நோயெதிர்ப்பு ஆராய்ச்சியில் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்: இனங்கள் மற்றும் தனிமைப்படுத்தல், உறைபனி, கரைக்கும் படிகள் முழுவதும்

முக்கிய வார்த்தைகள்:ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் (SPLS); சினோமோல்கஸ் குரங்கு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; ரீசஸ் குரங்கு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; நாய் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; கோரை ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; எலி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; மவுஸ் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; எலிகள் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; முயல் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் தனிமைப்படுத்தல்; உறைபனி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்; தாவிங் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்

IPhase தயாரிப்பு

ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் (எஸ்.பி.எல்)இரத்தத்தை வடிகட்டுதல், நோயெதிர்ப்பு மறுமொழிகளை ஏற்றுதல் மற்றும் ஹோமியோஸ்டாசிஸை பராமரிப்பதில் ஈடுபட்டுள்ள ஒரு முக்கிய உறுப்பு, மண்ணீரலில் இருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட நோயெதிர்ப்பு உயிரணுக்களின் பன்முக மக்கள் தொகை. இந்த உயிரணுக்களில் லிம்போசைட்டுகள் (டி செல்கள், பி செல்கள்), மேக்ரோபேஜ்கள், டென்ட்ரிடிக் செல்கள் மற்றும் இயற்கை கொலையாளி (என்.கே) செல்கள் ஆகியவை அடங்கும், இவை அனைத்தும் தகவமைப்பு மற்றும் உள்ளார்ந்த நோய் எதிர்ப்பு சக்தியில் முக்கிய பங்கு வகிக்கின்றன. நோயெதிர்ப்பு செயல்பாடு, தடுப்பூசி வளர்ச்சி, தன்னுடல் தாக்க நோய்கள் மற்றும் புற்றுநோய் நோயெதிர்ப்பு சிகிச்சை ஆகியவற்றைப் படிக்க முன்கூட்டிய மற்றும் மொழிபெயர்ப்பு ஆராய்ச்சியில் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.

ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளின் பங்கு மற்றும் கலவை (SPLS)

மண்ணீரலுக்குள், ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் தனித்துவமான பகுதிகளில் வாழ்கின்றன: சிவப்பு கூழ், இது இரத்தத்தை வடிகட்டுகிறது மற்றும் பழைய சிவப்பு இரத்த அணுக்களை மறுசுழற்சி செய்கிறது, மற்றும் வெள்ளை கூழ், நோயெதிர்ப்பு மறுமொழிகள் தொடங்கப்படுகின்றன. வெள்ளை கூழ் டி செல் மண்டலங்கள் மற்றும் பி செல் நுண்ணறைகளாக ஒழுங்கமைக்கப்பட்டுள்ளது, இது ஆன்டிஜென் - வழங்கும் செல்கள் மற்றும் லிம்போசைட்டுகளுக்கு இடையிலான தொடர்புகளை எளிதாக்குகிறது. இந்த தனித்துவமான கட்டமைப்பு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் (எஸ்.பி.எல்.எஸ்) எலிஸ்பாட், ஓட்டம் சைட்டோமெட்ரி மற்றும் கலப்பு லிம்போசைட் எதிர்வினைகள் போன்ற நோயெதிர்ப்பு மதிப்பீடுகளில் ஒரு சக்திவாய்ந்த கருவியாக அமைகிறது.

இனங்கள் - குறிப்பிட்ட ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் (SPLS)

-சினோமோல்கஸ் குரங்கு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்:சினோமோல்கஸ் குரங்கு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் முன்கூட்டிய ஆராய்ச்சியில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, ஏனெனில் அவை மனித நோயெதிர்ப்பு மறுமொழிகளை மிகவும் நெருக்கமாகப் பிரதிபலிக்கின்றன, இதனால் சினோமோல்கஸ் குரங்கு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளை மொழிபெயர்ப்பு ஆய்வுகளுக்கு ஏற்றதாக ஆக்குகிறது.

-ரீசஸ் குரங்கு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்:ரீசஸ் குரங்கு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் மனிதர்களுடனான நெருக்கமான நோயெதிர்ப்பு ஒற்றுமைகளுக்கு இதேபோல் மதிப்பிடப்படுகின்றன. ரீசஸ் குரங்கு ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளைப் பயன்படுத்தும் ஆய்வுகள் விலங்கு மாதிரிகள் மற்றும் மருத்துவ பயன்பாடுகளுக்கு இடையிலான இடைவெளியைக் குறைக்க உதவுகின்றன.

-நாய் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் / கோரை ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்:கால்நடை ஆராய்ச்சியில், கோரைஸில் நோயெதிர்ப்பு கோளாறுகளைப் படிக்கவும், மனித நோயெதிர்ப்பு மறுமொழிகளுடன் ஒப்பீடுகளை வரையவும் நாய் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் (அல்லது கோரை ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்) பயன்படுத்தப்படுகின்றன.

-முயல் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்: ஆன்டிபாடி உற்பத்தி மற்றும் தடுப்பூசி வளர்ச்சி குறித்த ஆய்வுகளில் முயல் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் முக்கியமானவை. சுட்டி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் அல்லது எலி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளிலிருந்து வேறுபடக்கூடிய விவரங்களை வெளிப்படுத்த முயல் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் உதவுகின்றன.

-மவுஸ் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் / எலிகள் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்:மவுஸ் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் நோயெதிர்ப்புத் துறையில் அடிக்கடி ஆய்வு செய்யப்பட்ட ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளில் (எஸ்.பி.எல்) ஒன்றாகும். எலிகளிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளுக்கான நெறிமுறைகள் நன்கு நிறுவப்பட்டுள்ளன, மேலும் ஓட்டம் சைட்டோமெட்ரி, எலிஸ்பாட் மற்றும் பிற செயல்பாட்டு மதிப்பீடுகளுக்கு சுட்டி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் மற்றும் எலிகள் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் இரண்டும் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.

-எலி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்:எலி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் இம்யூனோடாக்ஸிகாலஜி மற்றும் தடுப்பூசி ஆய்வுகளுக்கு ஒரு நிரப்பு மாதிரியை வழங்குகின்றன. எலி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் பெரும்பாலும் மவுஸ் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளுடன் ஒப்பிடப்படுகின்றன.

ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் தனிமைப்படுத்தல்

ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் தனிமைப்படுத்தல்ஓட்டம் சைட்டோமெட்ரி, சைட்டோகைன் உற்பத்தி மதிப்பீடுகள் அல்லது கலப்பு லிம்போசைட் எதிர்வினைகள் போன்ற பல்வேறு ஆராய்ச்சி பயன்பாடுகளில் பயன்படுத்தப்பட வேண்டிய மண்ணீரலில் இருந்து நோயெதிர்ப்பு உயிரணுக்களை பிரித்தெடுக்கும் செயல்முறையாகும்.

மண்ணீரல் அசெப்டிக் நிலைமைகளின் கீழ் அகற்றப்பட்டு, தனிமைப்படுத்தும் கரைசலில் தரையில் இருந்து ஆர்.பி.எம்.ஐ 1640 மீடியம் கொண்ட ஒரு மலட்டு குழாய்க்கு மாற்றப்பட்டது. லுகோசைட் அடுக்கு மையவிலக்குக்குப் பிறகு கவனமாக சேகரிக்கப்பட்டது. செல்கள் ஆர்.பி.எம்.ஐ 1640 நடுத்தரத்துடன் கழுவப்பட்டு, மையவிலக்கு மற்றும் சூப்பர்நேட்டண்ட் நிராகரிக்கப்பட்டன. தனிமைப்படுத்தப்பட்ட செல்கள் மேலும் சோதனைகளுக்கு பயன்படுத்தப்படுவதற்கு முன்பு இந்த சலவை படி 1 - 2 முறை மீண்டும் செய்யப்பட்டது.

உறைபனி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்

உறைபனி ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்எதிர்கால பயன்பாட்டிற்கான கலங்களைப் பாதுகாப்பதற்கான ஒரு முக்கியமான படியாகும். கிரையோபிரசர்வேஷன் ஆராய்ச்சியாளர்களை ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளை நீண்ட காலத்திற்கு சேமிக்க அனுமதிக்கிறது.

தனிமைப்படுத்தப்பட்ட படியில் இருந்து நன்கு மையப்படுத்தப்பட்ட செல் இடைநீக்கத்தின் சூப்பர்நேட்டண்ட் நிராகரிக்கப்பட்டு, செல் செறிவு உறைபனி ஊடகத்தில் நீர்த்தப்பட்டது. ஒவ்வொரு உறைபனி குழாய்க்கும் ஒரு அலிகோட் சேர்த்து, உறைபனி கொள்கலனுக்கு மாற்றவும், செல்கள் இடைநீக்கத்தில் இருப்பதை உறுதிசெய்க. உறைபனி கொள்கலன்களை ஒரு - 80 ° C உறைவிப்பான் விரைவாக முடக்கவும். நீண்ட - கால சேமிப்பிற்கு - 150 ° C உறைவிப்பான் கொள்கலன் (அல்லது திரவ நைட்ரஜன் தொட்டி) க்கு மாற்றவும்.

தாவிங் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்

தாவிங் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள்கிரையோபிரசர்வேஷனுக்குப் பிறகு உயர் செல் நம்பகத்தன்மையையும் செயல்பாட்டையும் உறுதிப்படுத்த கவனமாக செய்யப்பட வேண்டும். டி.எம்.எஸ்.ஓ மற்றும் பனி படிக உருவாக்கத்தின் தீங்கு விளைவிக்கும் விளைவுகளை குறைக்க தாவிங் செயல்முறை பொதுவாக வேகமாக இருக்கும்.

கிரையோடூப்கள் 37 ° C நீர் குளியல் மாற்றப்பட்டு, குழாய்களில் நன்றாக இருக்கும் பனி படிகங்கள் மட்டுமே இருக்கும் வரை கரைக்கப்படுகின்றன. உறைந்த குழாயில் 0.5 - 1 மில்லி செல் கலாச்சார ஊடகத்தைச் சேர்த்து, மீண்டும் சஸ்பென்ஷனை செல் கலாச்சார ஊடகம் நிரப்பப்பட்ட 15 மில்லி குழாய்க்கு மாற்றவும். மையவிலக்கு, சூப்பர்நேட்டண்டை அகற்றி, செல் ஏற்பாட்டை தளர்த்த குழாயைத் தட்டவும். 1 மில்லி செல் கலாச்சார ஊடகம் சேர்த்து, ஒரு பைப்பேட் மூலம் ஊதி மற்றும் மீண்டும் இணைக்கவும், 15 மில்லி அளவிற்கு நடுத்தர சேர்க்கவும். மையவிலக்கு, டி - சூப்பர்நேடிஸ், 1 மில்லி செல் கலாச்சார ஊடகத்தைச் சேர்க்கவும், எதிர்பார்த்த செல் செறிவுக்கு ஏற்ப நடுத்தர சேர்க்கவும். கலங்களை ஒரு CO2 இன்குபேட்டரில் வைக்கவும், மூடியில் லேசான இடைவெளியுடன் 1H க்கு அடைகாக்கவும். அடைகாக்கும் முடிவில், திரட்டப்பட்ட செல் குப்பைகளை துரிதப்படுத்த அனுமதிக்க 1 நிமிடங்களுக்கு மீண்டும் இணைந்து விடுங்கள். மழைப்பொழிவு இல்லாமல் செல் இடைநீக்கம் புதிய 15 மில்லி குழாய்க்கு கவனமாக மாற்றப்பட்டது. செல் செயல்பாட்டை தீர்மானிக்க செல்கள் கணக்கிடப்பட்டன.

முடிவு

ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள், அவற்றின் மாறுபட்ட கலவை மற்றும் நோயெதிர்ப்பு மறுமொழிகளில் முக்கிய பங்கு ஆகியவை நோயெதிர்ப்பு ஆராய்ச்சியில் விலைமதிப்பற்ற கருவிகள். கொறித்துண்ணிகள், விலங்குகள் அல்லது முயல்கள் மற்றும் நாய்கள் போன்ற பிற உயிரினங்களிலிருந்து பெறப்பட்டதாக இருந்தாலும், ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகள் நோயெதிர்ப்பு செயல்பாடு, நோய் வழிமுறைகள், தடுப்பூசி வளர்ச்சி மற்றும் புற்றுநோய் நோயெதிர்ப்பு சிகிச்சை ஆகியவற்றில் முக்கியமான ஆய்வுகளை எளிதாக்குகின்றன. தனிமைப்படுத்தல், உறைபனி மற்றும் கரைக்கும் செயல்முறைகள் அவற்றின் ஒருமைப்பாட்டையும் நம்பகத்தன்மையையும் பாதுகாப்பதற்கு அவசியம், மேலும் பல்வேறு மாதிரிகள் முழுவதும் செல்லுலார் இயக்கவியலை ஆராய ஆராய்ச்சியாளர்களுக்கு உதவுகிறது. நோயெதிர்ப்பு பற்றிய நமது புரிதல் ஆழமடைவதால், முன்கூட்டிய ஆய்வுகள் மற்றும் மருத்துவ பயன்பாடுகளுக்கு இடையிலான இடைவெளியைக் குறைப்பதில் ஸ்ப்ளெனோசைட்டுகளின் பயன்பாடு தொடர்ந்து கருவியாக இருக்கும், மேலும் மனித மற்றும் கால்நடை மருத்துவத்தில் முன்னேற்றங்களை உறுதி செய்யும்.