. Cryopreservation inaruhusu watafiti kuhifadhi splenocytes kwa muda mrefu bila kuathiri uwezekano wao au utendaji.

Supernatant ya kusimamishwa kwa seli iliyowekwa vizuri kutoka kwa hatua ya kutengwa imekataliwa na mkusanyiko wa seli uliongezwa katikati ya kufungia. Ongeza kiunga kwa kila bomba la kufungia na uhamishe kwenye chombo cha kufungia, kuhakikisha kuwa seli zinabaki katika kusimamishwa. Haraka kufungia vyombo vya kufungia katika freezer ya - 80 ° C. Uhamisho kwa - 150 ° C Freezer chombo (au tank ya nitrojeni kioevu) kwa muda mrefu - uhifadhi wa muda.

Kupunguza splenocytes

Kupunguza splenocytesLazima ifanyike kwa uangalifu ili kuhakikisha uwezekano mkubwa wa seli na utendaji baada ya kutuliza. Mchakato wa kuzidisha kawaida ni haraka kupunguza athari za uharibifu wa DMSO na malezi ya glasi ya barafu.

Cryotubes huhamishiwa kwa umwagaji wa maji wa 37 ° C na kupunguzwa hadi tu fuwele nzuri za barafu zilibaki kwenye zilizopo. Ongeza 0.5 - 1ml ya utamaduni wa seli ya kati kwa bomba la waliohifadhiwa, resuspend na uhamishe kusimamishwa kwa bomba la 15ml lililojazwa na utamaduni wa seli ya kati. Centrifuge, ondoa supernatant na gonga bomba ili kufungua mpangilio wa seli. Ongeza 1ml ya utamaduni wa seli ya kati, pigo na urekebishe tena na bomba, ongeza kati kwa kiasi cha 15 ml. Centrifuge, de - supernatize, ongeza 1ml ya utamaduni wa seli, na kuongeza kati kulingana na mkusanyiko wa seli inayotarajiwa. Weka seli kwenye incubator ya CO2 na incubate kwa 1h na pengo kidogo kwenye kifuniko. Mwisho wa incubation, resuspend na kuondoka kwa 1min ili kuruhusu uchafu wa seli iliyojumuishwa. Kusimamishwa kwa seli bila mvua kulihamishiwa kwa uangalifu kwenye bomba mpya la 15ml. Seli zilihesabiwa kuamua shughuli za seli.

Hitimisho

Splenocytes, pamoja na muundo wao tofauti na jukumu muhimu katika majibu ya kinga, ni zana muhimu katika utafiti wa kinga. Ikiwa inatokana na panya, primates, au spishi zingine kama sungura na mbwa, splenocytes kuwezesha masomo muhimu katika kazi ya kinga, mifumo ya magonjwa, ukuaji wa chanjo, na kinga ya saratani. Michakato ya kutengwa, kufungia, na kuchafua ni muhimu kwa kuhifadhi uadilifu wao na uwezekano, kuwezesha watafiti kuchunguza mienendo ya rununu kwa mifano mbali mbali. Kadiri uelewa wetu wa chanjo unavyozidi, utumiaji wa splenocytes utaendelea kuwa muhimu katika kufunga pengo kati ya masomo ya mapema na matumizi ya kliniki, kuhakikisha maendeleo katika dawa za wanadamu na mifugo.