الطحال في الأبحاث المناعية: عبر الأنواع والعزلة ، والتجميد ، خطوات ذوبان الجليد

الكلمات الرئيسية:الطحال (SPLs) ؛ cynomolgus monkey cymplytes. طحال القرد ريسوس. خلايا الطحال الكلاب. خلايا الطحال الكلاب. خلايا الفئران خلايا الطحال الماوس. الطحال الفئران. طحال الأرنب. عزل الطحال. تجميد الطحال. ذوبان الطحال

منتج iphase

الطحال (SPLS)هل السكان غير المتجانسين من الخلايا المناعية معزولة عن الطحال ، وهو عضو حيوي يشارك في تصفية الدم ، والاستجابات المناعية المتزايدة ، والحفاظ على التوازن. تشمل هذه الخلايا الخلايا اللمفاوية (الخلايا التائية ، الخلايا B) ، البلاعم ، الخلايا الشجيرية ، وخلايا القاتل الطبيعية (NK) ، وكلها تلعب أدوارًا حاسمة في المناعة التكيفية والفطرية. تستخدم الخلايا الطحال على نطاق واسع في البحث قبل السريرية والترجمة لدراسة الوظائف المناعية ، وتطور اللقاحات ، وأمراض المناعة الذاتية ، والعلاج المناعي للسرطان.

دور وتكوين الطحال (SPLs)

داخل الطحال ، توجد خلايا الطحال في مناطق مميزة: اللب الأحمر ، الذي يقوم بتصفية الدم ويعيد تدوير خلايا الدم الحمراء القديمة ، واللب الأبيض ، حيث يتم البدء في الاستجابات المناعية. يتم تنظيم اللب الأبيض في مناطق الخلايا التائية وبصيلات الخلايا B ، مما يسهل التفاعلات بين المستضد - تقديم الخلايا والخلايا اللمفاوية. هذه الهندسة المعمارية الفريدة تجعل خلايا الطحال (SPLs) أداة قوية في فحوصات المناعة مثل Elispot وقياس التدفق الخلوي وتفاعلات الخلايا اللمفاوية المختلطة.

الأنواع - خلايا الطحال المحددة (SPLs)

-cynomolgus monkey الطحال:يتم استخدام خلايا الطحال القرد Cynomolgus في الأبحاث قبل السريرية لأنها تحاكي بشكل أوثق الاستجابات المناعية البشرية ، مما يجعل الخلايا الطحال Cynomolgus Monkey مثالية للدراسات الترجمة.

-طحال القرد ريسوس:تُقيّم خلايا الطحال القرد ريسوس بالمثل لأوجه تشابهها المناعية الوثيقة مع البشر. تساعد الدراسات التي تستخدم طحال القرد Rhesus على سد الفجوة بين النماذج الحيوانية والتطبيقات السريرية.

-خلايا الطحال الكلاب / طحيل الكلاب:في الأبحاث البيطرية ، يتم استخدام خلايا الطحال الكلاب (أو خلايا الطحال الكلاب) لدراسة اضطرابات المناعة في الأنياب ورسم مقارنات مع الاستجابات المناعية البشرية.

-طحال الأرنب: تعتبر خلايا الطحال الأرنب مهمة في الدراسات حول إنتاج الأجسام المضادة وتطوير اللقاح. تساعد خلايا الطحال الأرنب في الكشف عن التفاصيل التي قد تختلف عن خلايا الطحال الماوس أو خلايا الفئران.

-خلايا الطحال / الطحال الفئران:تعتبر خلايا الطحال الماوس واحدة من أكثر الطحال التي تمت دراستها (SPLs) في علم المناعة. بروتوكولات الطحال العزلة من الفئران راسخة ، وتستخدم كل من خلايا الطحال الفئران وخلايا الفئران في التدفق الخلوي ، ELISPOT ، وغيرها من الفحوصات الوظيفية.

-خلايا الفئران:توفر خلايا الفئران نموذجًا تكميليًا لعلم السمية المناعية ودراسات اللقاحات. غالبًا ما تتم مقارنة خلايا الفئران مع خلايا الطحال الماوس لفهم الاختلافات بين الأنواع.

الطحال العزلة

الطحال العزلةهي عملية استخراج الخلايا المناعية من الطحال لاستخدامها في تطبيقات البحث المختلفة ، مثل التدفق الخلوي ، أو فحوصات إنتاج السيتوكين ، أو تفاعلات الخلايا اللمفاوية المختلطة.

تمت إزالة الطحال في ظل ظروف معقمة ، والأرض في محلول العزلة ونقلها إلى أنبوب معقم يحتوي على متوسط ​​RPMI 1640. تم جمع طبقة الكريات البيض بعناية بعد الطرد المركزي. تم غسل الخلايا مع RPMI 1640 المتوسطة ، والطرد المركزي والتجاهل طاف. تم تكرار خطوة الغسيل هذه 1 - 2 مرة قبل استخدام الخلايا المعزولة لمزيد من التجارب.

تجميد الطحال

تجميد الطحالهي خطوة حاسمة للحفاظ على الخلايا للاستخدام في المستقبل. يسمح CryopReservation للباحثين بتخزين خلايا الطحال لفترات ممتدة دون المساس بليامتها أو وظائفهم.

يتم التخلص من طاف تعليق الخلية بالطرد المركزي من خطوة العزلة وتم تخفيف تركيز الخلية في وسط التجميد. أضف قسامة إلى كل أنبوب تجميد ونقلها إلى حاوية متجمدة ، مما يضمن أن تظل الخلايا في حالة تعليق. تجميد حاويات التجميد بسرعة في فريزر 80 درجة مئوية. نقل إلى - 150 درجة مئوية حاوية الفريزر (أو خزان النيتروجين السائل) لفترة طويلة - تخزين مصطلح.

ذوبان الطحال

ذوبان الطحاليجب أن يتم بعناية لضمان عالية من صلاحية الخلية ووظائفها بعد الحفاظ على التبريد. عادة ما تكون عملية ذوبان الجليد سريعًا لتقليل التأثيرات الضارة لـ DMSO وتكوين البلورة الجليدية.

يتم نقل الأنابيب بالتبريد إلى حمام مائي 37 درجة مئوية وذوبانه حتى تبقى بلورات الجليد الجميلة فقط في الأنابيب. يُضاف 0.5 - 1 مل من استزراع الخلية المتوسطة إلى الأنبوب المجمد ، وقيامه ونقل التعليق إلى أنبوب 15 مل مليء بثقافة الخلية. الطرد المركزي ، قم بإزالة طاف واضغط على الأنبوب لتخفيف ترتيب الخلية. أضف 1 مل من وسط ثقافة الخلية ، وضرب و recuspend مع ماصة ، أضف متوسطًا إلى حجم 15 مل. الطرد المركزي ، de - supernatize ، أضف 1 مل من وسط ثقافة الخلية ، مضيفا وسيط وفقا لتركيز الخلايا المتوقعة. ضع الخلايا في حاضنة ثاني أكسيد الكربون واحتضانها لمدة 1 ساعة مع فجوة طفيفة في الغطاء. في نهاية الحضانة ، resuspend واترك لمدة دقيقة واحدة للسماح لحطام الخلايا المجمعة للترسب. تم نقل تعليق الخلية بدون هطول الأمطار بعناية إلى أنبوب 15 مل جديد. تم حساب الخلايا لتحديد نشاط الخلية.

خاتمة

تعتبر الخلايا الطحال ، مع تكوينها المتنوع ودورها المحوري في الاستجابات المناعية ، أدوات لا تقدر بثمن في الأبحاث المناعية. سواء كانت مشتقة من القوارض أو الرئيسيات أو غيرها من الأنواع مثل الأرانب والكلاب ، تسهل الطحال الدراسات النقدية في الوظيفة المناعية ، وآليات المرض ، وتطور اللقاح ، والعلاج المناعي للسرطان. تعتبر عمليات العزلة والتجميد والذوبان ضرورية للحفاظ على سلامتها وقابليتها للبقاء ، مما يتيح للباحثين استكشاف الديناميات الخلوية عبر نماذج مختلفة. مع تعميق فهمنا لعلم المناعة ، سيظل استخدام الخلايا الطحال مفيدًا في سد الفجوة بين الدراسات قبل السريرية والتطبيقات السريرية ، مما يضمن التقدم في كل من الطب البشري والبيطري.