Vrae

V: Hoe moet ek mikrosome en hepatosiete kies vir metaboliese stabiliteitstudies? Kan ek slegs een van hulle kies om aan die vereiste te voldoen?

A: In metaboliese stabiliteitstudie hang die keuse van lewermikrosome of hepatosiete hoofsaaklik af van die metaboliese eienskappe van die verbindings, waarin die een met 'n hoë metaboliese tempo gekies word. Oor die algemeen word lewermikrosome verkies, veral as die saamgestelde molekules meer water is - oplosbaar en een - fase -metabolisme is die belangrikste metaboliese weg (veral via CYP). Hepatosiete kan gebruik word vir eksperimente wanneer daar bewyse is van twee - fase -metabolisme as die belangrikste baan, hidrolise as die belangrikste metaboliese weg, hoë nie -spesifieke proteïenbinding in lewermikrosome, en metabolisme in lewermikrosome is nie duidelik nie. Gewoonlik kan een metaboliese stelsel gekies word om aan die behoeftes te voldoen; As die voorwaardes in alle aspekte dit toelaat, is dit beslis die beste om albei stelsels terselfdertyd te kies.

V: Waarom is dit nodig om primêre hepatosiete vir ensieminduksie -toetsing te gebruik?

A: CYP -ensiem - geïnduseerde toets moet van "transkripsie", "vertaling" na "Post - Translational Modification of Protein" gaan om 'n aktiewe CYP -ensiemproteïen te verkry. Daarom moet die toetsstelsel lewerselle wees, nie lewermikrosome of lewer S9 nie.

V: Waarom moet ek drie primêre hepatosiete van die skenker vir die ensieminduksie -toets kies?

A: Volgens die inleiding tot die riglyne vir medisyne -interaksies, moet ten minste drie skenkers gebruik word, en die induksie -resultaat van elke skenker moet afsonderlik geëvalueer word. Benewens die lewer van statisties beduidende resultate, is die keuse van drie donateurs vir die eksperiment ook belangriker vir die assessering van inter - individuele variasie. As die resultaat van ten minste een skenker 'n voorafbepaalde drempel oorskry, kan die dwelmkandidaat induseerbaar wees en die opvolgevaluering is nodig.

V: Waarom fokus u slegs op CYP -ensieminduksie en nie op UGT -ensieminduksie nie?

A: Die rede om op cypase -induksie te fokus, is dat die meganisme van cypase -induksie duideliker bestudeer is. Met ander woorde, die rede waarom u nie die studie van UGTase -induksie vereis nie, is dat die meganisme nog onduidelik is; Dit beteken egter nie dat UGTase nie geïnduseer sal word nie. Die riglyne noem ook dat daar geen gestandaardiseerde klassifikasiestelsel vir induseerders of remmers van vervoerders en fase II -metabolisme -ensieme is nie.

V: Hoe lank kan aanhangende primêre hepatosiete oorleef na resussitasie, en hoe lank kan hepatosiete gehandhaaf word sonder die aanhangende kultuur na resussitasie?

A: Gepasteuriseerde primêre hepatosiete word gewoonlik gebruik vir ensieminduksie -ondersoeke. Na die herstel van die sel word selle in plaatverspreidingsmedium gesuspendeer, aangepas by die toepaslike konsentrasie en in kollageen gekweek - bedekte plate; dan kan selle binne 4 ~ 6 uur gepasteuriseer word. Nadat die selle aan die muur vasgemaak is, word die instandhoudingsmedium vir 18 uur vervang en onderhou om die maksimum herstel van die seltoestand te verseker. Vervolgens kan ensieminduksie -toetsing uitgevoer word om metaboliese aktiwiteit en mRNA -induksievlak op te spoor. Vanuit die perspektief van die hele siklus kan hepatosiete 6 ~ 7 dae na die nakoming van die muur gehandhaaf word. Soos die tyd verloop, word die nakoming van die selwand agteruitgegaan, en die selle sal los en opskort.

As die aanhangende hepatosiete nie gekweek word nie, het ons bevestig dat dit binne 4 ~ 6 uur in 'n goeie toestand gehandhaaf kan word. Ons het nog nie langer verifikasie uitgevoer nie.

V: Hepatosiete kan gebruik word as suspensie- en aanhangende selle, afhangende van die verskillende kultuurmedia wat gebruik word?

A: Die meeste selle van soliede weefsels en organe is ommuur, maar nie alle selle word om meebring as hulle in - vitro gekweek word nie. Of die selle muur is - aanheg of nie, hang af van die toestand van selle self; Terselfdertyd benodig muur - aanhegtende selle spesifieke kultuurmedium en 'n paar spesiale pro - seladhesie -stowwe (bv. Rhamnogelinogeen, laminien, fibronektien, serumuitbreidingsfaktor) wat aan die proses van selaanhegting kan deelneem. Ten slotte kan aanhegtende selle as suspensie -selle gebruik word, maar suspensie -selle is nie noodwendig beskikbaar vir aanhangende gebruik nie.

V: Wat is die voor- en nadele van die gebruik van aanhegtende muurverse -vering hepatosiete? Wat is die beslissingskriteria?

A: Nadat hepatosiete geïsoleer is, kan hulle in suspensie of in die muur gekweek word. Die aktiwiteit van sitochroom P450 -ensiem van suspensie gekweekte primêre hepatosiete is die meeste in ooreenstemming met dié van in - vivo vir die eerste 4 ~ 6h, en neem dan vinnig af met die verlenging van die tyd. Daarom word hepatosiete van die suspensie gewoonlik gebruik vir metaboliese stabiliteitstudie of metabolietprofielstudie. Primêre hepatosiete gekweek in aanhangende muur het voldoende tyd om te herstel van skade om die biologiese eienskappe en metaboliese aktiwiteit van normale hepatosiete te handhaaf. Daarom word dit meestal gebruik vir ensieminduksie -studies, geneesmiddelsitotoksisiteitstudies, metaboliese stabiliteit van stadig metaboliseer medisyne of produkinferensie -studies.

Tans lewer ons nie die aanlynaankoopdiens vir webbladsye nie. Die produkte wat na registrasie en aanmelding by die inkopiemandjie gevoeg word, is slegs vir verwysing. As u ons produkte moet koop, moet u u kontakinligting deur die Contact Us Channel laat, en ons sal u betyds kontak om ons dienste te voltooi.

V ： Hoe beïnvloed nie - spesifieke proteïenbinding die toetsresultate?

A ： As die geneesmiddelkandidaat nie aan mikrosomale proteïene bind nie, lei dit tot veranderde kinetiese parameters. Namate die proteïenkonsentrasie toeneem, neem die KM -waarde toe, wat lei tot 'n lae veronderstelde intrinsieke opruiming. Die binding van die geneesmiddelkandidaat aan proteïene in mikrosome kan ook lei tot groot variasies in resultate van verskillende laboratoriums en verskillende stelsels.

Q ： Die aanbevole konsentrasie van lewer mikrosomale proteïen in die handleiding van fase I of fase II metaboliese stabiliteitskit is 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, dit beteken dat dit nog steeds nodig is om dit goed te verdun voordat u dit by die stelsel voeg?

A: Dit is nie nodig om die lewermikrosome eers te verdun nie; Die konsentrasie van die microsome in die kit is 20 mg/ml en die finale konsentrasie van die microsome in die toetsstelsel is 0,1 - 1 mg/ml, wat proporsioneel bygevoeg kan word.

V ： Wat is die aanbevole seldigtheid vir metaboliese stabiliteitstoetsing van primêre hepatosiete? Is die opruimingsberekening dieselfde as vir lewermikrosome?

A ： Die aanbevole seldigtheid vir die primêre hepatosietmetaboliese stabiliteitstoets is 0,5 tot 2 × 10⁶ selle/ml, en die opruimingsberekeninge en die verwerking van die resultate van die microsomale metaboliese stabiliteitstoets in die lewer is konsekwent.

V ： Wat is die belangrikste bestanddele in u PBS -buffer? Bevat dit KCL en NaCl?

A ： Die belangrikste komponente van ons PBS -buffer is k₂HPO₄ en kh₂PO₄, en is vry van KCL en NaCl.

V ： Wat is die doel van fosfaatbuffers? Waarom het u fosfaat nodig?

'N ： Fosfaatbuffers word gekies vir die doel om die fisiologiese omgewing na te boots, en fosfaat is een van die belangrikste bufferspare om die vloeistofomgewing van die liggaam te handhaaf.

V ： Wat is die gewone instelling vir ensiem - geïnduseerde reseptorkonsentrasie? Is daar 'n oplossing as die oplosbaarheid van die stelsel wat getoets moet word, swak is?

'N ： Die ensieminduksie -toets moet met 3 verskillende konsentrasies opgestel word, die konsentrasievlak moet die verwagte effektiewe konsentrasie van bloedmedisyne by mense dek, en die hoogste konsentrasie word gekies om ten minste een orde van groottes hoër te wees as die gemiddelde effektiewe konsentrasie van bloedmedisyne by mense. As die oplosbaarheid in die waterfase swak is, kan 'n organiese oplosmiddel as oplosmiddel gekies word, bv. DMSO, maar die hoeveelheid organiese oplosmiddel wat by die stelsel gevoeg word, moet beheer word.

V ： In metaboliese stabiliteitstudies is dit nodig om twee toetsstelsels, lewermikrosome en primêre hepatosiete te gebruik om te toets?

'N ： Hepatiese mikrosome is byna sferiese membraan -vesikel - soos strukture gevorm deur die self - samesmelting van gefragmenteerde endoplasmiese retikulum verkry tydens homogenisering en differensiële sentrifugasie van lewerweefsel, en bevat CYP450 -enzieme en sommige bifasiese enzymes, bv. UGT's, st. Primêre hepatosiete (PHC's) is hepatosiete gekweek onmiddellik na direkte isolasie van dierlike lewers, wat basies die metaboliese funksies van die lewer behou, veral om die ensiemvlakke beter te behou wat ooreenstem met dié in vivo. In die metaboliese stabiliteitstudie is dit nie nodig om die koste te oorweeg nie, en twee toetsstelsels kan terselfdertyd vir die toets gekies word; of die toepaslike toetsstelsel kan gekies word volgens die metaboliese eienskappe van die verbinding, en die beginsel is dat die stelsel 'n hoë metaboliese tempo het. Oor die algemeen is lewermikrosome die beste keuse wanneer die saamgestelde molekules meer water is - oplosbaar en een - fase -metabolisme is die belangrikste metaboliese weg (veral via CYP); As twee - -fase -metabolisme die hoofweg is, is hidrolise die belangrikste metaboliese weg, nie - spesifieke proteïenbinding in die lewermikrosome is baie hoog, en metabolisme is nie duidelik in die lewermikrosome nie, maar die toets kan met behulp van primêre hepatosiete uitgevoer word.

V ： Is die konsentrasie van mikrosome wat in die metaboliese stabiliteitstoets ondersoek is? Wat is die effek van te hoog of te laag?

A ： In die metaboliese stabiliteitstoets sal die proteïenkonsentrasie ook die metaboliese tempo beïnvloed, kies gewoonlik die mikrosomale proteïenkonsentrasie van 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml, die spesifieke keuse van hoeveel proteïenkonsentrasie gekies moet word volgens die eie metaboliese eienskappe van die verbinding. 'N Te hoë konsentrasie mikrosomale proteïen sal lei tot nie -spesifieke binding van die geneesmiddel aan die mikrosomale proteïen; Alhoewel 'n te lae konsentrasie mikrosomale proteïen tot onbeduidende metabolisme van die geneesmiddel kan lei.