S: Metabolik sabitlik üçün mikrosom və hepatositləri necə seçməliyəm? Tələbi yerinə yetirmək üçün onlardan yalnız birini seçə bilərəmmi?
A: Metabolik sabitlik araşdırmasında, qaraciyər mikrosomları və ya hepatositlərin seçimi əsasən, yüksək metabolik nisbətinin seçildiyi birləşmələrin metabolik xüsusiyyətlərindən asılıdır. Ümumiyyətlə, qaraciyər mikrosomları üstünlük verilir, xüsusən də mürəkkəb molekullar daha çox su olduqda - həll və biri - Faza mübadiləsi əsas metabolik yol (xüsusən CYP vasitəsilə). Hepatositlər iki sübut olduqda təcrübələr üçün istifadə edilə bilər. Adətən, bir metabolik sistem ehtiyacları ödəmək üçün seçilə bilər; Bütün cəhətlərindəki şərtlər icazə verərsə, eyni zamanda hər iki sistemi seçmək mütləqdir.
S: Niyə ferment induksiya təhlili üçün ilkin hepatositlərdən istifadə etmək lazımdır?
A: CYP fermenti - Təsdiq edilən ASSAY "transkripsiya", "transkripsiyadan", "Tərcümə", aktiv CYP fermenti proteinini almaq üçün "Protein'in Tərcümə Dəyişdirməsinin" dən "Tərcümə Dəyişdirməsindən" getməlidir. Buna görə də test sistemi qaraciyər mikrosomları və ya qaraciyər S9 deyil, qaraciyər hüceyrələri olmalıdır.
S: Niyə ferment induksiya təhlili üçün üç donor insanın ilkin hepatositini seçməliyəm?
A: Narkotik qarşılıqlı əlaqələri üçün təlimatlara girişin verilməsinə görə, ən azı üç donor istifadə edilməlidir və hər bir donorun induksiya nəticəsi ayrıca qiymətləndirilməlidir. Statistik cəhətdən əhəmiyyətli nəticələr verməklə yanaşı, təcrübə üçün üç donorun seçimi də İnter - fərdi dəyişikliyin qiymətləndirilməsi üçün daha vacibdir. Ən azı bir donorun nəticəsi əvvəlcədən müəyyən edilmiş bir həddi aşarsa, dərman namizədinin yaranan və təqib edilə bilər - qiymətləndirmə tələb olunur.
S: Niyə yalnız UGT ferment induksiyasında deyil, CYP ferment induksiyasına yönəldiniz?
C: Cypaz induksiyasına diqqət yetirilməsinin səbəbi, tipin induksiyasının mexanizmi daha aydın şəkildə öyrənilməsinin budur. Başqa sözlə, Ugtase induksiyasının öyrənilməsini tələb etməməyin səbəbi mexanizmin hələ də aydın deyil; Ancaq bu, çirklənmənin səbəb olmayacağı demək deyil. Təlimatlar, həmçinin nəqliyyatçıların və faza metabolizmi fermentlərinin internat və inhibitorları üçün standart bir təsnifat sisteminin olmadığını bildirir.
S: Canlandırıcıdan sonra ilkin hepatositlər nə qədər yaşaya bilər və reanimasiya edildikdən sonra hepatositlər nə qədərdir?
A: pasterizə edilmiş ilkin hepatositlər ümumiyyətlə ferment induksiya təhqili üçün istifadə olunur. Hüceyrə bərpa edildikdən sonra, hüceyrələr, orta səviyyəli, uyğun konsentrasiyaya uyğunlaşdırıldı və kollagendə mədəniyyətli olanlar; örtülmüş plitələr; Sonra hüceyrələr 4 ~ 6 saat ərzində pasterizə edilə bilər. Hüceyrələr divara yapışdırıldıqdan sonra, təmir mühiti hüceyrə vəziyyətinin maksimal bərpa olunmasını təmin etmək üçün 18 saat 18 saat dəyişdirilir və saxlanılır. Növbəti, metabolik fəaliyyət və MRNA induksiya səviyyəsini aşkar etmək üçün növbəti, ferment induksiya təhlili edilə bilər. Bütün dövrün perspektivindən hepatositlər divar riayət edildikdən sonra 6 ~ 7 gün ərzində saxlanıla bilər. Vaxt keçdikcə hüceyrə divarının riayət vəziyyəti pisləşir və hüceyrələr ayrılacaq və dayandırılacaqdır.
Ləğv hepatositlər mədəniyyətli deyilsə, 4 ~ 6 saat ərzində yaxşı vəziyyətdə saxlaya biləcəyini təsdiqlədik. Daha uzun müddət yoxlama aparmamışıq.
S: Hepatositlər hər iki asma və yapışqan hüceyrələrdən istifadə edilə bilər, fərqli mədəniyyət mediasından asılı olaraq istifadə edilə bilərmi?
C: Möhkəm toxumalardan və orqanlardan olan hüceyrələrin əksəriyyəti divarlıdır, lakin initro, mətbəxdə olan bütün hüceyrələr divardıq. Hüceyrələrin divara ehtiyacı olub-olmaması və ya hüceyrələrin vəziyyətindən asılı olmayaraq; Eyni zamanda, divar - Ləğv edən hüceyrələrə xüsusi bir mədəniyyət orta və bəzi xüsusi pro - hüceyrə yapışması, laminin, laminek, laminek, fibronektin, serum genişləndirmə amili, serum genişləndirmə faktoru) ehtiyac duyur. Sonda, yapışqan hüceyrələr asma hüceyrələri kimi istifadə edilə bilər, ancaq asma hüceyrələri yapışqan istifadə üçün mütləq mövcud deyildir.
S: Yapışqan divar ayələrindən asma hepatositlərindən istifadəin üstünlükləri / mənfi cəhətləri nələrdir? Qərar meyarları nələrdir?
A: Hepatositlər təcrid olunduqdan sonra onlar asma və ya yapışan divarda mədəniyyətli ola bilərlər. Sitsenci p450 fermentinin dayandırılmasından mədən edilmiş əsas hepatositlərin ən uyğun olmasıdır. Buna görə, asma hepatositləri ümumiyyətlə metabolik sabitlik və ya metabolit profilləmə tədqiqi üçün istifadə olunur. Adıyent divarda mədəniyyətli baş verən ilkin hepatositlər, normal hepatositlərin bioloji xüsusiyyətlərini və metabolik fəaliyyətini qorumaq üçün zərərdən bərpa etmək üçün kifayət qədər vaxta sahibdirlər. Deməli, ümumiyyətlə, onlara ferment induksiya tədqiqatları, dərman sitotoksiklik tədqiqatları, yavaş metabolizasiya edilmiş dərmanların və ya məhsulun nəticəsi tədqiqatlarının metabolik sabitliyi üçün istifadə olunur.
Hal-hazırda WebPage onlayn alış xidməti təqdim etmirik. Qeydiyyat və girişdən sonra alış-veriş səbətinə əlavə olunan məhsullar yalnız istinad üçündür. Məhsullarımızı almaq lazımdırsa, əlaqə məlumatlarınızı bizimlə əlaqə kanalı vasitəsilə tərk edin və xidmətlərimizi başa çatdırmaq üçün sizinlə əlaqə saxlayacağıq.
S: - Xüsusi Protein məcburi test nəticələrinə necə təsir edir?
Cavab: Nəzakətli namizəd deyiləm (Mikrosomal zülallara) qeyri-müəyyən olaraq bu nəticələr dəyişdirilmiş kinetik parametrləri ilə nəticələnir. Zülal konsentrasiyası artdıqca, KM dəyəri artdıqca, aşağı ehtimal olunan daxili rəsmiləşdirmə ilə nəticələnir. Ayrıca, mikrosomlarda zülallara namizəd namizədi bağlayan müxtəlif laboratoriyaların və fərqli sistemlərin nəticələrində böyük dəyişikliklərlə nəticələnə bilər.
S: Mən Mərhələ I və ya Faza II metabolik sabitlik dəsti 0,1 mq / ml - 1 mq / ml - 1 mq / ml - 1 mq / ml -
A: Əvvəlcə qaraciyər mikrosomlarını seyreltməyə ehtiyac yoxdur; Dəstdəki qaraciyər mikrosomlarının konsentrasiyası 20 mq / ml, test sistemindəki qaraciyər mikrosomlarının son konsentrasiyası 0,1 - 1 mq / ml, mütənasib olaraq əlavə edilə bilər.
S: İlkin hepatositlərin metabolik sabitliyinin testi üçün tövsiyə olunan hüceyrə sıxlığı nədir? Təmizləmə hesablanması qaraciyər mikrosomları ilə eynidir?
A: İlkin hepatosit metabolik sabitlik təhlili üçün tövsiyə olunan hüceyrə sıxlığı 0,5 ilə 2 × 106 Hüceyrələr / ml və rəsmiləşdirmə hesablamaları və qaraciyər mikrosomal metabolik sabitlik təhlili nəticələrinin işlənməsi ardıcıldır.
S: PBS tamponunuzdakı əsas maddələr nələrdir? KCL və NACL ehtiva edir?
A: PBS tamponumuzun əsas komponentləri k2Hpo4 və x2PO4və KCL və NACL-dən azaddırlar.
S: Fosfat tamponlarının məqsədi nədir? Niyə fosfata ehtiyacınız var?
C: Fosfat tamponları fizioloji mühiti təqlid etmək məqsədi ilə seçilir və fosfat, bədənin maye mühitini qorumaq üçün ən vacib tampon cütlərindən biridir.
S: ferment üçün adi bir parametrdir - Təsviri reseptor konsentrasiyası? Sistemin sınaqdan keçiriləcəyi həll prosesi zəifdirsə, hər hansı bir həll varmı?
A: Forme Induksiya ASSay 3 fərqli konsentrasiyanı qurmaq lazımdır, konsentrasiya səviyyəsi insanlarda gözlənilən effektiv qan dərman konsentrasiyasını əhatə etməlidir və ən yüksək konsentrasiyası insanlarda orta təsirli qan dərmanı konsentrasiyasından ən azı bir ölçüdə daha yüksək bir sifariş seçilməlidir. Sulu mərhələdəki həlletmə zəifdirsə, üzvi bir həlledici öz həlledicisi kimi seçilə bilər. DMSO, ancaq sistemə əlavə üzvi həlledicinin miqdarı idarə edilməlidir.
S: Metabolik sabitlik araşdırmalarında iki test sistemi, qaraciyər mikrosomları və ilkin hepatositlər, test üçün istifadə etmək lazımdır?
A: Hepatik mikrosomlar təxminən sferik membran vesikülüdür. İbtidai Hepatositlər (PHCS), hepatositlər, hepatositlər, əsasən qaraciyərin metabolik funksiyalarını, xüsusən də vivoda olanlara uyğun ferment səviyyəsini qoruyan daha yaxşı qoruyan hepatositlərdir. Metabolik sabitlik araşdırmasında, dəyəri nəzərə almağa ehtiyac yoxdur və eyni zamanda test üçün iki test sistemi seçilə bilər; Və ya müvafiq test sistemi birləşmənin metabolik xüsusiyyətlərinə görə seçilə bilər və prinsip hansı sistemin yüksək metabolik dərəcəsi seçildiyi. Ümumiyyətlə, qaraciyər mikrosomları, mürəkkəb molekulların daha çox su olduqda ən yaxşı seçimdir - İki - Faza mübadiləsi əsas yol, hidroliz əsas metabolik yoldur, əsas metabolik yoldur, qaraciyər mikrosomlarında xüsusi zülal bağlama çox yüksəkdir və metabolizm, qaraciyər mikrosomları aşkar edilmir, ilkin hepatositlərdən istifadə etməklə həyata keçirilə bilər.
S: Mikrosomların metabolik sabitlik testində araşdırıldığı konsentrasiyası? Çox yüksək və ya çox aşağı təsir nədir?
A: Metabolik sabitlik testində, protein konsentrasiyası metabolik nisbətinə də təsir edəcək, ümumiyyətlə, birləşmənin öz metabolik xüsusiyyətlərinə görə nə qədər protein konsentrasiyasının nə qədər konsentrasiyasının xüsusi seçimi, mikrosomal protein konsentrasiyasını, 0.1 mq / mq / ml konsentrasiyasını seçəcəkdir. Mikrosomal proteinin çox yüksək bir konsentrasiyası, dərmanın qeyri-müəyyən bağlamasına mikrosomal proteinə səbəb olacaq; Çox aşağı olan mikrosomal protein bir konsentrasiyası dərmanın əhəmiyyətsiz metabolizmasına səbəb ola bilər.