தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9 பின்னம்: விட்ரோ ஜெனோடாக்சிசிட்டி மற்றும் பிறழ்வு சோதனைகளுக்கான வளர்சிதை மாற்ற செயல்படுத்தும் அமைப்பு

முக்கிய வார்த்தைகள்: OECD 471, OECD 473, OECD 476, OECD 487, பிறழ்வு சோதனை, ஜெனோடாக்சிசிட்டி, மரபணு நச்சுத்தன்மை, தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் S9, AMES சோதனை, மினி AMES சோதனை, குரோமோசோமால் மாறுபாடு, மைக்ரோநியூக்ளியஸ், HPRT/HGPRT ASSAY, TK ASSAY

IPhase தயாரிப்பு

அறிமுகம்

தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் S9மதிப்பிடுவதில் ஒரு முக்கிய அங்கமாகும்மரபணு நச்சுத்தன்மைரசாயனங்களின் சாத்தியம், குறிப்பாக ஒழுங்குமுறை நச்சுயியலில். இது பொதுவாக விட்ரோ மதிப்பீடுகளுடன் இணைந்து பயன்படுத்தப்படுகிறதுஅமெஸ் சோதனை மற்றும்பிறழ்வு சோதனைகள், சேர்மங்களின் பிறழ்வு பண்புகளை மதிப்பீடு செய்ய. சைட்டோக்ரோம் பி 450 (சிஐபி 450) நிறைந்த என்சைமடிக் அமைப்பை வழங்குவதன் மூலம், தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9 பின்னம் கல்லீரலில் நிகழும் வளர்சிதை மாற்ற செயல்முறைகளை உருவகப்படுத்துவதில் முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது, ரசாயனங்கள் மரபணு மாற்றங்கள் அல்லது புற்றுநோயை ஏற்படுத்துமா என்பதை தீர்மானிக்க உதவுகிறது.

தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் S9

கல்லீரல் S9 பின்னம் ஒரு இடுகையைக் குறிக்கிறது - தொடர்ச்சியான மையவிலக்கு படிகளுக்குப் பிறகு எலி கல்லீரல் ஒத்திசைவுகளிலிருந்து பெறப்பட்ட மைட்டோகாண்ட்ரியல் சூப்பர்நேட்டண்ட். "தூண்டப்பட்ட" என்ற சொல் கல்லீரல் நொதிகளின் செயல்பாட்டை மேம்படுத்தும் குறிப்பிட்ட சேர்மங்களுடன் எலிகளின் சிகிச்சையை குறிக்கிறது, குறிப்பாக சைட்டோக்ரோம் பி 450 என்சைம்கள் (CYP450), அவை பரந்த அளவிலான ஜெனோபயாடிக் வளர்சிதை மாற்றத்திற்கு காரணமாகின்றன.

தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9 பின்னம் பலவிதமான நொதிகளைக் கொண்டுள்ளது, அவை கட்டம் I மற்றும் இரண்டாம் கட்ட வளர்சிதை மாற்றங்களில் ஈடுபட்டுள்ளன. சைட்டோக்ரோம் பி 450 மோனோஆக்ஸிஜனேஸ்கள் போன்ற நொதிகளும் இதில் அடங்கும், இது அடி மூலக்கூறுகளின் ஆக்ஸிஜனேற்ற உயிர் உருமாற்றத்தை எளிதாக்குகிறது, இதனால் மனித கல்லீரல் வளர்சிதை மாற்றத்தை பிரதிபலிக்கிறது.

CYP450 செயல்பாடு மற்றும் வளர்சிதை மாற்ற செயல்படுத்தல்

சைட்டோக்ரோம் பி 450 என்சைம் குடும்பம் (CYP450) பல மருந்துகள், சுற்றுச்சூழல் இரசாயனங்கள் மற்றும் புற்றுநோய்கள் உள்ளிட்ட பல்வேறு வகையான பொருட்களின் வளர்சிதை மாற்றத்தில் முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது. தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9 பின்னம் இந்த நொதிகளைக் கொண்டுள்ளது மற்றும் வளர்சிதை மாற்ற செயல்பாட்டிற்குப் பிறகு மட்டுமே மரபணு மாறக்கூடிய ரசாயனங்களை மதிப்பிடுவதற்கு இது அவசியம்.

பல சேர்மங்கள் ஆரம்பத்தில் - நச்சுத்தன்மையற்றவை, ஆனால் கல்லீரலில் வளர்சிதை மாற்றத்திற்குப் பிறகு நச்சுத்தன்மையாக மாறும். இந்த சார்பு - பிறழுக்கள் (இது வளர்சிதை மாற்ற செயல்படுத்தல் பிறழ்வு ஆக வேண்டும்) மற்றும் சார்பு - புற்றுநோய்கள் (புற்றுநோயை ஏற்படுத்தும் செயல்படுத்தல் தேவைப்படுகிறது) ஒரு எஸ் 9 வளர்சிதை மாற்ற செயல்படுத்தும் முறையை உள்ளடக்கிய மதிப்பீடுகள் மூலம் மட்டுமே கண்டறிய முடியும். CYP450 போன்ற வளர்சிதை மாற்ற நொதிகளின் தூண்டல் இல்லாமல், இந்த பொருட்கள் நிலையான ஜெனோடாக்சிசிட்டி சோதனைகளில் பாதிப்பில்லாததாகத் தோன்றலாம்.

தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் S9 ஐ விட்ரோ மதிப்பீடுகளில் சேர்ப்பதன் மூலம், ஒரு பொருள் CYP450 என்சைம்களுடன் எவ்வாறு தொடர்பு கொள்கிறது என்பதை ஆராய்ச்சியாளர்கள் மதிப்பிடலாம். இது மருந்துகளுக்கு மிகவும் முக்கியமானது, ஏனெனில் CYP450 என்சைம்களின் வளர்சிதை மாற்றம் பல மருந்துகளின் மருந்தியல் இயக்கவியலில் ஒரு முக்கியமான படியாகும்.

தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் S9 இன் பயன்பாடுகள்

1. 1. AMES சோதனை (OECD 471)

AMES சோதனை, வழிகாட்டுதலில் கோடிட்டுக் காட்டப்பட்டுள்ளதுOECD 471. இது சால்மோனெல்லா பாக்டீரியாவின் விகாரங்களை ஒரு சோதனை வேதியலில் அம்பலப்படுத்துவதை உள்ளடக்கியது, இது பாக்டீரியாவை ஒரு ஹிஸ்டைடின் - சுயாதீன நிலைக்கு மாற்றுவதற்கு ஏற்படும் பிறழ்வுகளைத் தூண்டுகிறது.

மனித வளர்சிதை மாற்ற செயல்முறையை உருவகப்படுத்த, தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் S9 பெரும்பாலும் சோதனை அமைப்பில் சேர்க்கப்படுகிறது. S9 பின்னம் CYP450 உள்ளிட்ட தேவையான நொதிகளை வழங்குகிறது, இது கலவையை மிகவும் எதிர்வினை வடிவமாக வளர்சிதை மாற்ற தேவைப்படலாம், இது பாக்டீரியா டி.என்.ஏவில் பிறழ்வுகளை ஏற்படுத்தக்கூடும். AMES சோதனையுடன் S9 இன் இந்த கலவையானது நேரடி மற்றும் வளர்சிதை மாற்ற செயல்படுத்தப்பட்ட பிறழ்வு வழிமுறைகளைப் பிரதிபலிப்பதன் மூலம் பிறழ்வு திறனை விரிவாக மதிப்பிட அனுமதிக்கிறது.

2. 2.பிறழ்வு சோதனைகள் (குரோமோசோமால் மாறுபாடு சோதனை, மைக்ரோநியூக்ளியஸ் சோதனை மற்றும் பிற விட்ரோ மதிப்பீடுகள்)

AMES சோதனைக்கு கூடுதலாக, இரசாயனங்களின் மரபணு திறனை மதிப்பிடுவதற்கு பிறழ்வு சோதனைகள் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. குரோமோசோமால் பிறழ்வுகள், மரபணு மாற்றங்கள் மற்றும் மைக்ரோநியூக்ளியின் உருவாக்கம் உள்ளிட்ட பலவிதமான மரபணு சேதங்களை மதிப்பிடுவதில் இந்த சோதனைகள் மிகவும் விரிவானவை. தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் S9 பின்வரும் காரணங்களுக்காக பிறழ்வு சோதனைகளில் பயன்படுத்தப்படுகிறது:

நுண்ணிய சோதனை (OECD 487)

இந்த சோதனை உயிரணுக்களில் உள்ள மைக்ரோநியூக்ளியின் உருவாவதைக் கண்டறிந்துள்ளது, அவை சிறிய, எக்ஸ்ட்ரானியூக்ளியர் உடல்கள் குரோமோசோம்களின் துண்டுகள் அல்லது முழு குரோமோசோம்களைக் கொண்டுள்ளன, அவை உயிரணுப் பிரிவின் போது கருவில் இணைக்கப்படவில்லை. தி மைக்ரோநியூக்ளியஸ் சோதனைகிளாஸ்டோஜெனிக் (குரோமோசோம் - உடைத்தல்) மற்றும் அனுஜெனிக் (குரோமோசோம் எண்ணை பாதிக்கும்) விளைவுகளைக் கண்டறிய முடியும். தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9, சோதனைப் பொருளை வளர்சிதை மாற்றத்தில் செயல்படுத்த இங்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஏனெனில் சில வேதியியல் கல்லீரல் நொதிகளால் வளர்சிதை மாற்றப்பட்டவுடன் குரோமோசோமால் சேதத்தை ஏற்படுத்துகிறது. விவோவில் ஏற்படக்கூடிய வளர்சிதை மாற்ற செயல்பாட்டை உருவகப்படுத்துவதன் மூலம் S9 பின்னம் சோதனையின் உணர்திறனை மேம்படுத்துகிறது.

குரோமோசோமால் மாறுபாடு சோதனை (OECD 473)

இடைவெளிகள், நீக்குதல்கள், இடமாற்றங்கள் அல்லது பிற வகை மாறுபாடுகளைத் தூண்டுவதன் மூலம் ஒரு பொருள் குரோமோசோம்களுக்கு கட்டமைப்பு சேதத்தை ஏற்படுத்துமா என்பதை இந்த சோதனை மதிப்பீடு செய்கிறது. மைக்ரோநியூக்ளியஸ் சோதனை போல, திகுரோமோசோமால் மாறுபாடு சோதனைவளர்சிதை மாற்ற செயல்படுத்தலுடன் அல்லது இல்லாமல் பயன்படுத்தலாம். கல்லீரலில் உள்ள வளர்சிதை மாற்ற செயல்முறைகளைப் பிரதிபலிக்கும் வகையில் தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9 சோதனை அமைப்பில் சேர்க்கப்படுகிறது, இது குரோமோசோமால் சேதத்தை அவற்றின் அசல் வடிவத்தில் ஏற்படுத்தாத ஆனால் கல்லீரல் வளர்சிதை மாற்றத்திற்குப் பிறகு அவ்வாறு செய்யக்கூடிய பொருட்களின் மதிப்பீட்டை அனுமதிக்கிறது.

அட்டவணை 1. பிறழ்வு சோதனைகளின் ஒப்பீட்டு பரிசீலனைகள்

HPRT/HGPRT மதிப்பீடு (OECD 476)

இல்HPRT/HGPRT மதிப்பீடு. ஒரு சுருக்கமான சிகிச்சை மற்றும் ஏழு நாள் வெளிப்பாடு காலத்திற்குப் பிறகு, செல்கள் 6 - தியோகுவானுடன் சவால் செய்யப்படுகின்றன; ஹைபோக்சான்டைன் - குவானைன் பாஸ்போரிபோசைல்ட்ரான்ஸ்ஃபெரேஸ் மரபணுவில் செயல்பாட்டு பிறழ்வுகளைத் தாங்கும் குளோன்கள் மட்டுமே உயிர்வாழும். விகாரமான காலனி எண்ணிக்கையை ஒட்டுமொத்த நம்பகத்தன்மையுடன் ஒப்பிடுவதன் மூலம், ஆராய்ச்சியாளர்கள் ஒரு பிறழ்வு அதிர்வெண்ணை தீர்மானிக்கிறார்கள், இது ஒரே நேரத்தில் மற்றும் வரலாற்றுக் கட்டுப்பாடுகளில் இனப்பெருக்கம் செய்தால், ஜெனோடாக்ஸிக் திறனைக் குறிக்கிறது.

டி.கே மதிப்பீடுகள் (ஓ.இ.சி.டி 490 & OECD 476)

திடி.கே மதிப்பீடு L5178Y மவுஸ் லிம்போமா செல்கள் (OECD 490) அல்லது CHO செல்கள் (பயன்படுத்துகின்றனOECD 476) தைமிடின் கைனேஸ் லோகஸில் வடிவமைக்கப்பட்ட ஹீட்டோரோசைகஸ். வேதியியல் வெளிப்பாடு ± S9 கலவையைத் தொடர்ந்து, செல்கள் குணமடைந்து, ட்ரைஃப்ளூரோதைமிடின் கொண்ட நடுத்தரத்தில் பூசப்படுகின்றன, இது TK - போதுமான உயிரணுக்களைக் கொல்லும். எஞ்சியிருக்கும் டி.கே. HPRT/HGPRT மதிப்பீட்டைப் போலவே, கடுமையான சைட்டோடாக்ஸிசிட்டி கட்டுப்பாடுகள் மற்றும் நேர்மறை பிறழ்வு வரையறைகள் பிறழ்வு அதிர்வெண்ணில் கவனிக்கப்பட்ட அதிகரிப்பு ஒரு கலவையின் மரபணு ஆபத்தை நம்பத்தகுந்ததாக பிரதிபலிப்பதை உறுதி செய்கிறது.

4. 4. புற்றுநோய் ஆபத்து மதிப்பீடு

தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9 புற்றுநோயை மதிப்பிடுவதை நோக்கமாகக் கொண்ட ஆய்வுகளிலும் பயன்படுத்தப்படுகிறது - பொருட்களின் திறனை ஏற்படுத்துகிறது. மனித கல்லீரலில் ஏற்படும் வளர்சிதை மாற்ற செயல்முறைகளை உருவகப்படுத்துவதன் மூலம், எஸ் 9 பின்னம் டி.என்.ஏ உடன் பிணைக்கக்கூடிய மற்றும் புற்றுநோய்க்கு வழிவகுக்கும் பிறழ்வுகளை ஏற்படுத்தும் திறன் கொண்ட எதிர்வினை வளர்சிதை மாற்றங்களை உருவாக்க வழிவகுக்கும் சேர்மங்களை அடையாளம் காண உதவும்.

தூண்டப்பட்ட வெள்ளெலி கல்லீரல் S9 உடன் மேம்படுத்தப்பட்ட AMES சோதனை

ஐரோப்பிய மருத்துவ ஏஜென்சி (ஈ.எம்.ஏ) வழங்கிய சமீபத்திய வழிகாட்டுதல்களின்படி, சில n - நைட்ரோசமைன் அசுத்தங்களின் பிறழ்வு திறனைக் கண்டறியும் அளவுக்கு பாரம்பரிய AMES சோதனை உணர்திறன் இருக்காது, குறிப்பாக n - நைட்ரோசோடிமெதிலமைன் (NDMA). ஆகையால், யு.எஸ். உணவு மற்றும் மருந்து நிர்வாகத்தின் (எஃப்.டி.ஏ) ஒரு பிரிவான தேசிய நச்சுயியல் ஆராய்ச்சி மையம் (என்.சி.டி.ஆர்) உருவாக்கிய மேம்பட்ட ஏஎம்இஎஸ் சோதனை மிகவும் நம்பகமான மாற்றாக பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. மேம்படுத்தப்பட்ட AMES சோதனை தூண்டப்பட்ட வெள்ளெலி கல்லீரல் S9 ஐ சேர்ப்பதை அறிமுகப்படுத்தியது, இது 30% எலி கல்லீரல் S9 மற்றும் 30% வெள்ளெலி கல்லீரல் S9 ஆகியவற்றைக் கொண்டது. சைட்டோக்ரோம் பி 450 என்சைம் - தூண்டும் பொருட்களுடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட கொறிக்கும் கல்லீரல்களிலிருந்து எலி மற்றும் ஹாம்ஸ்டர் டெஸ்மோசோமால் சூப்பர்நேட்டண்ட்ஸ் (எஸ் 9 எஸ்) தயாரிக்கப்பட வேண்டும். தூண்டப்பட்ட வெள்ளெலி கல்லீரல் S9 ஐப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், இந்த மேம்பட்ட சோதனை மனித வளர்சிதை மாற்றத்தை சிறப்பாக உருவகப்படுத்துகிறது மற்றும் முடிவுகளின் நம்பகத்தன்மையை அதிகரிக்கிறது.

முடிவு

தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9 ஜெனோடாக்சிசிட்டி சோதனையில் ஒரு முக்கியமான கருவியாக செயல்படுகிறது, ஆராய்ச்சியாளர்கள் மற்றும் ஒழுங்குமுறை நிறுவனங்களுக்கு ரசாயனங்களின் பிறழ்வு மற்றும் புற்றுநோயியல் திறனை மதிப்பிட உதவுகிறது. ஒரு வளர்சிதை மாற்ற செயல்படுத்தும் முறையை வழங்குவதன் மூலம், இது ஜெனோடாக்ஸிக் ஆக வளர்சிதை மாற்ற செயல்படுத்தல் தேவைப்படும் பொருட்களைக் கண்டறிய AMES சோதனை, பிறழ்வு சோதனைகள் மற்றும் CYP450 செயல்பாட்டு ஆய்வுகள் போன்ற மதிப்பீடுகளின் திறனை மேம்படுத்துகிறது. புதிய மருந்துகள், ரசாயனங்கள் மற்றும் நுகர்வோர் தயாரிப்புகளின் பாதுகாப்பை உறுதிப்படுத்த அதன் பயன்பாடுகள் அவசியம். மனித கல்லீரல் வளர்சிதை மாற்றத்தை உருவகப்படுத்துவதில் அதன் பங்கைக் கொண்டு, தூண்டப்பட்ட எலி கல்லீரல் எஸ் 9 பின்னம் நவீன நச்சுயியல் மற்றும் ஒழுங்குமுறை பாதுகாப்பு மதிப்பீடுகளின் இன்றியமையாத பகுதியாகத் தொடர்கிறது.