Splenosiete in immunologiese navorsing: oor spesies en isolasie, vries, ontdooi stappe

Sleutelwoorde:Splenosiete (SPLS); Cynomolgus aap splenosiete; Rhesus aap splenosiete; Honde splenosiete; Splenosiete van die honde; Rotte splenosiete; Muis splenosiete; Muise splenosiete; Konyn splenosiete; Splenosiete isolasie; Vriesende splenosiete; Ontdooi splenosiete

IPhase -produk

Splenosiete (SPLS)is 'n heterogene bevolking van immuunselle wat van die milt geïsoleer is, 'n belangrike orgaan wat betrokke is by die filter van bloed, die montering van immuunrespons en die handhawing van homeostase. Hierdie selle sluit limfosiete (T -selle, B -selle), makrofage, dendritiese selle en natuurlike moordenaarselle (NK) in, wat almal kritieke rolle speel in aanpasbare en aangebore immuniteit. Splenosiete word wyd gebruik in prekliniese en vertalingsnavorsing om immuunfunksie, entstofontwikkeling, outo -immuun siektes en kankerimmunoterapie te bestudeer.

Die rol en samestelling van splenosiete (SPLS)

Binne die milt woon splenosiete in verskillende streke: die rooi pulp, wat bloed filter en ou rooibloedselle herwin, en die wit pulp, waar immuunrespons begin word. Die wit pulp word in T -selsones en B -selfollikels georganiseer, wat interaksies tussen antigeen - aanbiedende selle en limfosiete vergemaklik. Hierdie unieke argitektuur maak splenosiete (SPLS) 'n kragtige instrument in immunologiese ondersoeke soos ELISPOT, vloeisitometrie en gemengde limfosietreaksies.

Spesies - Spesifieke splenosiete (SPLS)

-Cynomolgus aap splenosiete:Cynomolgus -aap -splenosiete word in prekliniese navorsing gebruik omdat dit menslike immuunrespons nouer naboots, wat die cynomolgus -aap -splenosiete ideaal maak vir vertaalstudies.

-Rhesus aap splenosiete:Rhesus -aap -splenosiete word op dieselfde manier gewaardeer vir hul noue immunologiese ooreenkomste met mense. Studies wat rhesus -aap -splenosiete gebruik, help om die gaping tussen dieremodelle en kliniese toepassings te oorbrug.

-Hond splenosiete / honde splenosiete:In veeartsenykundige navorsing word honde -splenosiete (of splenosiete van die hond) gebruik om immuunafwykings in honde te bestudeer en om vergelykings met menslike immuunrespons te tref.

-Konyn splenosiete: Konynsplenosiete is belangrik in studies oor teenliggaamproduksie en entstofontwikkeling. Konyn -splenosiete help om besonderhede te openbaar wat kan verskil van muis -splenosiete of rotte -splenosiete.

-Muis splenosiete / muise splenosiete:Muis -splenosiete is een van die mees bestudeerde splenosiete (SPLS) in immunologie. Protokolle vir isolasie -splenosiete van muise is goed gevestig, en beide muis -splenosiete en muise splenosiete word gebruik vir vloei -sitometrie, ELISPOT en ander funksionele toetse.

-Rotsplenosiete:Ratsplenosiete bied 'n aanvullende model vir immunotoksikologie en entstofstudies. Rat -splenosiete word dikwels vergelyk met muis -splenosiete om die tussenspesie -verskille te verstaan.

Splenosiete isolasie

Splenosiete isolasieIs die proses om immuunselle uit die milt te onttrek wat in verskillende navorsingstoepassings gebruik moet word, soos vloei -sitometrie, sitokienproduksie -ondersoeke of gemengde limfosietreaksies.

Die milt is onder aseptiese toestande verwyder, in isolasieoplossing gemaal en oorgedra na 'n steriele buis wat RPMI 1640 -medium bevat. Die leukosietlaag is noukeurig versamel na sentrifugering. Die selle is met RPMI 1640 -medium gewas, gesentrifugeer en die supernatant weggegooi. Hierdie wasstap is 1 - 2 keer herhaal voordat die geïsoleerde selle vir verdere eksperimente gebruik is.

Vriesende splenosiete

Vriesende splenosieteis 'n belangrike stap vir die behoud van selle vir toekomstige gebruik. Cryopreservering stel navorsers in staat om splenosiete vir lang periodes op te slaan sonder om hul lewensvatbaarheid of funksionaliteit in die gedrang te bring.

Die supernatant van die putgesentrifugeerde selsuspensie uit die isolasietap word weggegooi en die selkonsentrasie is in vriesmedium verdun. Voeg 'n alikot by elke vriesbuis en dra dit na 'n vrieskas oor, wat verseker dat die selle in suspensie bly. Vries die vrieskaste vinnig in 'n vrieskas van 80 ° C. Oordrag na - 150 ° C vrieskashouer (of vloeibare stikstoftenk) vir lang - termynberging.

Ontdooi splenosiete

Ontdooi splenosieteMoet noukeurig gedoen word om die lewensvatbaarheid en funksionaliteit van 'n hoë sel te verseker na cryopreservering. Die ontdooiingsproses is tipies vinnig om die skadelike effekte van DMSO en yskristalvorming tot die minimum te beperk.

Die kryotubusse word na 'n waterbad van 37 ° C oorgedra en ontdooi totdat slegs fyn yskristalle in die buise gebly het. Voeg 0,5 - 1 ml selkultuurmedium by die bevrore buis, sit die suspensie oor en dra die suspensie oor na 'n 15 ml -buis gevul met selkultuurmedium. Sentrifuge, verwyder supernatant en tik op die buis om die selreëling los te maak. Voeg 1 ml selkultuurmedium by, blaas en resuspend met 'n pipet, voeg medium by tot 'n volume van 15 ml. Sentrifuge, de - supernatiseer, voeg 1 ml selkultuurmedium by, voeg medium by volgens die verwagte selkonsentrasie. Plaas die selle in 'n CO2 -broeikas en inkubeer vir 1 uur met 'n effense gaping in die deksel. Aan die einde van die inkubasie, weergee en laat dit vir 1min om die saamgestelde selpuin te laat neerslag. Die selsuspensie sonder neerslag is noukeurig na 'n nuwe 15 ml -buis oorgedra. Selle is getel om selaktiwiteit te bepaal.

Konklusie

Splenosiete, met hul uiteenlopende samestelling en 'n belangrike rol in immuunrespons, is van onskatbare waarde in immunologiese navorsing. Of dit nou afgelei is van knaagdiere, primate of ander spesies soos konyne en honde, splenosiete vergemaklik kritiese studies in immuunfunksie, siekte -meganismes, entstofontwikkeling en kankerimmunoterapie. Die prosesse van isolasie, vries en ontdooi is noodsaaklik om hul integriteit en lewensvatbaarheid te bewaar, wat navorsers in staat stel om sellulêre dinamika in verskillende modelle te ondersoek. Namate ons begrip van immunologie verdiep, sal die gebruik van splenosiete steeds 'n belangrike rol speel in die oorbrugging van die gaping tussen prekliniese studies en kliniese toepassings, wat die vooruitgang in menslike en veeartsenykunde verseker.