Въпрос: Как трябва да избера микрозоми и хепатоцити за изследвания на метаболитна стабилност? Мога ли да избера само един от тях, за да изпълня изискването?
О: В изследването на метаболитната стабилност изборът на чернодробни микрозоми или хепатоцити зависи главно от метаболитните свойства на съединенията, при което този с висока метаболитна скорост е избран. Като цяло, чернодробните микрозоми са предпочитани, особено когато молекулите на съединението са по -вода - Разтворими и един - фазов метаболизъм е основният метаболитен път (особено чрез CYP). Хепатоцитите могат да се използват за експерименти, когато има данни за два - фазов метаболизъм като основен път, хидролизата като основен метаболитен път, високото неспецифично свързване на протеина в чернодробните микрозоми и метаболизма в чернодробните микрозоми не е очевидно. Обикновено една метаболитна система може да бъде избрана, за да отговори на нуждите; Ако условията във всички аспекти позволяват, определено е най -добре да изберете и двете системи едновременно.
В: Защо е необходимо да се използват първични хепатоцити за анализ на индукция на ензими?
A: CYP ензим - Индуцираният анализ трябва да премине от "транскрипция", "транслация" до "пост - транслационна модификация на протеин", за да се получи активен CYP ензимен протеин. Следователно тестовата система трябва да бъде чернодробните клетки, а не чернодробните микрозоми или черния дроб S9.
Въпрос: Защо трябва да избера три донорни първични хепатоцити за човешки донори за анализ на индукция на ензима?
О: Според въвеждането на указанията за лекарствени взаимодействия трябва да се използват най -малко три донора и резултатът от индукцията на всеки донор трябва да бъде оценен отделно. В допълнение към постигането на статистически значими резултати, изборът на три донора за експеримента също е по -важен за оценка на Inter - Индивидуална промяна. Ако резултатът от поне един донор надвишава предварително определен праг, кандидатът за лекарство може да бъде индуцируем и е необходим последващ - UP оценка.
Въпрос: Защо да се фокусирате само върху индуцирането на CYP ензими, а не върху индуцирането на UGT ензими?
О: Причината за фокусиране върху индуцирането на ципаза е, че механизмът на индукция на ципаза е проучен по -ясно. С други думи, причината да не се изисква изследването на индуцирането на Ugtase е, че механизмът все още е неясен; Това обаче не означава, че UGTASE няма да бъде предизвикан. Насоките също така посочват, че няма стандартизирана система за класификация за индуктори или инхибитори на преносители и ензими на метаболизма на фаза II.
Въпрос: Колко дълго могат да оцелеят прилепнали първични хепатоцити след реанимация и колко дълго могат да се поддържат хепатоцитите без прилепнала култура след реанимация?
О: Пастьоризираните първични хепатоцити обикновено се използват за анализи на ензимно индукция. След възстановяване на клетките клетките се суспендират в среда за разпространение на плоча, коригират се до подходяща концентрация и се култивират в колаген - покрити плочи; Тогава клетките могат да бъдат пастьоризирани в рамките на 4 ~ 6 часа. След като клетките са прикрепени към стената, поддръжката на поддържането се заменя и поддържа в продължение на 18 часа, за да се осигури максимално възстановяване на клетъчното състояние. След това може да се извърши анализ на ензимната индукция за откриване на метаболитна активност и ниво на индукция на мРНК. От гледна точка на целия цикъл, хепатоцитите могат да се поддържат за 6 ~ 7 дни след придържането на стената. С течение на времето състоянието на прилепването на клетъчната стена се влошава и клетките ще се отделят и спират.
Ако прилепналите хепатоцити не се култивират, ние проверихме, че те могат да се поддържат в добро състояние в рамките на 4 ~ 6 часа. Все още не сме извършили проверка за по -дълъг период.
В: Хепатоцитите могат да се използват като суспензия и прилепнали клетки в зависимост от различните културни среди, използвани?
О: Повечето клетки от твърди тъкани и органи са стенирани, но не всички клетки се ограждат, когато се култивират в - vitro. Дали клетките са стени - прилепнали или не, зависи от състоянието на самите клетки; В същото време стената - Адхеренните клетки се нуждаят от специфична културална среда и някои специални простояции за клетъчна адхезия (например, рамноогелиноген, ламинин, фибронектин, серумен коефициент на разширяване), който може да участва в процеса на прикрепване на клетките. В заключение, адхезивните клетки могат да се използват като суспензионни клетки, но клетките на суспензията не са непременно достъпни за прилепнала употреба.
Въпрос: Какви са предимствата/недостатъците на използването на прилепнали стихове на стената на окачване на хепатоцити? Какви са критериите за решение?
О: След изолиране на хепатоцитите, те могат да се култивират в суспензия или в прилепнала стена. Активността на ензима на цитохром Р450 от суспензия култивирани първични хепатоцити е най -съвместима с тази на IN - vivo за първите 4 ~ 6h, след което намалява бързо с удължаването на времето. Следователно, хепатоцитите на суспензията обикновено се използват за изследване на метаболитна стабилност или изследване на метаболит на профили. Първичните хепатоцити, култивирани в прилепнала стена, имат достатъчно време да се възстановят от увреждане, за да се поддържат биологичните характеристики и метаболитната активност на нормалните хепатоцити. Следователно, те обикновено се използват за изследвания на индукция на ензима, изследвания на цитотоксичност на лекарството, метаболитна стабилност на бавни метаболизиращи лекарства или проучвания на изводите на продукта.
В момента ние не предоставяме услуга за онлайн покупка на уеб страница. Продуктите, добавени към пазарската количка след регистрация и вход, са само за справка. Ако трябва да закупите нашите продукти, моля, оставете информацията си за контакт чрез канала за контакт с САЩ и ние ще се свържем с вас навреме, за да завършим нашите услуги.
Q: Как не - специфичното свързване на протеини влияе на резултатите от тестовете?
A: Ако кандидатът за лекарство свързва не - конкретно с микрозомални протеини, това води до променени кинетични параметри. С увеличаването на концентрацията на протеина стойността на km се увеличава, което води до ниско предполагаем вътрешен клирънс. Също така, свързването на кандидата за лекарство с протеините в микрозомите може да доведе до големи вариации в резултатите от различни лаборатории и различни системи.
Q: Препоръчителната концентрация на чернодробния микрозомален протеин в ръководството за инструкции на фаза I или фазолна фаболна стабилност на фаза II е 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, това означава ли, че когато използвате чернодробни микрозоми, все пак е необходимо да ги разреждате добре, преди да ги добавите към системата?
A: Не е необходимо първо да се разрежда чернодробните микрозоми; Концентрацията на чернодробните микрозоми в комплекта е 20 mg/ml, а крайната концентрация на чернодробни микрозоми в тестовата система е 0,1 - 1 mg/ml, което може да се добави пропорционално.
Q: Каква е препоръчителната клетъчна плътност за метаболитна стабилност на първичните хепатоцити? Изчисляването на клирънса е същото като при чернодробните микрозоми?
A: Препоръчителната клетъчна плътност за първичния анализ на метаболитната стабилност на хепатоцитите е 0,5 до 2 × 106 Клетките/ML и изчисленията на клирънс и обработката на резултатите от теста на чернодробната микрозомална метаболитна стабилност са последователни.
Q: Кои са основните съставки във вашия PBS буфер? Съдържа ли KCL и NaCl?
A: Основните компоненти на нашия PBS буфер са K2Hpo4 и kh2PO4и са без KCL и NaCl.
Q: Каква е целта на фосфатните буфери? Защо се нуждаете от фосфат?
A: Фосфатните буфери са избрани с цел имитиране на физиологичната среда, а фосфатът е една от най -важните двойки буфери за поддържане на течната среда на организма.
Q: Каква е обичайната настройка за ензима - Индуцирана концентрация на рецептори? Има ли решение, ако разтворимостта на системата, която ще бъде тествана, е лоша?
A: Анализът за индукция на ензима трябва да бъде създаден с 3 различни концентрации, нивото на концентрация трябва да покрие очакваната ефективна концентрация на лекарства в кръвта при хора, а най -високата концентрация е избрана да бъде поне един порядък по -висок от средната ефективна концентрация на кръвно лекарство при хора. Ако разтворимостта във водната фаза е лоша, органичният разтворител може да бъде избран за негов разтворител, напр. DMSO, но количеството органичен разтворител, добавено към системата, трябва да бъде контролирано.
Q: В проучванията за метаболитна стабилност ли е необходимо да се използват две тестови системи, чернодробни микрозоми и първични хепатоцити, за тестване?
A: Чернодробните микрозоми са почти сферична мембрана везикула - Подобни структури, образувани от самостоятелното сливане на фрагментиран ендоплазмен ретикулум, получени по време на хомогенизация и диференциално центрофугиране на чернодробни тъкани, и съдържат CYP450 ензими и някои бифазни ензими, например, Ugts, STS. Първичните хепатоцити (PHCs) са хепатоцити, култивирани веднага след директна изолация от животински черни дробчета, които основно поддържат метаболитните функции на черния дроб, особено по -добре запазването на нивата на ензима, съответстващи на тези in vivo. В изследването на метаболитната стабилност не е необходимо да се вземат предвид разходите и две тестови системи могат да бъдат избрани за теста едновременно; или подходящата тестова система може да бъде избрана според метаболитните свойства на съединението и принципът е този, който системата има висока метаболитна скорост. По принцип чернодробните микрозоми са най -добрият избор, когато молекулите на съединението са повече вода - разтворими и един - фазов метаболизъм е основният метаболитен път (особено чрез CYP); Когато два - фазов метаболизъм е основният път, хидролизата е основният метаболитен път, не - специфичното свързване на протеини в чернодробните микрозоми е много високо и метаболизмът не е очевиден в чернодробните микрозоми, тестът може да се проведе с помощта на първични хепатоцити.
Q: Концентрацията на микрозомите се изследва в теста за метаболитна стабилност? Какъв е ефектът от твърде висок или твърде нисък?
A: В теста за метаболитна стабилност концентрацията на протеин също ще повлияе на метаболитната скорост, обикновено избира концентрацията на микрозомален протеин от 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml, специфичният избор на концентрация на протеин трябва да бъде избран според собствените метаболитни свойства на съединението. Твърде високата концентрация на микрозомален протеин ще доведе до не - специфично свързване на лекарството с микрозомния протеин; Докато твърде ниската концентрация на микрозомален протеин може да доведе до незначителен метаболизъм на лекарството.