Інноваційна терапія CGT - Лентивірус - упаковка автомобіля - T імунні клітини

Інноваційна терапія CGT - Лентивірус - упаковка автомобіля - T імунні клітини

Імун -клітинна терапія - це інноваційне лікування раку, яке посилює імунну систему організму націлити та усунути ракові клітини. Основні форми включають цитокін - Індукована клітинна терапія кілерної клітин, Т - клітинна терапія та клітинна терапія CAR - Т -терапія. Терапія CAR - T передбачає перепрограмування Т -клітин для експресії химерних рецепторів антигену (CAR), які спеціально орієнтуються на пухлинні клітини, виявляючи значний успіх у гематологічних раках, таких як лейкемія та лімфома.

Ключові слова: Автомобіль - T, лентивірус, лентивірусне вектор, лентивірус відстежувач

Підготовка автомобіля - Т -клітинна терапія

Загалом, ключові кроки для приготування автомобілів - Т -клітин такі:

Рисунок Джерело: Дана - Інститут раку Фарбер

1. 1. Сорт (Т - ізоляція клітин)

Перший крок у приготуванні автомобілів - Т - це виділення т - клітин з лейкоцитів у периферичній крові пацієнта. Такі методи, як імуномагнітна розділення бісеру або проточна цитометрія, як правило, використовуються для вилучення CD3+- багатих t - клітин з крові. Для забезпечення чистоти клітини процес сортування повинен бути дуже точним, забезпечуючи отримання достатньої кількості високих - якості t - клітин.

2. 2.Stimulation (T - активація клітин)

Вилучені t - клітини активуються in vitro, як правило, використовуючи aКомплект активації /розширення CD3 /CD28 T -. Активовані Т -клітини потрапляють в активний стан, готуючи їх до трансфекції генів. Завдяки цьому процесу функція Т -клітин посилюється, сприяючи подальшій генетичній модифікації та ампліфікації.

3. 3. Трансфекція (редагування генів)

Активовані Т -клітини зазнають трансфекції генів для експресії химерного рецептора антигену (CAR). Цей процес зазвичай використовуєлентивірусне векторВвести гени автомобілів у Т -клітини. Лентівірус - це ефективний інструмент трансдукції генів, з перевагою стабільної інтеграції гена -мішенню (наприклад, ген автомобіля) у геном клітини. Зараживши Т -клітини та трансфікуючи ген автомобіля в Т -клітинну ДНК, лентивірус дозволяє Т -клітинам експресувати автомобілі довгий - термін. Автомобільний ген включає єдиний - ланцюговий змінний фрагмент (SCFV) антитіла, який дозволяє Т -клітинам розпізнавати специфічні антигени на поверхні пухлинних клітин та ініціювати імунну відповідь шляхом активації сигнальних областей Т -клітин. Як показано на малюнку 2. Лентивірусна трансфекція має характеристики високої ефективності та стабільності, так що ген автомобіля може бути експресований у Т -клітинах тривалий час.

Джерело фігури: Сінгапурський автомобіль - Т -клітинна терапія

4. 4. Ампліфікація (проліферація клітин)

Після трансфекції CAR - T клітини потрапляють у стадію ампліфікації, де такі фактори росту, якIl - 2додаються для сприяння проліферації клітин. Мета цього процесу полягає в тому, щоб забезпечити доступну достатню кількість клітин автомобілів для можливих інфузії у пацієнта. Процес ампліфікації повинен проводитися в стерильних умовах, щоб гарантувати якість та кількість клітин.

5. 5. Контроль якості (QC)
6. Перед повторною у пацієнта контроль якості має вирішальне значення під час процесу підготовки. Підготовлений автомобіль - Т -клітини проходять суворі тестування наЗабезпечити їх чистоту, активність, ефективність трансфекції та дотримання стандартів лікування. Крім того, тестування на забруднення клітин або побічні реакції необхідно для забезпечення безпеки та терапевтичної ефективності клітин після повторного введення пацієнта.

IMportance трансфекції лентивірусу в імунних клітинах

Технологія лентивірусної трансфекції має вирішальне значення в імунній клітинній терапії, особливо для редагування генів та інженерії клітин. Лентивірусні вектори, отримані з модифікованого ВІЛ - 1, широко використовуються завдяки їх здатності інтегрувати гени в геном господаря, забезпечуючи стабільну, тривалий - термін експресії. Вони можуть заражати як ділення, так і не - ділення клітин, і їх безпека була покращена шляхом модифікації ключових генів для запобігання реплікації. Ці вектори зараз зазвичай використовуються в генній терапії, редагуванні генів та досліджень клітинної біології для їх ефективності та довговічності в доставці генів.

Рисунок Джерело: obiosh.com/product/ Схематична схема упаковки лентивірусу та процес трансфекції лентивірусу в клітинах 293T

1. Ефективна трансдукція генів

Лентивірусний вектор може ефективно доставляти гени -мішеней, такі як ген автомобіля, в імунні клітини та стабільно інтегрують ці гени в клітинний геном, гарантуючи, що ген автомобіля постійно експресується під час поділу клітин та проліферації. Ця висока - можливість трансдукції ефективності є основоположним для успіху імунотерапії.

2. Луча імуногенність 

Порівняно з іншими вірусними векторами, лентивіруси мають меншу імуногенність. Як результат, коли лентивіруси використовуються для трансдування імунних клітин, імунна система пацієнта генерує відносно слабку імунну відповідь на вірус. Це допомагає мінімізувати побічні реакції, особливо в тривалому виживанні клітин після інфузії, тим самим запобігаючи надмірному відторгненню імунітету.

3. Висока пристосованість до імунних клітин

Лентивірусний вектор здатні ефективно трансдукувати різні типи імунних клітин,зокрема Т -клітини та NK -клітини. Через лентивірусну трансдукцію імунні клітини можуть придбати пухлину - специфічні здібності до розпізнавання, тим самим посилюючи їх здатність націлити та вбивати пухлинні клітини.

4. Призначення трансдукованих ефекторних клітин у розпізнаванні клітин -мішеней 

В імунотерапії,трансдуковані ефекторні клітиниЗверніться до імунних клітин, які після трансдукції експресують автомобіль та здійснюють анти - пухлинну активність. Лентивірусні вектори можуть точно доставити ген автомобіля в ці ефекторні клітини, що дозволяє їм розпізнавати та орієнтуватися на пухлинні клітини.Цільові клітиниє пухлинними клітинами, які ідентифікуються та знищуються цими імунними клітинами. Через лентивірусну трансдукцію імунні клітини можуть посилити свою специфічність у розпізнаванні та вбивстві пухлинних клітин, тим самим покращуючи терапевтичну ефективність.

У цьому контексті IPHASE, лідер дослідницьких реагентів in vitro, розробив комплект для упаковки лентивірусу та концентрацію лентивірусу для спрощення складності трансдукції для клієнтів імунотерапії та покращення успішності стабільної трансфекції генів. Ці продукти пропонують єдине - зупинити рішення для клієнтів.

Лентивірус IphasePходукти

Комплект для упаковки лентивірусу Iphaseмістить усі необхідні реагенти, необхідні дляупаковка лентивірусу, значно спрощує експериментальний процес та заощадження часу та зусиль. Цей комплект включає:

• Лентівірус упаковка плазмідної суміші
• Трансфікація реагенту
• EGFP плазміда
• Реагент концентрації лентивірусу Iphase

Цей комплект справді впорядковує експеримент! Не потребуючи складної підготовки реагенту, упаковка лентивірусу може бути ефективно завершена, просто дотримуючись інструкцій, що включаються.Унікальні переваги набору включають короткий час упаковки, високий титр вірусу та легку роботу, що робить його ідеальним для початківців у упаковці лентивірусу. Кожен набір реагентів зазнає суворого контролю якості, щоб забезпечити точні, надійні та відтворювані результати, значно підвищуючи ефективність трансфекції та стабільність вірусних векторів, тим самим забезпечуючи потужну технічну підтримку для підготовки імунних клітин.

Крім того, щоб допомогти клієнтам заощадити витрати, IPHASE також розробила та створила реагент концентрації лентивірусу, пропонуючи швидке та просте розчин концентрації.Просто змішавши супернатант лентивірусу з реагентом концентрації з подальшим коротким інкубацією та центрифугуванням, використовуючи стандартну центрифугу, лентивірусні частинки можуть бути швидко сконцентровані. Цей процес не потребує ультрацентрифуги, що робить його зручним та витратним - ефективним варіантом для більшості користувачів лабораторії.

Коротше кажучи, реагент концентрації лентивірусу Iphase не тільки значно покращує ефективність трансфекції, але й забезпечує високу - якість вірусної підтримки векторного вектора для підготовки імунних клітин. Це важливий продукт для звичайних експериментів, доклінічних досліджень та інших сфер застосування.

Підсумовуючи, імунотерапія, зокрема терапія клітин та клітинних клітин CAR - NK, являє собою новий напрямок у сучасному лікуванні раку. За допомогою точних процесів, таких як сортування клітин, активація, трансдукція, розширення та контроль якості, вчені можуть підготувати ефективні та безпечні імунні клітинні продукти для пацієнтів, що забезпечує цільове лікування раку.Лентивірусна трансдукція, як основна технологія, відіграє вирішальну роль у підготовці автомобілів - T та CAR - NK -клітин завдяки високій ефективності та стабільності.Завдяки постійному технологічному прогресу, імунотерапія має потенціал запропонувати інноваційні варіанти лікування для більшої кількості пацієнтів, забезпечуючи більшу клінічну цінність. В майбутньому очікується, що імунотерапія принесе революційну терапевтичну надію на більше хворих на рак.

Для задоволення потреб трансдукції генів, експресії та досліджень захворювань IPHASE пропонує набори для упаковки лентивірусу, концентрації лентивірусу та лентивіруси відстежувача. Ці лентивіруси для відстежувачів упаковані зеленим флуоресцентним білком (GFP), червоним флуоресцентним білком MCherry та люциферазою, що дозволяє легко відстежувати клітини -мішені як in vitro, так і in vivo.

Крім того, IPHASE може також пропонувати два перед - упаковані лентивіруси: GFP & Luciferase та Mcherry & Luciferase. Ці відстежувачі можна вибрати або комбінувати на основі експериментальних потреб, впорядкування робочих процесів та підвищення ефективності для реального - відстеження часу та моніторингу цільових клітин.

IphaseIммотерапіяRпіднесенийPходукти

На додаток до лентивірусу - продуктів, що використовуються в терапії CAR - T або CAR - NK, IPHASE, як лідер у дослідницьких реагентах in vitro, також внесла вагомий внесок у підтримку інновацій у CGT (клітинна та генна терапія) та інших полях. IPHASE розробила та виробляла лейкоцити та PBMC (мононуклеарні клітини периферичної крові), виділених за допомогою лейкаферезу, разом з різними наборами ізоляції імунних клітин, щоб підтримати швидкий розвиток імунотерапії.

Продукти IPHASE пропонують такі переваги, іСертифікат аналізу (COA)Перевірений IPHASE доступний для кожної партії.

Безпека 

Продукти IPHASE отримують у здорових донорів/тварин, які пройшли ретельне попереднє скринінг, з негативними результатами для вірусного тестування (ВІЛ - 1/2, HBV, HCV, Syphilis).

Дотримання  

IPHASE надає інформовані форми згоди, підписані донорами, з чіткою та простежуваною перевіркою джерела.

Професіоналізм

Продукти, що надаються IPHASE, отриманою за допомогою лейкферезу, обробляють підготовлені професіонали. Кожна партія супроводжується відповідним COA, а продукція транспортується під суворим холодним ланцюгом, щоб забезпечити безпеку, швидку доставку та забезпечення якості.

Обслуговування клієнтів

IPHASE пропонує високу - якість після - Служби продажів, забезпечуючи плавний та безперебійний досвід протягом усього пробного процесу.