Пытанне: Як мне выбраць мікрасомы і гепатацыты для даследаванняў метабалічнай стабільнасці? Ці магу я выбраць толькі адзін з іх для выканання патрабаванняў?
A: У даследаванні метабалічнай устойлівасці выбар мікрасомы печані або гепатацыты ў асноўным залежыць ад метабалічных уласцівасцей злучэнняў, у якім абраны той, які выбіраецца з высокай хуткасцю метабалізму. Увогуле, мікрасомы печані аддаюць перавагу, асабліва калі складаныя малекулы больш вады - растваральная, а адзін - фазавы метабалізм - асноўны метабалічны шлях (асабліва праз CYP). Гепатацыты могуць быць выкарыстаны для эксперыментаў, калі ёсць доказы двух - фазавага метабалізму як асноўнага шляху, гідролізу як асноўнага метабалічнага шляху, высокага неспецыфічнага звязвання бялку ў мікрасомах печані, а метабалізм у мікрасомах печані не з'яўляецца відавочным. Звычайна для задавальнення патрэбаў можна выбраць адну метабалічную сістэму; Калі ўмовы ва ўсіх аспектах дазваляюць, безумоўна, лепш выбраць абедзве сістэмы адначасова.
Пытанне: Чаму неабходна выкарыстоўваць першасныя гепатацыты для аналізу індукцыі ферментаў?
A: фермент CYP - Індукаваны аналіз павінен перайсці ад "транскрыпцыі", "перакладу" да "публікацыі - трансляцыйнай мадыфікацыі бялку" для атрымання актыўнага бялку фермента CYP. Такім чынам, выпрабавальнай сістэмай павінна быць клеткі печані, а не мікрасомы печані або печань S9.
Пытанне: Навошта мне выбраць тры донара першасных гепатацытаў для аналізу індукцыі ферментаў?
A: Згодна з увядзеннем у кіруючыя прынцыпы па ўзаемадзеянні з наркотыкамі, павінны быць выкарыстаны як мінімум тры донары, і вынік індукцыі кожнага донара павінен быць ацэнены асобна. У дадатак да атрымання статыстычна значных вынікаў, выбар трох донараў для эксперыменту таксама больш важны для ацэнкі між - індывідуальнай змены. Калі вынік па меншай меры аднаго донара перавышае загадзя зададзены парог, кандыдат на наркотыкі можа быць выкліканым і прытрымлівацца ацэнкі.
Пытанне: Навошта засяроджвацца толькі на індукцыі фермента CYP, а не на індукцыі фермента UGT?
A: Прычына засяроджвання ўвагі на індукцыі CYPase заключаецца ў тым, што механізм індукцыі Cypase быў вывучаны больш выразна. Іншымі словамі, прычына не патрабуе вывучэння індукцыі Угтазы заключаецца ў тым, што механізм па -ранейшаму незразумелы; Аднак гэта не значыць, што Ugtase не будзе выкліканы. У кіруючых прынцыпах таксама гаворыцца, што не існуе стандартызаванай сістэмы класіфікацыі для індуктараў або інгібітараў транспарцёраў і ферментаў метабалізму II фазы.
Пытанне: Як доўга могуць выжыць першасныя гепатацыты пасля рэанімацыі і як доўга можна падтрымліваць гепатацыты без прыліпальнай культуры пасля рэанімацыі?
A: Пастэрызаваныя першасныя гепатацыты звычайна выкарыстоўваюцца для аналізаў індукцыі ферментаў. Пасля аднаўлення клетак клеткі падвешваюць у пласціне, якая распаўсюджваецца, адрэгулюецца на адпаведную канцэнтрацыю і культывуецца ў калагенах - пласціны з пакрыццём; Затым клеткі могуць быць пастэрызаваны на працягу 4 ~ 6 гадзін. Пасля таго, як клеткі прымацаваны да сцяны, асяроддзе падтрымання замяняецца і падтрымліваецца на працягу 18 гадзін, каб забяспечыць максімальную аднаўленне клеткавага стану. Далей можна правесці аналіз індукцыі ферментаў для выяўлення метабалічнай актыўнасці і ўзроўню індукцыі мРНК. З пункту гледжання ўсяго цыкла гепатацыты можна падтрымліваць на працягу 6 ~ 7 дзён пасля захавання сцен. З цягам часу стан захавання клеткавай сценкі пагаршаецца, і клеткі будуць адрывацца і прыпыняцца.
Калі адгезійныя гепатацыты не культываваны, мы пераканаліся, што іх можна падтрымліваць у добрым стане на працягу 4 ~ 6 гадзін. Мы яшчэ не правялі праверку на больш працяглы перыяд.
Пытанне: Гепатацыты могуць быць выкарыстаны як падвескі, так і адгезійныя клеткі ў залежнасці ад розных культурных асяроддзяў?
A: Большасць клетак з цвёрдых тканін і органаў агароджаныя, але не ўсе клеткі агароджваюцца пры культываванні ў - vitro. Ці з'яўляюцца клеткі сцены - прылягае ці не, залежыць ад стану саміх клетак; У той жа час сценка - Адгезійныя клеткі маюць патрэбу ў пэўнай культурнай асяроддзі і некаторых адгезійных рэчывах з клеткамі (напрыклад, rhamnogelinogen, ламініну, фібранектыну, фактару пашырэння сыроваткі), якія могуць удзельнічаць у працэсе мацавання клетак. У заключэнне, адгезійныя клеткі могуць быць выкарыстаны ў якасці падвесных клетак, але клеткі падвескі не абавязкова даступныя для адгезійнага выкарыстання.
Пытанне: Якія перавагі/недахопы выкарыстання гепатацытаў падвесных вершаў адгезійных сцен? Якія крытэрыі рашэння?
A: Пасля вылучэння гепатацытаў іх можна культывавацца ў завісі або ў адгезійнай сцяне. Актыўнасць фермента цытахрому Р450 з падвесных культурных першасных гепатацытаў найбольш адпавядае таму, што ў - vivo на працягу першых 4 ~ 6 гадзін, затым хутка памяншаецца з падаўжэннем часу. Такім чынам, гепатацыты завісі звычайна выкарыстоўваюцца для даследавання метабалічнай стабільнасці або метабалітавага прафілявання. Першасныя гепатацыты, якія культывуюцца ў адгезійнай сценцы, маюць дастатковы час, каб аднавіцца пасля пашкоджанняў для падтрымання біялагічных характарыстык і метабалічнай актыўнасці нармальных гепатацытаў. Такім чынам, яны, як правіла, выкарыстоўваюцца для індукцыйных даследаванняў ферментаў, даследаванняў на цытастатычнасць лекаў, метабалічнай стабільнасці павольных метабалізацыйных прэпаратаў або даследаванняў высновы прадукту.
У цяперашні час мы не прадастаўляем вэб -старонку ў Інтэрнэце. Прадукцыя, дададзеная ў кошык, пасля рэгістрацыі і ўваходу толькі для даведкі. Калі вам трэба купіць нашу прадукцыю, калі ласка, пакіньце сваю кантактную інфармацыю праз канал Contact US, і мы звяжамся з вамі своечасова, каб завяршыць нашы паслугі.
Пытанне: Як не - канкрэтны звязванне бялку ўплывае на вынікі выпрабаванняў?
A: Калі кандыдат на наркотыкі звязваецца не - канкрэтна з мікрасомальнымі вавёркамі, гэта прыводзіць да змененых кінетычных параметраў. Па меры павелічэння канцэнтрацыі бялку значэнне KM павялічваецца, што прыводзіць да нізкага меркаванага ўнутранага клірансу. Акрамя таго, звязванне кандыдата ў наркотыкі з вавёркамі ў мікрасомах можа прывесці да вялікіх варыяцый у выніках розных лабараторый і розных сістэм.
Пытанне: Рэкамендуемая канцэнтрацыя мікрасомальнага бялку печані ў інструкцыі па эксплуатацыі метабалічнай стабільнасці фазы I або фазы II складае 0,1 мг/мл - 1 мг/мл, гэта азначае, што пры выкарыстанні мікрасомы печані ўсё яшчэ неабходна развесці іх добра, перш чым дадаваць іх у сістэму?
A: Не трэба спачатку разбаўляць пячоначныя мікрасомы; Канцэнтрацыя мікрасомы печані ў камплекце складае 20 мг/мл, а канчатковая канцэнтрацыя мікрасомы печані ў выпрабавальнай сістэме складае 0,1 - 1 мг/мл, што можна дадаць прапарцыянальна.
Пытанне: Якая рэкамендаваная шчыльнасць клетак для тэставання метабалічнай устойлівасці першасных гепатацытаў? Разлік клірансу такі ж, як і для мікрасомы печані?
A: Рэкамендуемая шчыльнасць клетак для першаснага аналізу метабалічнай устойлівасці гепатацытаў складае 0,5 да 2 × 106 Клеткі/мл, а таксама разлікі афармлення і апрацоўка вынікаў аналізу пячоначнай мікрасомальнай метабалічнай устойлівасці адпавядаюць.
Пытанне: Якія асноўныя інгрэдыенты ў вашым буферы PBS? Ці ўтрымлівае ён KCl і NaCl?
A: Асноўнымі кампанентамі нашага буфера PBS з'яўляюцца K2HPO4 і кх2PO4, і не хапае KCL і NaCl.
Пытанне: Якая мэта фасфатных буфераў? Навошта вам фасфат?
A: фасфатныя буферы выбіраюцца для іх мэты імітацыі фізіялагічнага асяроддзя, а фасфат - адна з найважнейшых пары буфера для падтрымання вадкасці цела.
Пытанне: Якая звычайная ўстаноўка для фермента - індукаваная канцэнтрацыя рэцэптараў? Ці ёсць рашэнне, калі растваральнасць сістэмы для праверкі дрэнная?
A: Аналіз індукцыі ферментаў павінен быць усталяваны з 3 рознымі канцэнтрацыямі, узровень канцэнтрацыі павінен пакрыць чаканую эфектыўную канцэнтрацыю ў крыві ў чалавека, а самая высокая канцэнтрацыя выбіраецца як мінімум на адзін парадак вышэй, чым сярэдняя эфектыўная канцэнтрацыя ў крыві ў чалавека. Калі растваральнасць у воднай фазе дрэнная, у якасці растваральніка можна выбраць арганічны растваральнік, напрыклад, DMSO, але колькасць арганічнага растваральніка дадаецца ў сістэму.
Пытанне: У даследаваннях метабалічнай стабільнасці неабходна выкарыстоўваць дзве выпрабавальныя сістэмы, мікрасомы печані і першасныя гепатацыты для тэставання?
A: пячоначныя мікрасомы - гэта практычна сферычная мембранная везікула - падобныя структуры, якія ўтвараюцца самаадчуваннем - зліццё раздробленай эндаплазматычнай сеткі, атрыманай падчас гомагенізацыі і дыферэнцыяльнай цэнтрыфугацыі тканін печані, і ўтрымліваюць ферменты CYP450 і некаторыя біфазічныя ферменты, напрыклад, ugts. Першасныя гепатацыты (PHC) - гэта гепатацыты, культываваныя адразу пасля прамой ізаляцыі ад печані жывёл, якія ў асноўным падтрымліваюць метабалічныя функцыі печані, асабліва лепш захаваць узровень ферментаў, якія адпавядаюць тым, што ў натуральных умовах. У даследаванні метабалічнай стабільнасці не трэба ўлічваць выдаткі, і дзве тэставыя сістэмы могуць быць выбраны для тэсту адначасова; альбо адпаведная выпрабавальная сістэма можа быць выбрана ў адпаведнасці з метабалічнымі ўласцівасцямі злучэння, і прынцып заключаецца ў тым, што ў сістэме выбіраецца высокая хуткасць метабалізму. Увогуле, мікрасомы печані з'яўляюцца лепшым выбарам, калі складаныя малекулы больш вады - растваральныя, а адзін - фазавы метабалізм - асноўны метабалічны шлях (асабліва праз CYP); Калі два - фазавы метабалізм з'яўляецца асноўным шляхам, гідроліз з'яўляецца асноўным метабалічным шляхам, не - спецыфічнае звязванне бялку ў мікрасомах печані вельмі высокі, а метабалізм не з'яўляецца відавочным у мікрасомах печані, тэст можна праводзіць з выкарыстаннем першасных гепатацытаў.
Пытанне: Ці вывучаецца канцэнтрацыя мікрасомы ў тэсце на метабалічную ўстойлівасць? Які эфект занадта высокага ці занадта нізкага?
A: У тэсце на метабалічную ўстойлівасць канцэнтрацыя бялку таксама адаб'ецца на хуткасці метабалізму, як правіла, выбірае мікрасомальную канцэнтрацыю бялку 0,1 мг/мл ~ 1 мг/мл, спецыфічны выбар таго, колькі канцэнтрацыі бялку варта выбіраць у адпаведнасці з уласнымі метабалічнымі ўласцівасцямі злучэння. Занадта высокая канцэнтрацыя мікрасомальнага бялку прывядзе да не - спецыфічнага звязвання прэпарата з мікрасомальным бялком; Хоць занадта нізкая канцэнтрацыя мікрасомальнага бялку можа прывесці да нязначнага метабалізму прэпарата.