Comet assay üçün slaydları necə hazırlamaq olar
Bucomet təhliliAyrıca, tək - hüceyrə gel elektroforezi, fərdi hüceyrələrdə DNT zədələnməsini kəmiyyətləşdirmək üçün həssas və çox yönlü bir texnikadır. Yüksək (keyfiyyəti hazırlamaqComet asse slaydS, ASSAY nəticələrinin etibarlılığını və reprodukless olduğunu müəyyən edən kritik bir addımdır. Bu məqalə, kometa təhvili üçün slaydların hazırlanması, sahədəki mütəxəssislərdən fikirlərin inteqrasiyası üçün slaydlar hazırlamaq məqsədi daşıyır. Mümkün olan ən yaxşı nəticələr əldə etməyinizi təmin edərək, hüceyrə seçimindən məlumatların şərhinə qədər hər bir həlledici addımı ödəyəcəyik.Kometa təhlili və onun əhəmiyyəti üçün giriş
● Comet Assay-a baxış
1980-ci illərin sonlarında hazırlanmış Comet ASSAY, fərdi eukaryotik hüceyrələrdə DNT-dən strand fasilələrini aşkar etmək üçün güclü bir vasitədir. Genotoksiklik testi, molekulyar epidemiologiya və ekoloji biomonitorinq kimi sahələrdə geniş istifadə olunur. Comet ASSAY-ın prinsipi Agarose-də hüceyrələri yerləşdirir, membranlar və zülalları silmək, sonra DNT-ni elektroforezə tabe etmək üçün liza edir. Yaranan görüntü, bir kometa bənzəyən, DNT zərərinin miqdarını artırmağa imkan verir.● DNT-nin zərər aşkarlanması üçün tətbiqlər
Comet Latays, ətraf mühitin toksinləri, radiasiya və əczaçılıq səbəbləri nəticəsində DNT zərərini aşkar etmək üçün xüsusilə dəyərlidir. DNT-nin təmir mexanizmlərinin effektivliyini müxtəlif hüceyrə növlərində effektivliyinin qiymətləndirilməsində də vacib rol oynayırlar. Tədqiqatçılar, Comet Layterləri DNT-nin zədələnməsi ilə əlaqəli xərçəng, yaşlanma və digər xəstəlikləri öyrənmək üçün istifadə edirlər.● Genotoksiklik testində əhəmiyyət
Comet Layterlərinin tənzimləmə və tədqiqat mənası azaldıla bilməz. Potensial genotoksik birləşmələrin müəyyənləşdirilməsi üçün zəruri bir ilkin seçim vasitəsi kimi xidmət edirlər. Bu anketlərin nəticələri qərardan təsir göstərə bilər - Narkotiklərin inkişafı və ətraf mühitin təhlükəsizlik qiymətləndirmələrində proseslər etməkComet Assay üçün uyğun hüceyrələrin seçilməsi
● İstifadə olunan hüceyrələrin növləri
Hüceyrələrin seçimi kometa təhlilinin nəticəsinə əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərə bilər. Tez-tez istifadə olunan hüceyrələrə limfositlər, buckal hüceyrələri və müxtəlif mədəniyyətli hüceyrə xətləri daxildir. Tədqiqatçılar tez-tez tədqiqat məqsədlərinə və nümunələrin əldə edilməsinin asanlığına əsasən hüceyrə növlərini seçirlər.● Hüceyrə seçimi üçün mülahizələr
Hüceyrələri seçərkən, hüceyrə mövcudluğu, DNT zədəsinə həssaslıq və tədqiqat sualına uyğunluq kimi amilləri nəzərdən keçirin. Məsələn, lenfositlər asanlıqla qandan alınır və genotoksik agentlərə həssasdırlar, bir çox tədqiqat üçün əla seçim etməklə həssasdırlar.● ASSAY nəticələrinə təsir
Hüceyrələrin mənşəyi və vəziyyəti DNT zərərinin əsas səviyyəsinə və hüceyrənin müalicələrə reaksiyasına təsir göstərə bilər. Buna görə, ardıcıl hüceyrə seçimi və idarəetmə protokolları kometa təhlillərində etibarlı və çoxalmaya səbəb olmaq üçün çox vacibdir.Agarose gellərinin hazırlanması
● istifadə üçün agarose növləri
Sağ Aqarozu seçmək, Comet ASSay'ın bütövlüyü üçün çox vacibdir. Aşağı ərimə nöqtəsi, sürətlə bərkidin və emal zamanı DNT zərərini minimuma endirdikləri üçün ağaroza üstünlük verilir. Yüksək - Təmin edilmiş kometa assay slayd tədarükçisindən və ya kometa assaz slayd istehsalçısı kimi nüfuzlu tədarükçülərdən olan keyfiyyətli agarose tövsiyə olunur.● Agarose konsentrasiyası və hazırlıq addımları
Tipik olaraq, 1% aşağı ərimə nöqtəsi agarose konsentrasiyası istifadə olunur. Agarose uyğun bir tamponda həll edin, tamamilə əridənə qədər qızdırın və sonra hüceyrə yerləşdirilməsi üçün təhlükəsiz olan bir temperaturu sərinləyin. Agarose, analizdə əsərlərin qarşısını almaq üçün ağaronların baloncuklardan və zibildən azad olmasını təmin edin.● Optimal gel keyfiyyətinin təmin edilməsi
Agarose jelinin keyfiyyəti ASSayın həssaslığına və reprodukless təsir edə bilər. Müxtəlif slaydlar arasında ardıcıl xüsusiyyətləri olan homojen bir jel istehsal etmək üçün düzgün işləmə və hazırlıq üsulları vacibdir. Bu, kometlərin formalaşması və vizuallaşdırılmasının vahid olmasını təmin edir.Agarose-də hüceyrələrin dayandırılması və yerləşdirilməsi hüceyrələri
● Hüceyrə dayandırılması hazırlamaq
Tək - hüceyrə asqısı əldə etməklə başlayın. Mədəni hüceyrələr üçün bu tripsinizləşməni əhatə edir, izlənilən zərərsizləşmə və yuyulur. Lenfositlər, mərkəzdənqaçma və uyğun bir tamponda reanimasiya kimi ilkin hüceyrələr üçün zəruridir. Təxminən 1 x 10 ^ 5 hüceyrənin / ml bir hüceyrə konsentrasiyasını təmin etmək üçün bir hemositometrdən istifadə edin.● Aqaroza aşağı ərimə nöqtəsindəki hüceyrələri yerləşdirin
Hüceyrə aspansiyasını əvvəlcədən əkilmiş aşağı ərimə nöqtəsi ilə qarışdırın, hüceyrələrin vahid paylanmasını təmin edən bir nisbətdə agarose ilə qarışdırın. Qarışığı tez bir zamanda PIPETTURE PREE PREE - Comet Assay Slayd Fabriki və ya etibarlı bir təchizatçıdan əldə edilə bilən örtülmüş kometa assay slaydları. Agarose-ni bərabər şəkildə yaymaq və hava baloncuklarının qarşısını almaq üçün bir örtükdən istifadə edin.● Slaydlara hüceyrələri yaymaq
Agarose yayıldıqdan sonra slaydların soyuq bir səthdə və ya soyuducu sahədə sərin və bərkitilməsinə icazə verin. Agarose'nin analiz zamanı kometlərin vizuallaşdırılmasına təsir göstərə biləcək agarose'nin qeyri-bərabər olmasının qarşısını almaq üçün bu addım effektiv şəkildə edilməlidir.Slaydlarda hüceyrələrin lizi
● Liz Həll tərkibi
Lizis məhlulu, adətən, Nacl, Edta və Triton x kimi duzların və yuyucu vasitələrin yüksək konsentrasiyasını, DNT-ni bütövlükdə tərk edərkən membranları və zülalları və zülalları çıxarın.● liz proseduru və şərtləri
Lizis həllindəki slaydları batırın və ən azı 1 saat ərzində 4 ° C-də inkubasiya edin, baxmayaraq ki, bir gecədə inkubasiya tez-tez üstünlük verilir. Buxarlanma və çirklənmə qarşısını almaq üçün Lizis çəninin örtülməsini təmin edin. Lizmin şərtləri, DNT-ni alçaltmadan hüceyrə tərkib hissələrini çıxarmaq üçün vacibdir.● Tam hüceyrə lizisinin əhəmiyyəti
Natamam lizis, kometanın formalaşması və etibarsız məlumatlarla nəticələnə bilər. Buna görə, liztek protokolunu diqqətlə izləmək vacibdir, həllin slaydın bütün hissələrini və inkubasiya vaxtlarının tam hüceyrə pozulması üçün kifayətdir.ALKALINE UNGINGING və Elektroforez şərtləri
● qələvi həllini hazırlamaq
Qələvi həlli, tez-tez naon və edta qarışığı, DNT-ni açmaq üçün istifadə olunur. Onun hazırlığı düzgün pH və taxtanı təmin etməklə diqqətlə aparılmalıdır. Effektivliyini qorumaq üçün növbədə təzə hazırlayın.● qələvi istilməyən əhəmiyyəti və vaxtı
Alkalin həllində, adətən 20 - 40 dəqiqə ərzində, DNT-nin açılmasına icazə vermək üçün 20 - 40 dəqiqə ərzində sürüşdürün. Bu addım tək başını tapmaq üçün vacibdir - Strand fasilələri və qələvi - labile saytları. Xüsusi protokol və hüceyrə növünüzə əsaslanaraq, boş vaxtınızı optimallaşdırın.● Elektroforez quraşdırma və parametrlər
Elektroforez tankını soyuq qələvi elektroforez buferi ilə qurun. Slaydları tankdakı yerləşdirin, tam sualtıdır. 20 - 30 dəqiqə ərzində ardıcıl bir gərginlik (ümumiyyətlə 25 v) 30 dəqiqə tətbiq edin. Elektroforez şərtləri, o cümlədən gərginlik və vaxt, DNT köçünün ən yaxşı həllinə nail olmaq üçün optimallaşdırılmalıdır.Neytrallaşma və boyanma prosesi
● Zərərsizləşdirmə buferinin hazırlanması və istifadəsi
Elektroforezdən sonra, reaksiyanı dayandırmaq və DNT-ni sabitləşdirmək üçün slaydları zərərsizləşdirin. Ümumi neytrallaşdırma tamponu 7.5 pH-də bir pH-də Tris bazası ehtiva edir. Alkalin həllinin bütün izlərini aradan qaldırmaq üçün bu tampondakı slaydları bir neçə dəfə yumşaq bir şəkildə yuyun.● boyanma üsulları
Fluoresan DNT ilə zərərsizləşdirilmiş slaydları ləkələyin. ETHIDIUM bromide, klassik isə mutagen xüsusiyyətlərinə görə diqqətli işləməyi tələb edir. Sybr Green yüksək həssaslıqla daha etibarlı bir alternativ təklif edir. Qaranlıqda uyğun bir müddət (adətən 15 - 30 dəqiqə) üçün ləkə həllindəki slaydları inkubasiya edin.● DNT kometlərinin vizuallaşdırılması
Ləkənin ardından artıq ləkə çıxarmaq üçün slaydları yumşaq bir şəkildə yuyun. Fluorescucence mikroskopu altında slaydları araşdırın. Ləkənin keyfiyyəti və mikroskopun qətnaməsi kometlərin aydın görüntüləri əldə etmək üçün çox vacibdir.Mikroskopiya və görüntü təhlili
● Doğru mikroskop seçmək
Vizual DNT-nin vizuallaşdırılması üçün uyğun bir filtr dəsti ilə təchiz olunmuş bir flüoresan mikroskop lazımdır. Yüksək qətnamə və kometlərin ətraflı şəkillərini ələ keçirə bilən yüksək qətnamə və kamera sistemi olan bir mikroskop seçin.● Yüksək (keyfiyyətli şəkillər çəkmək
Statistik əhəmiyyətini təmin etmək üçün sürüşmə başına ən azı 50 kometa şəkillərini çəkin. Artefaktların qarşısını almaq üçün hətta işıqlandırma və fokuslanın. Mikroskop və kamera parametrlərinin düzgün kalibrlənməsi görüntü keyfiyyətini çox artıra bilər.● Comet analizi üçün proqram
Kometa və CASP kimi kometa təhlili üçün bir neçə proqram proqramı mövcuddur. Bu proqramlar, DNT-nin zədələnməsini tənqid edən quyruq uzunluğu, quyruq intensivliyi və quyruq anı kimi parametrləri ölçür.Ümumi məsələlərin aradan qaldırılması
● Ümumi problemlər
Comet ASSAYS-dakı ümumi mövzularda yüksək fal flüoresan, aşağı kometin meydana gəlməsi və slaydlar arasındakı uyğun olmayan nəticələr daxildir. Bu problemlər müxtəlif mənbələrdən, o cümlədən zəif hüceyrə işləməsi, suboptimal gel hazırlığı və yanlış lizis və ya elektroforez şərtləri daxil olmaqla müxtəlif mənbələrdən qaynaqlanır.● Solutions və profilaktik tədbirlər
Yüksək floreseşleni azaltmaq üçün bütün reagentlər və gellərin çirkləndiricilərdən azad olmasını təmin edin. Aşağı kometanın formalaşması üçün, hüceyrə canlılığının yüksək olduğunu və lizis şərtlərinin optimal olduğunu yoxlayın. Ardıcıl slayd hazırlığı və hərtərəfli protokol aktuallığı əsas profilaktik tədbirlərdir.● Reproduksiya və dəqiqliyi təmin etmək
Comet Layterlərdə reprodukless əldə etmək, sərt protokol standartlaşdırma və hər addımın müntəzəm təsdiqlənməsi tələb edir. Mütəmadi olaraq avadanlıqları kalibr edin, yüksək qiymətləndirmə reagentlərindən istifadə edin və dəqiqliyi təmin etmək üçün bütün eksperimental şəraitin ətraflı qeydlərini qorumaq.Məlumat təfsiri və hesabat nəticələri
● Comet quyruq parametrlərini təhlil etmək
DNT-nin miqdarını kəmiyyətləşdirmək üçün əsas parametrlər DNT miqrasiya dərəcəsini və quyruq intensivliyini əks etdirən quyruq uzunluğu və quyruqun miqdarını bildirən quyruq intensivliyini əhatə edir. Zeytun quyruğu anı, kompozit ölçmə, eyni zamanda çox istifadə olunur.● Məlumat hesabatında statistik mülahizələr
Dəqiq statistik analiz məlumat təfsiri üçün vacibdir. Müxtəlif nümunə qrupları arasındakı DNT zərər səviyyələrini müqayisə etmək üçün müvafiq statistik testlərdən istifadə edin. Birdən çox slayd və təcrübədən məlumatların dəyişkənliyin hesablanması üçün haşiyələnməsinin təmin olunmasını təmin edin.● Tapıntıları təqdim etmək və şərh etmək
Açar tapıntıları göstərmək üçün qrafiklər və masalardan istifadə edərək nəticələrinizi dəqiq və qısa bir şəkildə təqdim edin. Müşahidə olunan DNT zərər səviyyələrinin və təhsil altında bioloji sistemin potensial təsirinin nəticələrini müzakirə edin.Nəticə: Yüksək (keyfiyyətli kometa assaz slaydları
Yüksək - Keyfiyyətli Comet ASSAY slaydları hüceyrə seçiminin, agarose gel hazırlığı, lizis şəraiti, elektroforez, boyanma və görüntü analizinin diqqətlə nəzərdən keçirilməsini əhatə edir. Etibarlı və reproduktiv nəticələrin təmin edilməsi üçün hər bir addım diqqətlə optimallaşdırılmış və standartlaşdırılmalıdır. Nüfuzlu Comet ASSAY Slayd Təchizatçıları və İstehsalçıları ilə əməkdaşlıq edənlər, yüksək səviyyəli material və texniki dəstəyi təmin etməklə ASSayınızın keyfiyyətini artıra bilərlər.● haqqındaİbarBioskans
Baş qərargah, Pensilvaniya, Iphase Bioscens, "ixtisaslaşdırılmış, roman və yenilikçi" yüksəkdir Elmi araşdırmalara geniş bilik və ehtirasdan istifadə edərək, elmi komandamızın 50-dən çox təcrübəli mütəxəssisinin elmi komandası dünyanın elm adamlarına keyfiyyətli innovativ bioloji reaksiyaların tədqiqatçılarına tədqiqatçılara tədqiqatçılara kömək etmək üçün tədqiqatçılara kömək etmək və tədqiqatçılara kömək etmək niyyətindədir. "Yenilikçi reagentlər, gələcəyi araşdırmaq", IPhase-nin Birləşmiş Ştatlarının, Avropanın və Şərqi Asiya ölkələrində birdən çox Ar-Ge, anbarlar, anbarlar və paylama tərəfdaşları olan Iphase-nin "İnnovativ reagativləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri, satış mərkəzləri və paylama tərəfdaşları.Time vaxt: 2024 - 08 - 28 14:05:21