CGT Innovative Therapy - Lentivirus - Packaging Car - T Immune Cells

CGT Innovative Therapy - Lentivirus - Packaging Car - T Immune Cells

Ang immune cell therapy ay isang makabagong paggamot sa kanser na nagpapabuti sa immune system ng katawan upang ma -target at maalis ang mga selula ng kanser. Ang mga pangunahing form ay may kasamang cytokine - sapilitan killer cell therapy, t - cell therapy, at CAR - T cell therapy. Ang CAR - T therapy ay nagsasangkot ng reprogramming T cells upang ipahayag ang mga chimeric antigen receptors (CAR) na partikular na target ang mga cell ng tumor, na nagpapakita ng makabuluhang tagumpay sa mga hematological cancer tulad ng leukemia at lymphoma.

Mga keyword: kotse - t, lentiviral, lentiviral vector, tracer lentivirus

Paghahanda ng kotse - t cell therapy

Sa pangkalahatan, ang mga pangunahing hakbang upang maghanda ng mga cell ng kotse - t ay ang mga sumusunod:

Figure Source: Dana - Farber Cancer Institute - Car T - Cell Clinical Trials Tumutulong sa Maramihang Mga Pasyente ng Myeloma Bumalik sa Kalusugan

1. 1.Sorting (t - cell paghihiwalay)

Ang unang hakbang sa paghahanda ng mga cell ng kotse - t ay upang ibukod ang mga t - mga cell mula sa mga puting selula ng dugo sa peripheral blood ng pasyente. Ang mga pamamaraan tulad ng immunomagnetic bead paghihiwalay o daloy ng cytometry ay karaniwang ginagamit upang kunin ang CD3+- mayaman t - mga cell mula sa dugo. Upang matiyak ang kadalisayan ng cell, ang proseso ng pag -uuri ay kailangang maging tumpak, na tinitiyak na ang isang sapat na bilang ng mataas na - kalidad ng T - mga cell ay nakuha.

2. 2.Stimulation (T - Cell activation)

Ang nakuha na t - cells ay isinaaktibo sa vitro, karaniwang gumagamit ng aCD3 /CD28 T - Mga cell activation /expansion kit. Ang mga aktibong T cells ay pumapasok sa isang aktibong estado, inihahanda ang mga ito para sa paglipat ng gene. Sa pamamagitan ng prosesong ito, ang T cell function ay pinahusay, na nag -aambag sa kasunod na pagbabago ng genetic at pagpapalakas.

3. 3.Transfection (pag -edit ng gene)

Ang mga aktibong T cells ay sumasailalim sa paglipat ng gene upang maipahayag ang isang chimeric antigen receptor (CAR). Ang prosesong ito ay karaniwang gumagamitLentiviral vectorUpang ipakilala ang mga gen ng kotse sa mga cell ng T. Ang Lentivirus ay isang epektibong tool ng transduction ng gene, na may kalamangan na stably pagsasama ng target na gene (tulad ng gene ng kotse) sa cell genome. Sa pamamagitan ng pag -impeksyon sa mga cell ng T at paglilipat ng gene ng kotse sa T cell DNA, pinapayagan ng lentivirus ang mga T cells na magpahayag ng mga kotse nang matagal - term. Kasama sa gene ng kotse ang isang solong - variable variable fragment (SCFV) ng isang antibody na nagbibigay -daan sa mga cell ng T na makilala ang mga tiyak na antigens sa ibabaw ng mga cell ng tumor at simulan ang isang tugon ng immune sa pamamagitan ng pag -activate ng mga senyas ng mga rehiyon ng mga T cells. Tulad ng ipinapakita sa Figure 2. Ang paglilipat ng lentiviral ay may mga katangian ng mataas na kahusayan at katatagan, upang ang gene ng kotse ay maipahayag sa mga T cells sa loob ng mahabang panahon.

Figure Source: Singapore Car - T cell therapy

4. 4.Amplification (paglaganap ng cell)

Pagkatapos ng paglilipat, ang mga cell ng kotse ay pumapasok sa yugto ng pagpapalakas, kung saan ang mga kadahilanan ng paglago tulad ngIL - 2ay idinagdag upang itaguyod ang paglaganap ng cell. Ang layunin ng prosesong ito ay upang matiyak na ang isang sapat na bilang ng mga cell - T cells ay magagamit para sa panghuling pagbubuhos sa pasyente. Ang proseso ng pagpapalakas ay dapat isagawa sa ilalim ng mga kundisyon ng sterile upang masiguro ang kalidad ng cell at dami.

5. 5.Quality Control (QC)
6. Bago ang muling pagsasaayos sa pasyente, ang kalidad ng kontrol ay mahalaga sa panahon ng proseso ng paghahanda. Ang mga inihanda na kotse - t cells ay sumailalim sa mahigpit na pagsubok saTiyakin ang kanilang kadalisayan, aktibidad, kahusayan sa paglilipat, at pagsunod sa mga pamantayan sa paggamot. Bilang karagdagan, ang pagsubok para sa kontaminasyon ng cell o masamang reaksyon ay kinakailangan upang matiyak ang kaligtasan at therapeutic efficacy ng mga cell pagkatapos ng muling pagsasaayos sa pasyente.

Importance ng lentivirus paglipat sa mga immune cells

Ang teknolohiya ng paglilipat ng lentiviral ay mahalaga sa immune cell therapy, lalo na para sa pag -edit ng gene at cell engineering. Ang mga vectors ng lentiviral, na nagmula sa binagong HIV - 1, ay malawakang ginagamit dahil sa kanilang kakayahang pagsamahin ang mga gene sa host genome, tinitiyak ang matatag, pangmatagalang - term expression. Maaari silang makahawa sa parehong paghati at hindi - paghahati ng mga cell, at ang kanilang kaligtasan ay napabuti sa pamamagitan ng pagbabago ng mga pangunahing gen upang maiwasan ang pagtitiklop. Ang mga vectors na ito ay karaniwang ginagamit sa therapy ng gene, pag -edit ng gene, at pananaliksik ng cell biology para sa kanilang kahusayan at tibay sa paghahatid ng gene.

Figure Source: Obiosh.com/product/ Schematic Diagram ng Lentivirus Packaging at Lentivirus Transfection Proseso sa 293T Cells

1.Pagsasagawa ng gene transduction

Ang lentiviral vector ay maaaring mahusay na maihatid ang mga target na gen, tulad ng gene ng kotse, sa mga immune cells at pagsamahin ang mga gen na ito na matatag sa cellular genome, na tinitiyak na ang gene ng kotse ay patuloy na ipinahayag sa panahon ng cell division at paglaganap. Ang mataas na kakayahan ng transduction ng kahusayan na ito ay pangunahing sa tagumpay ng immunotherapy.

2.Magsusulat na immunogenicity 

Kumpara sa iba pang mga viral vectors, ang mga lentivirus ay may mas mababang immunogenicity. Bilang isang resulta, kapag ang mga lentivirus ay ginagamit upang ma -transduce ang mga immune cells, ang immune system ng pasyente ay bumubuo ng isang medyo mahina na immune response sa virus. Makakatulong ito upang mabawasan ang masamang reaksyon, lalo na sa mahabang - term na kaligtasan ng mga cell pagkatapos ng pagbubuhos, sa gayon ay maiiwasan ang labis na pagtanggi sa immune.

3.High adaptability sa mga immune cells

Ang lentiviral vector ay may kakayahang mahusay na paglilipat ng iba't ibang uri ng mga immune cells,lalo na ang mga cell ng T at mga cell ng NK. Sa pamamagitan ng lentiviral transduction, ang mga immune cells ay maaaring makakuha ng tumor - tiyak na mga kakayahan sa pagkilala, sa gayon pinapahusay ang kanilang kapasidad upang ma -target at patayin ang mga cell ng tumor.

4.Pagsusulat ng mga transduced effector cells sa pagkilala sa target na cell 

Sa immunotherapy,transduced effector cellssumangguni sa mga immune cells na, pagkatapos ng transduction, ipahayag ang kotse at magsagawa ng anti - aktibidad ng tumor. Ang mga vectors ng lentiviral ay maaaring tumpak na maihatid ang gene ng kotse sa mga cell ng effector na ito, na nagpapahintulot sa kanila na kilalanin at i -target ang mga cell ng tumor.Target na mga cellay ang mga tumor cells na kinilala at nawasak ng mga immune cells na ito. Sa pamamagitan ng lentiviral transduction, ang mga immune cells ay maaaring mapahusay ang kanilang pagiging tiyak sa pagkilala at pagpatay sa mga cell ng tumor, sa gayon pinapabuti ang pagiging epektibo ng therapeutic.

Sa kontekstong ito, ang iPhase, isang pinuno sa mga vitro research reagents, ay nakabuo ng isang lentivirus packaging kit at lentivirus na konsentrasyon na reagent upang gawing simple ang pagiging kumplikado ng transduction para sa mga customer ng immunotherapy at pagbutihin ang rate ng tagumpay ng matatag na paglipat ng gene. Ang mga produktong ito ay nag -aalok ng isang - itigil na solusyon para sa mga customer.

Iphase lentivirusPRODUCTS

Ang iphase lentivirus packaging kitnaglalaman ng lahat ng mahahalagang reagents na kinakailangan para saLentivirus packaging, makabuluhang pinasimple ang proseso ng eksperimentong at pag -save ng oras at pagsisikap. Kasama sa kit na ito:

• Lentivirus packaging plasmid mix
• Transfect reagent
• EGFP plasmid
• Ang iPhase lentivirus concentration reagent

Ang kit na ito ay tunay na nag -stream ng eksperimento! Nang hindi na kailangan para sa kumplikadong paghahanda ng reagent, ang packaging ng lentivirus ay maaaring maayos na makumpleto sa pamamagitan lamang ng pagsunod sa mga kasama na tagubilin.Ang natatanging bentahe ng kit ay may kasamang maikling oras ng packaging, mataas na viral titer, at madaling operasyon, na ginagawang perpekto para sa mga nagsisimula sa lentivirus packaging. Ang bawat hanay ng mga reagents ay sumasailalim sa mahigpit na kontrol ng kalidad upang matiyak ang tumpak, maaasahan, at maaaring muling mabigyan ng mga resulta, makabuluhang pagpapabuti ng kahusayan ng paglilipat at ang katatagan ng mga viral vectors, sa gayon ay nagbibigay ng malakas na suporta sa teknikal para sa paghahanda ng immune cell.

Bilang karagdagan, upang matulungan ang mga customer na makatipid ng mga gastos, ang iPhase ay nabuo din at gumawa ng reagent na konsentrasyon ng lentivirus, na nag -aalok ng isang mabilis at simpleng solusyon sa konsentrasyon.Sa pamamagitan lamang ng paghahalo ng supernatant ng lentivirus na may reagent na konsentrasyon, na sinusundan ng isang maikling pagpapapisa ng itlog at sentripugasyon gamit ang isang karaniwang sentripuge, ang mga partikulo ng lentiviral ay maaaring mabilis na puro. Ang prosesong ito ay hindi nangangailangan ng isang ultracentrifuge, ginagawa itong maginhawa at gastos - epektibong pagpipilian para sa karamihan sa mga gumagamit ng laboratoryo.

Sa madaling sabi, ang iPhase lentivirus concentration reagent hindi lamang makabuluhang nagpapabuti sa kahusayan ng paglilipat ngunit nagbibigay din ng mataas na - kalidad na suporta ng viral vector para sa paghahanda ng immune cell. Ito ay isang mahalagang produkto para sa mga nakagawiang eksperimento, preclinical research, at iba pang mga lugar ng aplikasyon.

Sa buod, ang immunotherapy, lalo na ang kotse - t cell at kotse - NK cell therapy, ay kumakatawan sa isang bagong direksyon sa paggamot sa modernong kanser. Sa pamamagitan ng tumpak na mga proseso tulad ng pag -uuri ng cell, pag -activate, transduction, pagpapalawak, at kontrol ng kalidad, ang mga siyentipiko ay maaaring maghanda ng mahusay at ligtas na mga produktong immune cell para sa mga pasyente, na nagpapagana ng target na paggamot sa kanser.Ang lentiviral transduction, bilang isang pangunahing teknolohiya, ay gumaganap ng isang kritikal na papel sa paghahanda ng kotse - t at kotse - NK cells dahil sa mataas na kahusayan at katatagan nito.Sa patuloy na pagsulong ng teknolohikal, ang immunotherapy ay humahawak ng potensyal na mag -alok ng mga makabagong pagpipilian sa paggamot para sa higit pang mga pasyente, na nagbibigay ng higit na halaga ng klinikal. Sa hinaharap, ang immunotherapy ay inaasahan na magdala ng rebolusyonaryong therapeutic na pag -asa sa mas maraming mga pasyente ng cancer.

Upang matugunan ang mga pangangailangan ng gene transduction, expression, at sakit sa pananaliksik, nag -aalok ang iPhase ng mga lentivirus packaging kit, lentivirus concentration reagents, at tracer lentiviruses. Ang mga tracer lentiviruses na ito ay nakabalot na may berdeng fluorescent protein (GFP), pulang fluorescent protein mcherry, at luciferase, na nagpapagana ng madaling pagsubaybay sa mga target na cell kapwa sa vitro at sa vivo.

Bukod sa, ang iPhase ay maaari ring mag -alok ng dalawang pre - nakabalot na tracer lentiviruses: GFP & Luciferase at McHerry & Luciferase. Ang mga tracer na ito ay maaaring mapili o pinagsama batay sa mga pang -eksperimentong pangangailangan, pag -stream ng mga daloy ng trabaho at pagpapahusay ng kahusayan para sa tunay na pagsubaybay sa oras at pagsubaybay sa mga target na cell.

IPhaseIMmunotherapyRgalakPRODUCTS

Bilang karagdagan sa lentivirus - mga kaugnay na produkto na ginamit sa kotse - t o kotse - nk therapy, iPhase, bilang isang pinuno sa vitro research reagents, ay gumawa din ng mga makabuluhang kontribusyon upang suportahan ang mga pagbabago sa CGT (cell at gene therapy) at iba pang mga larangan. Ang iPhase ay nakabuo at gumawa ng mga leukocytes at PBMC (peripheral blood mononuclear cells) na nakahiwalay sa pamamagitan ng leukapheresis, kasama ang iba't ibang mga kit ng paghihiwalay ng immune cell, upang suportahan ang mabilis na pag -unlad ng immunotherapy.

Nag -aalok ang mga produktong iPhase ng mga sumusunod na pakinabang, atIsang Sertipiko ng Pagsusuri (COA)Ang napatunayan ng iPhase ay magagamit para sa bawat batch.

Kaligtasan 

Ang mga produkto ng iPhase ay nagmula sa malusog na donor/hayop na sumailalim sa masusing pre - screening, na may negatibong mga resulta para sa pagsubok sa viral (HIV - 1/2, HBV, HCV, syphilis).

Pagsunod  

Nagbibigay ang iPhase ng mga kaalamang form ng pahintulot na nilagdaan ng mga donor, na may malinaw at traceable na pag -verify ng mapagkukunan.

Propesyonalismo

Ang mga produktong ibinigay ng iPhase, na nakuha sa pamamagitan ng leukapheresis, ay hinahawakan ng mga sinanay na propesyonal. Ang bawat batch ay sinamahan ng isang kaukulang COA, at ang mga produkto ay dinadala sa ilalim ng isang mahigpit na malamig na kadena upang matiyak ang kaligtasan, mabilis na paghahatid, at katiyakan ng kalidad.

Serbisyo sa Customer

Nag -aalok ang iPhase ng mataas na - kalidad pagkatapos ng - serbisyo sa pagbebenta, tinitiyak ang isang maayos at walang tigil na karanasan sa buong proseso ng pagsubok.