Kalamush jigarining jigarining kasrlari: vitro genotoksiklik va mutatsiya sinovlarida metabolik faollashtirish tizimi

Kalit so'zlar: 471, OECD 473, OECD 476, OECD 476, mutatsiya testi, genotoksiklik, genetoksiya, mikronukleus, HPRT / HGTPT HPTHT, HPTHT / HGTPT, TK Assay

Iphaza mahsuloti

Kirish

Kalamushlar jigar s9baholashning asosiy tarkibiy qismiGenetik toksiklikAyniqsa tartibga solish toksikologiyasi kimyoviy moddalar potentsiali. Odatda, masalan, vitro tajovuzda qo'llaniladiAMES sinovi vaMutatsiya testlari, aralashmalarning mutagen xususiyatlarini baholash. Situshrrome p450 (Cyp450) ga boy fermentat tizimini (Cyp450), ya'ni jigarda yuzaga keladigan metabolik jarayonlarni simulyatsiya qilishda muhim rol o'ynaydi, bu esa genetik mutatsiyalar yoki saraton kasalligini aniqlashda hal qiluvchi rol o'ynaydi.

Kalamushlar jigar s9

Jigar S9 fraktsiyasi postga tegishli - Mitoxondry Supernatant bir qator sanitar ravishda kadrlar guruhidan olingan. "Yaratilgan" atamasi kalamushlarni jigar fermentlari faoliyatini kuchaytiradigan o'ziga xos aralashmalar, xususan, kitushrrom p450 fermentlari (Cyp450 fermentlari (Cyp450 fermentlari).

Tarmoqli kalamush jigarining jigarining kassasi tarkibida kimyoviy moddalar va ii metabolizm bosqichida ishtirok etadigan turli xil fermentlar mavjud. Bunga situsherrom p450 monooxyenzalari kabi fermentlar kiradi, bu esa inson jigarining metabolizmini taqlid qiladi.

CyP450 faoliyati va metabolik faollash

P450 fermenti oilasi (CyP450) plyuchrome (CyP450) turli xil moddalar, jumladan, ko'pchilik farmatsevtika, atrof-muhit va karsinogenlar metabolizmida hal qiluvchi rol o'ynaydi. Tarmoqli kalamush jigarining jarligi ushbu fermentlar tarkibida ushbu fermentlar mavjud bo'lib, ular faqat vetrolkasiya aktivlashtirishdan keyin faqat genotoksik bo'lgan kimyoviy moddalarni baholash uchun zarurdir.

Ko'plab aralashmalar dastlab - toksik, ammo jigarda metabolizmdan keyin toksik bo'lib qolishi mumkin. Ushbu Pro - Malagencens (Malagenik bo'lish uchun metabolik faollikni talab qiladi) va ProCinogenlar (saratonni keltirib chiqarishni talab qiladigan metabolik faollikni talab qiladi). CyP450 singari metabolik fermentlarning indutivatida, bu moddalar standart genotoksiklik sinovlarida zararsiz ko'rinishi mumkin.

Tasdiqlangan kalamushlar jigarini qo'shib berish orqali tadqiqotchilar moddaning CyyP450 fermentlari bilan o'zaro bog'liqligini baholashlari mumkin. Bu, ayniqsa, farmatsevtika uchun juda muhim, chunki CyyP450 fermentlari ko'plab dorilarning farmakokinetikasida og'ir qadamdir.

Tarkibi kalamush jigarining jigarining arizalari

1. 1. AMES sinovi (OECD 471)

Qo'llanmada ko'rsatilgan AMES sinoviOECD 471, eng yaxshi narsalardan biri hisoblanadi - ma'lum va mutlagenlikni baholash uchun keng tarqalgan usullar. Bu sarorella bakteriyalarining shtammlarini sinov kimyoviy tomonlarini sinash uchun kimyoviy moddalarni, agar bakteriyalarga histininga qaytarishiga olib keladigan mutlaterlarga olib keladigan degani, mustaqil davlat.

Insonning metabolik jarayonini taqlid qilish uchun, kalamushlar jigar S9 ko'pincha test tizimiga qo'shiladi. S9 Fraktsiya zarur fermentlarni, shu jumladan CyP450 ni o'z ichiga oladi, bu aralashmani bakterial DNKdagi mutatsiyalarga olib kelishi mumkin bo'lgan yanada reaktiv shaklga etkazish kerak. AMES testi bilan birgalikda S9 ning ushbu kombinatsiyasi mutlagen mexanizmlarini to'g'ridan-to'g'ri va metabolik bo'lmagan mexanizmlarni taqlid qilish orqali mutlagen potentsialini yanada kengroq baholashga imkon beradi.

2. 2.Mutatsiya testlari (xromosoma Avrissiyasi testi, mikronarleus testi va boshqa vitro tajovuzda)

AMES sinovidan tashqari, mutatsiya testlari odatda kimyoviy moddalarning genotoksik salohiyatini baholash uchun ishlatiladi. Ushbu testlar genetik shikastlanish, shu jumladan xromosoma mutatsiyalari, gen mutatsiyalari va mikronuklining shakllanishini baholashda yanada kengroq. Kalamush jigar yarmi S9 quyidagi sabablarga ko'ra mutatsiya testida ishlatilgan:

Mikronukleus sinovi (OECD 487)

Ushbu sinov xromosomalar yoki hujayralar bo'linmasida yadro ichiga kiritilmagan g'alla ichiga singilmaydigan mayda, ekrosimosanoat moddalari bo'lgan hujayralardagi mikronuklei shakllanishini aniqlaydi. Bu Mikronuarleus testiklastogenni (xromosoma - sinish) va anonenik (xromosoma raqamiga ta'sir ko'rsatishi) ta'sir qilishi mumkin. Test moddalarining yallig'langan kalamushlar teskolik moddalarini faollashtirish uchun ishlatiladi, chunki ba'zi kimyoviy moddalar, ular jigar fermentlari tomonidan metabollanganidan keyin xromosoma zarar etkazadi. S9 fraktsiyasi testning sezgirligini oshiradi, bu metabolik faollikni simulyatsiya qilish mumkin.

Xromosoma Adashish testi (OECD 473)

Ushbu test bir modda xromosomalarga tanaffuslar, o'chirish, transokatsiyalar yoki boshqa turdagi obro'-e'tibor bilan hosilning tarkibiy zarariga olib kelishi mumkinligini baholaydi. Mikronukleus sinovi singari,xromosoma Adashish testimetabolik faollashtirish bilan qo'llanilishi mumkin. Yaltirgan kalamushlar jigarda metabolik jarayonlarni taqqoslash uchun metabolik jarayonlarni taqlid qilish uchun metabolik jarayonlarni taqlid qilish uchun almashinuv tizimiga qo'shiladi, ammo jigar metabolizmidan keyin buni amalga oshirishi mumkin.

1-jadval. Mutatsiya testlarining qiyosiy fikrlari

HPRT / HGPT ASEN (OECD 476)

IchidaHPRT / HGPT HAQIS, xitoylik Hamster (Cho yoki V79) madaniyati yoki inson limfoblastidi (TK6) hujayralari dna ranglarni reaktiv turlarga aylantirish uchun zarur bo'lgan kalamushlarni etkazib berish uchun mo'ljallangan kalamushli kalamushga chiqadi. Qisqa davolanishdan keyin va etti kunlik iboralar davri, hujayralar 6 ta tioguanin bilan bog'liq; Faqat giyohvand fosforibozsensinestaza genitsidagi nojo'ya mutatsiyalar bilan bog'liq mutatsiyalar - omon qoladi. Mutkut mustamlakasini taqqoslash orqali umuman hayotiyligini taqqoslash orqali tadqiqotchilar mutanosib va ​​tarixiy boshqaruvdan keyin ko'paygan holda mutatsiya chastotasini aniqlaydilar, genotoksik salohiyatni bildiradi.

TK suiistikasi (490 & OECD 476)

BuTK Assay L5178y sichqoncha hujayralari yoki Cho Celles (OECD 490)OECD 476) Thimiden Kinase lokusida muhandis heterozigirglog. Kimyoviy ta'sir qilish ± s9 aralashtirish, hujayralar tiklanadigan hujayralarni o'ldiradigan triflujimidinni o'z ichiga olgan tififlujimidinni o'z ichiga oladi. Omon qolgan titantlar 10-14 kun davomida koloniyalarni hosil qiladi, kichik koloniya muttasllari ko'pincha xromosomajlar va katta koloniya mutatsiyalarini aks ettiradi. GPTT / HGPT ASEN ASENGE, qattiq sitotoksiklik nazorati va ijobiy mutagen ko'rsatkichlari mutatsiya chastotasida kuzatilgan genotoksik xavfni ishonchli tarzda aks ettirilishini ta'minlaydi.

4. 4. Saraton xavfini baholash

Tarkibi kalamush jigarida saraton kasalligini baholashga qaratilgan tadqiqotlar uchun ham qo'llaniladi - moddalar potentsialini keltirib chiqaradi. Inson jigarida yuzaga keladigan metabolik jarayonlarni taqlid qilib, S9 fraktsiyasi DNKga bog'lab, DNKga majburan kuchlanishga olib keladigan reaktiv metabolitlarni shakllantirishga olib kelishi mumkin.

Gamster Jigar S9 bilan ekilgan AMES sinovi

Evropa dori-darmonlari (EMA) tomonidan berilgan eng so'nggi ko'rsatmalarga ko'ra, an'anaviy Ames testi, nitrozsimon aralashliklarni aniqlash uchun etarli darajada sezgir bo'lmasligi mumkin, ular orasida ndma. Shu sababli, Milliy toksikologik tadqiqotlar markazi (NCTR), AQShning oziq-ovqat va giyohvandlik ma'muriyati bo'limi (FDA) tomonidan ishlab chiqilgan AMES testi, yanada ishonchli alternativa sifatida tavsiya etilgan. Kengaytirilgan AMES testi, tarkibida 30% kastrul kastri 30 va 30% gaster jigarining 30% ni tashkil etgan. Kalamush va hamster desmotomal supernotnatantlari (S9S) Citchrome P450 fermenti bilan davolangan kemiruvchilarga tayyorlanishi kerak - Kerakli moddalar. Yukliqni jalb qilish orqali, bu kuchaytirilgan sinovni eng yaxshilash, inson metabolizmini yaxshiroq taqsimlaydi va natijalarning ishonchliligini oshiradi.

Xulosa

Tarkibi kamoder S9 genotoksiklik sinovida muhim vositadir, tadqiqotchilar va me'yoriy idoralardagi mutagen va karsinogen salohiyatini kimyoviy moddalarni baholashda yordam beradi. Metabolik faollashtirish tizimini taqdim etish orqali AMES sinovlari, mutatsiya testlari va kifferents-ni genotoksik bo'lish uchun metabolik faollikni talab qiladigan moddalarni aniqlash uchun. Uning arizalari yangi dorilar, kimyoviy moddalar va iste'mol mahsulotlarining xavfsizligini ta'minlash uchun zarurdir. Inson jigarining metabolizmini taqsimlashdagi o'rni bilan, kalamushlar Saytning jigarining ulushi zamonaviy toksikologiya va tartibga soluvchi xavfsizlikni baholashning ajralmas qismidir.