Qayg'uli Assaga slaydlarni qanday tayyorlash kerak
Bukometa AssayShuningdek, yagona - hujayra elektroforezi deb nomlanadi, bu DNKning individual hujayralarni to'ldirish uchun nozik va ko'p qirrali usul. Yuqori tayyorgarlik - SifatKometa Asyy slaydS - bu Assati natijalarining ishonchliligi va takrorlanishini aniqlaydigan tanqidiy qadam. Ushbu moddada slaydlarni tayyorlash uchun slaydlarni tayyorlash bo'yicha keng qamrovli qo'llanmani taqdim etish, sohadagi mutaxassislarning tushunchasini kiritish. Biz har bir muhim qadamni hujayralarni tanlashdan ma'lumotlarni sharhlashda, siz eng yaxshi natijalarga erishishni ta'minlaymiz.Kometa Assasiga kirish va uning ahamiyati
● Komet Assay haqida umumiy nuqtai
1980-yillarning oxirlarida ishlab chiqilgan kometa Asshi DNK Strandni aniqlash uchun kuchli vositadir. U genotoksiklik sinovi, molekulyar epidemiologiya va atrof-muhit bioinatlari kabi sohalarda keng qo'llaniladi. Kometa Assi printsipi kattalashtirish hujayralarini joylashtirishni o'z ichiga oladi, ularni membranalar va oqsillarni olib tashlashga, keyin DNKni elektroforezlarga olib boradi. Oltinka o'xshash bo'lgan natijada, DNKning zararini miqdoriylashtirishga imkon beradi.● DNKning zararni aniqlash bo'yicha arizalar
Kometa varaqalari atrof-muhit toksinlar, radiatsiya va farmatsevtika tufayli kelib chiqadigan DNK zararini aniqlashda ayniqsa qadrlidir. Shuningdek, ular DNK ta'mirlash mexanizmlarining turli xil turdagi samaradorligini baholashda muhim rol o'ynaydi. Tadqiqotchilar DNKning shikastlanishi bilan bog'liq saraton, qarish va boshqa kasalliklarni o'rganish kometalaridan olingan kometafiyliklardan foydalanadilar.● genotoksiklik sinovida
Kompyuterni bekor qilishning normativ va ilmiy ahamiyati quyish mumkin emas. Ular potentsial genotoksik birikmalarni aniqlash uchun zarur dastlabki skrining vositasi bo'lib xizmat qiladi. Ushbu sub'ektlarning natijalari Qarorga ta'sir qilishi mumkin - giyohvandlikni rivojlantirish va atrof-muhit xavfsizligini baholashda jarayonlar.Komet Assay uchun tegishli hujayralarni tanlash
● ishlatiladigan hujayralar turlari
Hujayralarni tanlash kometa Assiuning natijasiga sezilarli darajada ta'sir qilishi mumkin. Ko'p ishlatiladigan hujayralar limfotsitlar, bakal hujayralar va turli xil madaniy hujayra chiziqlari kiradi. Tadqiqotchilar ko'pincha o'qish maqsadlariga asoslangan uyali turlarni va namuna olish qulayligini tanlaydilar.● Hujayralar tanlovi uchun fikrlar
Hujayralarni tanlashda hujayralar mavjudligi, DNKning zarariga sezgirligi va tadqiqot savollariga nisbatan dolzarblik kabi omillarni ko'rib chiqing. Masalan, limfotsitlar qondan osongina olinadi va genotoksik moddalarga sezgir bo'lib, ularni ko'plab tadqiqotlar uchun ajoyib tanlov qiladi.● Assagi natijalariga ta'siri
Hujayralarning kelib chiqishi va holati DNKning shikastlanish darajasiga va hujayralarga nisbatan davolanishga ta'sir qilishi mumkin. Shu sababli, kometa va takrorlanadigan natijalarga ishonchli va takrorlanadigan natijalarni olish uchun izchil hujayralarni tanlash va ishlov berish protokollari juda muhimdir.Azaroz jel tayyorlash
● Foydalanish uchun Agoroz turlari
O'ngdagi Adamorni tanlash kometa Assivining yaxlitligi uchun juda muhimdir. Yuqori eritadigan nuqta ehtirosi afzal ko'riladi, chunki u qayta ishlash paytida DNKning zararini minimallashtiradi va minimallashtiradi. Yuqori - sifatli Aadrose Nufuzli etkazib beruvchilardan, masalan, ishonchli kometatorli Slayd etkazib beruvchi yoki kometik premysi Slaydni ishlab chiqaruvchisi tomonidan sifatli.● Adalar kontsentratsiyasi va tayyorgarlik qadamlari
Odatda, 1% past erigan ballar Adalar kontsentratsiyasi qo'llaniladi. Azobni mos keladigan tampon bilan eritib oling, uni to'liq eritmaguncha qizdiring, so'ngra hujayralarni joylashtirish uchun xavfsiz haroratgacha sovutib oling. Azob-sub'ektlar pufakchalar va qoldiqlardan saqlanish uchun pufakchalar va qoldiqlardan xalos bo'lishini ta'minlash.● Gel sifatini ta'minlash
Azob jelining sifati, o'likning sezgirligi va reprokiligiga ta'sir qilishi mumkin. To'g'ri foydalanish va tayyorgarlik texnikasi turli xil slaydlar bo'ylab izchil xususiyatlarga ega bo'lgan gelni ishlab chiqarish uchun zarurdir. Bu kometalar shakllanishi va vizualizatsiya bir xil ekanligini ta'minlaydi.Azizozdagi hujayralarni to'xtatib turish va joylashtirish hujayralari
● Hujayra to'xtatib turish
Bittadan foydalanishdan boshlang - hujayralarni to'xtatib turish. Bu madaniyatli hujayralar uchun, tripsivizatsiya va undan keyin zararsizlantirish va yuvish bilan shug'ullanadi. Limfotsitlar, santrifüj va qayta tiklash va mos keladigan tampon kabi birlamchi hujayralar uchun zarurdir. Taxminan 1 x 10 ^ 5 hujayralarni / ml hujayra kontsentratsiyasini ta'minlash uchun gemositometrdan foydalaning.● Yuqori eriydigan balosidagi hujayralarni joylashtirish
Hujayra to'xtatib turing Tezda pipetkadan Pietkagacha Atalar pufakchalarini yoyish va havo pufakchalarini oldini olish uchun katakchalardan foydalaning.● Slaydlarga hujayralarni yoyish
Agar Adazalik tarqalib ketsa, slaydlarga sovuq yuzaga yoki muzlatgichli hududda salqin va mustahkamlashga imkon bering. Ushbu bosqichda Adaornani notekis holatini notekis holatini oldini olish uchun samarali amalga oshirilishi kerak, bu tahlil paytida kometalarni vizualizatsiya qilishga ta'sir qilishi mumkin.Slaydlarda hujayralarning lizizi
● Lisis echimining tarkibi
Lizey echimi odatda "Nacl, EDTA" va "Triton X - 100" kabi yuqori konsentratsiyalarni o'z ichiga oladi, masalan, DNKni buzmasdan chiqib, membrana va oqsillarni olib tashlang.● Lisis va shartlar
Kamida 1 soat davomida kamida 1 soat davomida liziz echimida va 4 ° C da inkubate-dagi slaydlarni yuving. To'qnashuv va ifloslanishning oldini olish uchun liziz tank qopqidiga ishonch hosil qiling. Lizis bosqichining shartlari uyali aloqa tarkibiy qismlarini DNKni buzmasdan olib tashlash uchun juda muhimdir.● To'liq hujayra lizizining ahamiyati
Tugallanmagan liz bo'lmagan kometalar shakllanishi va ishonchsiz ma'lumotlar keltirilishi mumkin. Shuning uchun, layj protokoliga diqqat bilan kuzatib, eritmaning barcha qismlariga kirib, slaydning barcha qismlariga kirib boradi va bu hujayralarni to'liq buzilish uchun etarli.Ishqorli va elektroforeziy shartlari
● ishqorli eritmani tayyorlash
DNKni tugatish uchun ishqorli eritma, ko'pincha Nauh va Edta aralashmasi DNKni bo'shatish uchun ishlatiladi. Uni tayyorlash pH va molilmaslikni ehtiyotkorlik bilan bajarish kerak. Uning samaradorligini saqlab qolish uchun echimni yangi tayyorlang.● ishqorni ochib berish muhimligi va vaqti
Ishqorli eritmadagi inkubate slaydlar odatda 20 - 40 daqiqa davomida, DNKni bo'shashishga imkon berish uchun. Bu qadam bitta - Straning tanaffuslari va ishqorli sahifalar. Muayyan protokolingiz va hujayra turiga qarab cheklash vaqtini optimallashtirish.● Elektroforezlarni sozlash va parametrlar
Elektoforezors tankini sovuq ishqorli elektroforez buferi bilan o'rnating. Slaydlarni idishga joylashtiring, ular to'liq cho'kayotganini ta'minlang. 20 - 30 daqiqa davomida izchil kuchlanishni (odatda 25 v) qo'llang. Elektroforeziy sharoitlar, shu jumladan voltlanish va vaqt, DNK migratsiyasining eng yaxshi qaroriga erishish uchun optimallashtirilgan bo'lishi kerak.Zararsizlantirish va bo'yash jarayon
● Neytrallashtirish buferni tayyorlash va ulardan foydalanish
Elektroforezdan keyin, slaydlarni zararsizlantiradi, reaktsiyani to'xtatish va DNKni barqarorlashtirish uchun. Umumiy zararsizlantirish buferi 7.5 da Tris bazasini o'z ichiga oladi. Ishqorli eritmaning barcha izlarini olib tashlash uchun bu tampondagi slaydlarni bir necha marta yuving.● Suyuq texnikalar
Fluensson DNK bilan zararsizlangan slaydlarni dog ', masalan, etikli bromid yoki syb yashil kabi bog'lab qo'yish. Ethidium bromidi, klassik bo'lganida, Mutagenik xususiyatlari tufayli ehtiyotkorlik bilan ishlov berishni talab qiladi. Syb yashil yuqori sezgirlik bilan xavfsizroq alternativani taklif qiladi. Qorong'ida kerakli vaqtda (odatda 15 - 30 minut) slaydlarni ko'ylagi echimidagi inkubat qiling.● DNK kometalarini vizualizatsiya qilish
Sog'in bo'lgandan keyin, ortiqcha dog'ni olib tashlash uchun slaydlarni muloyimlik bilan yuving. Ftorcence mikroskopi ostidagi slaydlarni tekshiring. Sog'lom va mikroskopning rezolyutsiyasining sifati kometalarning toza tasvirlarini olish uchun juda muhimdir.Mikroskopiya va tasvirni tahlil qilish
● To'g'ri mikroskopni tanlash
Tegishli DNKni vizualizatsiya qilish uchun tegishli filtr to'plamiga ega bo'lgan florentence mikroskopi kerak. Kompyuterlarning batafsil rasmlarini olish qobiliyatiga ega bo'lgan yuqori aniqlik va kamera tizimi bilan mikroskopni tanlang.● Yuqori sifatli suratlar
Statistik ahamiyatga ega bo'lish uchun har bir slayd uchun kamida 50 ta kommetlarni suratga olish. Hattoki yoritishni va asarlardan qochishga e'tibor bering. Mikroskop va kamera sozlamalarini to'g'ri kalibrlash tasvir sifatini sezilarli darajada oshirishi mumkin.● Kometani tahlil qilish uchun dasturiy ta'minot
Kometscore va Casp kabi bir nechta dasturiy dasturlar mavjud. Ushbu dasturlar DNKning zarari va dnaning zararini hisoblash uchun tanqidiy bo'lgan quyruq uzunligi, quyruq intensivligi va quyruq paytida o'lchovlarni o'lchashadi.Umumiy muammolarni bartaraf etish
● keng tarqalgan muammolar
Kombinorlarda umumiy muammolar yuqori fon florentence, past kometa shakllanishi va slaydlar o'rtasida nomuvofiq natijalar kiradi. Ushbu muammolar turli xil manbalardan, jumladan kambag'al ishlov berish, sulptimal gel tayyorlash va noto'g'ri liziz yoki elektroforodlarning shikastlanishi mumkin.● echimlar va profilaktika choralari
Yuqori fon floresanchasini yumshatish uchun barcha reaktivlar va gellar ifloslantiruvchi moddalardan xoli ekanligiga ishonch hosil qiling. Kam kometa shakllanishi uchun hujayralarning hayotiyligi yuqori ekanligini tekshiring va liziz sharoiti eng maqbuldir. Slaydni tayyorlash va peshqadamlik bilan mustahkamlash profilaktik choralardir.● takrorlanish va aniqlikni ta'minlash
Kommetsiyalardan keyin takrorlanishga erishish, qat'iy protokol standartlashtirish va har bir bosqichni muntazam ravishda tekshirish talab etiladi. Doimiy ravishda kalibrlash uskunalari, yuqori sifatli foydalaning va aniqlikni ta'minlash uchun barcha eksperimental sharoitlarni batafsil rekordizatsiya qilish.Ma'lumotlarni talqin qilish va hisobot natijalari
● komet dum parametrlarini tahlil qilish
DNKni to'ldirishning asosiy parametrlari dna migratsiyasi va dnna miqdorini aks ettiradigan dna intensivligini aks ettiradi. Zaytun dumi lahzasi, kompozit o'lchov, shuningdek, odatda qo'llaniladi.● Ma'lumotlar hisobotida statistik mulohazalar
Ma'lumotni sharhlash uchun aniq statistik tahlil zarur. DNKning shikastlanish darajasini turli xil namunalar orasidagi taqqoslash uchun tegishli statistik testlardan foydalaning. Ko'p slaydlar va tajribalarning o'zgaruvchanligi uchun hisobga olinishini ta'minlang.● topilmalarni taqdim qilish va talqin qilish
Natijada asosiy topilmalarni tasvirlash uchun grafika va jadvallardan foydalanib, aniq va qisqacha aytib bering. DNKning zarar darajasining oqibatlarini muhokama qiladi va o'rganilayotgan biologik tizimga ta'sir qiladi.Xulosa: Yuqori darajaga erishish - Sifat kombasi Slaydlar
Yuqori tayyorgarlik - Sifatli kommet Slayds hujayralarni tanlash, Adaar Gel tayyorlash, lizisore, shaffof va tasvirlarni tahlil qilishni o'z ichiga oladi. Ishonch va takrorlanadigan natijalarni ta'minlash uchun har bir qadam ehtiyotkorlik bilan optimallashtirilgan va standartlashtirilishi kerak. Slayd etkazib beruvchilari va ishlab chiqaruvchilarning nufuzli kometalar va ishlab chiqaruvchilar yuqori darajadagi materiallar va texnik yordam ko'rsatib, sizning subyeningiz sifatini oshirishi mumkin.● HaqidaIPhoneBiodcies
Shortlik Shimoliy Uelsda, Pensilvaniya, Ipnylalvaniya, iPhazase bioscients - bu innovatsion biologik regenentlarning ilmiy, ishlab chiqish, ishlab chiqarish, sotish, sotish va texnik xizmatlarini birlashtirish. Ilmiy izlanishlar uchun katta tajriba va ilmiy izlanishlar uchun katta tajribali mutaxassislar bizning dunyo olimlariga sifatli innovatsion biologik rezistansga ega va ilmiy xodimlarga ilmiy maqsadlariga erishishda yordam berishga yordam beradi. "Kelgusini o'rganish, innovatsion reaktiv repentsiyalar" ning ilmiy-idealida, Iphase AQSh, Evropa va Sharqiy Osiyo mamlakatlarida tarqatish markazlari, savdo markazlari, omborxonalar, omborxonalar va tarqatish bo'yicha sheriklar - 12000 kvadrat metrni qamrab olgan.O'tish vaqti: 2024 - 28:05:21