امیونولوجیکل ریسرچ میں splenocytes: پرجاتیوں اور تنہائی ، منجمد ، پگھلنے والے اقدامات

کلیدی الفاظ:splenocytes (spls) ؛ Cynomolgus بندر splenocytes ؛ ریشس بندر splenocytes ؛ کتے splenocytes ؛ کینائن splenocytes ؛ چوہا splenocytes ؛ ماؤس splenocytes ؛ چوہوں splenocytes ؛ خرگوش splenocytes ؛ splenocytes تنہائی ؛ منجمد splenocytes ؛ splenocytes کو پگھلانے

آئی فیز پروڈکٹ

splenocytes (spls)مدافعتی خلیوں کی ایک متفاوت آبادی ہے جو تلیوں سے الگ تھلگ ہے ، جو خون کو فلٹر کرنے ، مدافعتی ردعمل کو بڑھانے اور ہومیوسٹاسس کو برقرار رکھنے میں شامل ہے۔ ان خلیوں میں لیمفوسائٹس (ٹی سیلز ، بی سیل) ، میکروفیجز ، ڈینڈرائٹک خلیات ، اور قدرتی قاتل (این کے) خلیات شامل ہیں ، یہ سب انکولی اور فطری استثنیٰ میں اہم کردار ادا کرتے ہیں۔ مدافعتی فنکشن ، ویکسین کی نشوونما ، آٹومیمون بیماریوں اور کینسر امیونو تھراپی کا مطالعہ کرنے کے لئے splenocytes وسیع پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے۔

splenocytes (SPLS) کا کردار اور تشکیل

تللی کے اندر ، splenocytes الگ الگ علاقوں میں رہتے ہیں: سرخ گودا ، جو خون کو فلٹر کرتا ہے اور پرانے سرخ خون کے خلیوں کو ری سائیکل کرتا ہے ، اور سفید گودا ، جہاں مدافعتی ردعمل شروع کیا جاتا ہے۔ سفید گودا کو ٹی سیل زون اور بی سیل follicles میں منظم کیا جاتا ہے ، جس سے اینٹیجن کے مابین تعاملات کو سہولت فراہم ہوتی ہے یہ انوکھا فن تعمیر splenocytes (SPLS) کو امیونولوجیکل اسیس جیسے ELISPOT ، فلو سائٹوومیٹری ، اور مخلوط لیمفوسائٹ رد عمل میں ایک طاقتور ٹول بناتا ہے۔

پرجاتی - مخصوص splenocytes (spls)

-Cynomolgus بندر splenocytes:سینومولگس بندر splenocytes کو کلینیکل ریسرچ میں استعمال کیا جاتا ہے کیونکہ وہ انسانی مدافعتی ردعمل کو زیادہ قریب سے نقل کرتے ہیں ، جس سے سائینومولگس بندر کو مترجم مطالعات کے لئے مثالی بنا دیا جاتا ہے۔

-ریشس بندر splenocytes:ریشس بندر splenocytes انسانوں سے قریبی امیونولوجک مماثلتوں کے لئے بھی اسی طرح قدر کی جاتی ہے۔ ریشس بندر splenocytes کا استعمال کرتے ہوئے مطالعات جانوروں کے ماڈلز اور کلینیکل ایپلی کیشنز کے مابین فرق کو ختم کرنے میں مدد کرتے ہیں۔

-کتے کے splenocytes / کینائن splenocytes:ویٹرنری ریسرچ میں ، کائینوں میں مدافعتی عوارض کا مطالعہ کرنے اور انسانی مدافعتی ردعمل کے ساتھ موازنہ کرنے کے لئے کتے کے splenocytes (یا کینائن splenocytes) کا استعمال کیا جاتا ہے۔

-خرگوش splenocytes: اینٹی باڈی کی پیداوار اور ویکسین کی نشوونما کے مطالعے میں خرگوش کے splenocytes اہم ہیں۔ خرگوش splenocytes ان تفصیلات کو ظاہر کرنے میں مدد کرتا ہے جو ماؤس splenocytes یا چوہا splenocytes سے مختلف ہوسکتی ہیں۔

-ماؤس splenocytes / چوہوں splenocytes:امیونولوجی میں ماؤس splenocytes سب سے زیادہ کثرت سے مطالعہ شدہ splenocytes (SPLs) میں سے ایک ہے۔ چوہوں سے الگ تھلگ splenocytes کے لئے پروٹوکول اچھی طرح سے قائم ہیں ، اور ماؤس splenocytes اور چوہوں کے splenocytes دونوں بہاؤ cytometry ، Elispot ، اور دیگر فعال اسسیس کے لئے استعمال ہوتے ہیں.

-چوہا splenocytes:چوہا splenocytes امیونوٹوکسیکولوجی اور ویکسین کے مطالعے کے لئے ایک تکمیلی ماڈل فراہم کرتا ہے۔ چوہوں کے splenocytes کا اکثر ماؤس splenocytes کے ساتھ موازنہ کیا جاتا ہے تاکہ انٹرپیسیس کے اختلافات کو سمجھا جاسکے۔

splenocytes تنہائی

splenocytes تنہائیمختلف تحقیقی ایپلی کیشنز ، جیسے فلو سائٹوومیٹری ، سائٹوکائن پروڈکشن اسیس ، یا مخلوط لیمفوسائٹ رد عمل میں استعمال ہونے کے لئے تلی سے مدافعتی خلیوں کو نکالنے کا عمل ہے۔

تللی کو الگ تھلگ حالات میں ، الگ تھلگ حل میں گراؤنڈ اور آر پی ایم آئی 1640 میڈیم پر مشتمل ایک جراثیم سے پاک ٹیوب میں منتقل کیا گیا تھا۔ سنٹرفیوگریشن کے بعد لیوکوائٹ پرت احتیاط سے جمع کی گئی تھی۔ خلیوں کو آر پی ایم آئی 1640 میڈیم سے دھویا گیا ، سینٹرفیوجڈ اور سپرنٹنٹنٹ کو مسترد کردیا گیا۔ اس دھونے کے مرحلے کو 1 - 2 بار دہرایا گیا تھا اس سے پہلے کہ الگ تھلگ خلیوں کو مزید تجربات کے لئے استعمال کیا جائے۔

منجمد splenocytes

منجمد splenocytesمستقبل کے استعمال کے لئے خلیوں کو محفوظ رکھنے کے لئے ایک اہم اقدام ہے۔ Cryopresively محققین کو ان کی عملیتا یا فعالیت پر سمجھوتہ کیے بغیر توسیع شدہ ادوار کے لئے splenocytes ذخیرہ کرنے کی اجازت دیتا ہے۔

تنہائی کے مرحلے سے اچھی طرح سے سینٹرفیوجڈ سیل معطلی کا سپرنٹنٹنٹ خارج کردیا گیا ہے اور سیل کی حراستی کو منجمد درمیانے درجے میں گھٹا دیا گیا تھا۔ ہر منجمد ٹیوب میں ایک الکوٹ شامل کریں اور منجمد کنٹینر میں منتقل کریں ، اس بات کو یقینی بنائیں کہ خلیات معطلی میں رہیں۔ ایک - 80 ° C فریزر میں جمنے والے کنٹینرز کو جلدی سے منجمد کریں۔ طویل - اصطلاح اسٹوریج کے لئے - 150 ° C فریزر کنٹینر (یا مائع نائٹروجن ٹینک) میں منتقل کریں۔

splenocytes کو پگھلانے

splenocytes کو پگھلانےکریوپریژریشن کے بعد اعلی سیل عملداری اور فعالیت کو یقینی بنانے کے لئے احتیاط سے کرنا چاہئے۔ پگھلانے کا عمل عام طور پر ڈی ایم ایس او اور آئس کرسٹل تشکیل کے نقصان دہ اثرات کو کم سے کم کرنے کے لئے تیز ہوتا ہے۔

کریوٹوبس کو 37 ° C پانی کے غسل میں منتقل کیا جاتا ہے اور جب تک کہ صرف عمدہ آئس کرسٹل ٹیوبوں میں ہی نہیں رہتے تھے۔ منجمد ٹیوب میں 0.5 - 1 ملی لیٹر سیل کلچر میڈیم شامل کریں ، دوبارہ شروع کریں اور معطلی کو سیل کلچر میڈیم سے بھرا ہوا 15 ملی لٹر ٹیوب میں منتقل کریں۔ سنٹرفیوج ، سپرنٹنٹنٹ کو ہٹا دیں اور سیل کے انتظامات کو ڈھیلنے کے لئے ٹیوب کو تھپتھپائیں۔ سیل کلچر میڈیم کے 1 ملی لیٹر شامل کریں ، ایک پپیٹ کے ساتھ دھچکا اور بازیافت کریں ، 15 ملی لیٹر کے حجم میں میڈیم شامل کریں۔ سینٹرفیوج ، ڈی - سپرنٹائز کریں ، سیل کلچر میڈیم کا 1 ملی لیٹر شامل کریں ، متوقع سیل حراستی کے مطابق درمیانے درجے کا اضافہ کریں۔ خلیوں کو CO2 انکیوبیٹر میں رکھیں اور ڑککن میں تھوڑا سا فرق کے ساتھ 1H کے لئے انکیوبیٹ کریں۔ انکیوبیشن کے اختتام پر ، مجموعی سیل کے ملبے کو تیز ہونے کی اجازت دینے کے لئے 1 منٹ کو دوبارہ پیش کریں اور چھوڑ دیں۔ بغیر کسی بارش کے سیل معطلی کو احتیاط سے ایک نئے 15 ملی لٹر ٹیوب میں منتقل کردیا گیا تھا۔ خلیوں کو سیل کی سرگرمی کا تعین کرنے کے لئے شمار کیا گیا تھا۔

نتیجہ

اسپلنوسائٹس ، ان کی متنوع ترکیب اور مدافعتی ردعمل میں اہم کردار کے ساتھ ، امیونولوجیکل تحقیق میں انمول اوزار ہیں۔ چاہے چوہا ، پرائمیٹ ، یا دیگر پرجاتیوں جیسے خرگوش اور کتوں سے ماخوذ ہو ، splenocytes مدافعتی فنکشن ، بیماری کے طریقہ کار ، ویکسین کی نشوونما ، اور کینسر امیونو تھراپی میں تنقیدی مطالعات میں آسانی پیدا کرتا ہے۔ تنہائی ، منجمد کرنے اور پگھلنے کے عمل ان کی سالمیت اور عملداری کو محفوظ رکھنے کے لئے ضروری ہیں ، جس سے محققین کو مختلف ماڈلز میں سیلولر حرکیات کی تلاش کرنے کے قابل بناتے ہیں۔ چونکہ امیونولوجی کے بارے میں ہماری تفہیم گہری ہوتی جارہی ہے ، اسپلنوسائٹس کا استعمال کلینیکل اسٹڈیز اور کلینیکل ایپلی کیشنز کے مابین پائے جانے والے فرق کو ختم کرنے میں معاون ثابت ہوگا ، جس سے انسانی اور ویٹرنری دونوں دواؤں میں ترقی کو یقینی بنایا جائے گا۔