প্রশ্ন: বিপাকীয় স্থিতিশীলতা অধ্যয়নের জন্য আমার কীভাবে মাইক্রোসোম এবং হেপাটোসাইটগুলি বেছে নেওয়া উচিত? প্রয়োজনীয়তা পূরণের জন্য আমি কি তাদের মধ্যে কেবল একটি বেছে নিতে পারি?
উত্তর: বিপাকীয় স্থিতিশীলতা অধ্যয়নের ক্ষেত্রে, লিভারের মাইক্রোসোম বা হেপাটোসাইটের পছন্দ মূলত যৌগগুলির বিপাকীয় বৈশিষ্ট্যের উপর নির্ভর করে, যেখানে একটি উচ্চ বিপাকীয় হারের সাথে একটি বেছে নেওয়া হয়। সাধারণভাবে, লিভার মাইক্রোসোমগুলি পছন্দ করা হয়, বিশেষত যখন যৌগিক অণুগুলি আরও বেশি জল - দ্রবণীয় এবং একটি - ফেজ বিপাক প্রধান বিপাকীয় পথ (বিশেষত সিওয়াইপির মাধ্যমে)। হেপাটোসাইটগুলি পরীক্ষাগুলির জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে যখন প্রধান পথ হিসাবে দুটি ফেজ বিপাকের প্রমাণ থাকে, প্রধান বিপাকীয় পথ হিসাবে হাইড্রোলাইসিস, লিভারের মাইক্রোসোমে উচ্চ ননস্পেসিফিক প্রোটিন বাইন্ডিং এবং লিভারের মাইক্রোসোমে বিপাকটি স্পষ্ট নয়। সাধারণত, একটি বিপাকীয় সিস্টেম চাহিদা পূরণের জন্য বেছে নেওয়া যেতে পারে; যদি সমস্ত দিকের শর্তগুলি অনুমতি দেয় তবে একই সাথে উভয় সিস্টেমই বেছে নেওয়া অবশ্যই ভাল।
প্রশ্ন: এনজাইম ইন্ডাকশন পার্সের জন্য প্রাথমিক হেপাটোসাইটগুলি ব্যবহার করা কেন প্রয়োজনীয়?
উত্তর: সিওয়াইপি এনজাইম - প্ররোচিত অ্যাসকে একটি সক্রিয় সিওয়াইপি এনজাইম প্রোটিন পেতে "ট্রান্সক্রিপশন", "অনুবাদ" থেকে "পোস্ট - প্রোটিনের অনুবাদ পরিবর্তন" পর্যন্ত যেতে হবে। অতএব, পরীক্ষার সিস্টেমটি লিভার সেল হওয়া উচিত, লিভার মাইক্রোসোম বা লিভার এস 9 নয়।
প্রশ্ন: এনজাইম ইন্ডাকশন পার্সের জন্য আমাকে কেন তিনটি দাতা মানব প্রাথমিক হেপাটোসাইট বেছে নেওয়া দরকার?
উত্তর: ওষুধের মিথস্ক্রিয়াগুলির জন্য নির্দেশিকাগুলির পরিচিতি অনুসারে, কমপক্ষে তিনটি দাতাকে ব্যবহার করা উচিত এবং প্রতিটি দাতার অন্তর্ভুক্তির ফলাফলটি আলাদাভাবে মূল্যায়ন করা উচিত। পরিসংখ্যানগতভাবে উল্লেখযোগ্য ফলাফল উত্পাদন ছাড়াও, আন্তঃ - স্বতন্ত্র প্রকরণ মূল্যায়ন করার জন্য পরীক্ষার জন্য তিনটি দাতার পছন্দ আরও গুরুত্বপূর্ণ। কমপক্ষে একজন দাতার ফলাফল যদি পূর্বনির্ধারিত প্রান্তিকের চেয়ে বেশি হয় তবে ড্রাগ প্রার্থী ইনডুসিবল হতে পারে এবং অনুসরণ করতে পারে - আপ মূল্যায়ন প্রয়োজন।
প্রশ্ন: কেন কেবল সিওয়াইপি এনজাইম ইন্ডাকশনকে ফোকাস করুন এবং ইউজিটি এনজাইম ইন্ডাকশনটিতে নয়?
উত্তর: সাইপেস ইন্ডাকশনে ফোকাস করার কারণ হ'ল সিপাস ইন্ডাকশন প্রক্রিয়াটি আরও স্পষ্টভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে। অন্য কথায়, ইউজিটেজ ইন্ডাকশন অধ্যয়নের প্রয়োজন না হওয়ার কারণ হ'ল প্রক্রিয়াটি এখনও অস্পষ্ট; তবে এর অর্থ এই নয় যে ইউজিটিজ প্ররোচিত হবে না। গাইডলাইনগুলিতে আরও বলা হয়েছে যে ট্রান্সপোর্টার এবং দ্বিতীয় ধাপের বিপাক এনজাইমগুলির সূচক বা প্রতিরোধকারীদের জন্য কোনও মানসম্পন্ন শ্রেণিবদ্ধকরণ ব্যবস্থা নেই।
প্রশ্ন: পুনরুত্থানের পরে প্রাথমিক হেপাটোসাইটগুলি কতক্ষণ বেঁচে থাকতে পারে এবং পুনরুত্থানের পরে সংস্কৃতি ব্যতীত হেপাটোসাইটগুলি কতক্ষণ বজায় রাখতে পারে?
উত্তর: পেস্টুরাইজড প্রাথমিক হেপাটোসাইটগুলি সাধারণত এনজাইম ইন্ডাকশন অ্যাসেসের জন্য ব্যবহৃত হয়। কোষ পুনরুদ্ধারের পরে, কোষগুলি প্লেট ছড়িয়ে দেওয়া মাঝারি স্থগিত করা হয়, উপযুক্ত ঘনত্বের সাথে সামঞ্জস্য করা হয় এবং কোলাজেন - প্রলিপ্ত প্লেটগুলিতে সংস্কৃত; তারপরে কোষগুলি 4 ~ 6 ঘন্টার মধ্যে পেস্টুরাইজ করা যায়। কোষগুলি প্রাচীরের সাথে সংযুক্ত হওয়ার পরে, রক্ষণাবেক্ষণের মাধ্যমটি কোষের অবস্থার সর্বাধিক পুনরুদ্ধার নিশ্চিত করতে 18 ঘন্টা জন্য প্রতিস্থাপন এবং রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়। এরপরে, বিপাকীয় ক্রিয়াকলাপ এবং এমআরএনএ ইন্ডাকশন স্তর সনাক্ত করতে এনজাইম ইন্ডাকশন অ্যাস সম্পাদন করা যেতে পারে। পুরো চক্রের দৃষ্টিকোণ থেকে, হেপাটোসাইটগুলি প্রাচীরের আনুগত্যের 6 ~ 7 দিনের জন্য বজায় রাখা যেতে পারে। সময়ের সাথে সাথে, কোষের প্রাচীরের আনুগত্যের অবস্থা অবনতি ঘটে এবং কোষগুলি বিচ্ছিন্ন ও স্থগিত করবে।
যদি অনুগত হেপাটোসাইটগুলি সংস্কৃত না হয় তবে আমরা যাচাই করেছি যে সেগুলি 4 ~ 6 ঘন্টার মধ্যে একটি ভাল অবস্থায় বজায় রাখা যায়। আমরা এখনও দীর্ঘ সময়ের জন্য যাচাইকরণ করি নি।
প্রশ্ন: হেপাটোসাইটগুলি ব্যবহৃত বিভিন্ন সংস্কৃতি মিডিয়াগুলির উপর নির্ভর করে উভয় স্থগিতাদেশ এবং অনুগত কোষ হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে?
উত্তর: শক্ত টিস্যু এবং অঙ্গগুলির বেশিরভাগ কোষ প্রাচীরযুক্ত, তবে - ভিট্রোতে সংস্কৃত হলে সমস্ত কোষ প্রাচীরযুক্ত হয় না। কোষগুলি প্রাচীর হোক - অনুগত বা না তারা নিজেরাই কোষের অবস্থার উপর নির্ভর করে; একই সময়ে, প্রাচীর - মেনে নেওয়া কোষগুলির নির্দিষ্ট সংস্কৃতি মাধ্যম এবং কিছু বিশেষ প্রো উপসংহারে, অনুগত কোষগুলি সাসপেনশন সেল হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে তবে সাসপেনশন সেলগুলি অগত্যা ব্যবহারের জন্য উপলব্ধ নয়।
প্রশ্ন: অনুগত প্রাচীর আয়াত সাসপেনশন হেপাটোসাইটগুলি ব্যবহারের সুবিধা/অসুবিধাগুলি কী কী? সিদ্ধান্তের মানদণ্ড কী কী?
উত্তর: হেপাটোসাইটগুলি বিচ্ছিন্ন হওয়ার পরে এগুলি সাসপেনশন বা অনুগত প্রাচীরের মধ্যে সংস্কৃত হতে পারে। সাসপেনশন সংস্কৃতিযুক্ত প্রাথমিক হেপাটোসাইটগুলি থেকে সাইটোক্রোম পি 450 এনজাইমের ক্রিয়াকলাপ প্রথম 4 ~ 6 ঘন্টা এর জন্য আইএন ভিভোর সাথে সর্বাধিক সামঞ্জস্যপূর্ণ, তারপরে সময়ের দীর্ঘায়নের সাথে দ্রুত হ্রাস পায়। অতএব, সাসপেনশন হেপাটোসাইটগুলি সাধারণত বিপাকীয় স্থায়িত্ব অধ্যয়ন বা বিপাকীয় প্রোফাইলিং অধ্যয়নের জন্য ব্যবহৃত হয়। অনুগত প্রাচীরের সংস্কৃত প্রাথমিক হেপাটোসাইটগুলি সাধারণ হেপাটোসাইটগুলির জৈবিক বৈশিষ্ট্য এবং বিপাকীয় ক্রিয়াকলাপ বজায় রাখতে ক্ষতি থেকে পুনরুদ্ধার করার জন্য পর্যাপ্ত সময় রয়েছে। অতএব, এগুলি সাধারণত এনজাইম ইন্ডাকশন স্টাডিজ, ড্রাগ সাইটোঅক্সিসিটি স্টাডিজ, ধীর বিপাকীয় ওষুধ বা পণ্য অনুমানের অধ্যয়নের বিপাকীয় স্থিতিশীলতার জন্য ব্যবহৃত হয়।
বর্তমানে, আমরা ওয়েবপৃষ্ঠা অনলাইন ক্রয় পরিষেবা সরবরাহ করি না। নিবন্ধকরণ এবং লগইন করার পরে শপিং কার্টে যুক্ত পণ্যগুলি কেবল রেফারেন্সের জন্য। আপনার যদি আমাদের পণ্যগুলি কেনার প্রয়োজন হয় তবে দয়া করে আমাদের যোগাযোগের তথ্যটি আমাদের চ্যানেলের মাধ্যমে রেখে দিন এবং আমাদের পরিষেবাগুলি শেষ করতে আমরা সময়মতো আপনার সাথে যোগাযোগ করব।
প্রশ্ন ： কীভাবে অ - নির্দিষ্ট প্রোটিন বাইন্ডিং পরীক্ষার ফলাফলগুলিকে প্রভাবিত করে?
A ： যদি ড্রাগ প্রার্থী বিশেষত মাইক্রোসোমাল প্রোটিনগুলিতে না বাঁধেন তবে এর ফলে পরিবর্তিত গতিগত পরামিতিগুলির ফলস্বরূপ। প্রোটিনের ঘনত্ব বাড়ার সাথে সাথে কেএম মান বৃদ্ধি পায়, ফলস্বরূপ একটি কম অনুমান করা অভ্যন্তরীণ ছাড়পত্র। এছাড়াও, মাইক্রোসোমে প্রোটিনের সাথে ড্রাগ প্রার্থীর বাঁধাইয়ের ফলে বিভিন্ন পরীক্ষাগার এবং বিভিন্ন সিস্টেমের ফলাফলের ক্ষেত্রে বড় বৈচিত্র দেখা দিতে পারে।
প্রশ্ন ： প্রথম ধাপের প্রথম বা দ্বিতীয় ধাপের বিপাকীয় স্থিতিশীলতা কিটটির নির্দেশিকা ম্যানুয়ালটিতে লিভারের মাইক্রোসোমাল প্রোটিনের প্রস্তাবিত ঘনত্ব 0.1 মিলিগ্রাম/এমএল - 1 মিলিগ্রাম/এমএল, এর অর্থ কি এই যে লিভার মাইক্রোসোমগুলি ব্যবহার করার সময়, সিস্টেমে যুক্ত করার আগে এগুলি এখনও ভালভাবে মিশ্রিত করা প্রয়োজন?
ক: প্রথমে হেপাটিক মাইক্রোসোমগুলি পাতলা করার দরকার নেই; কিটটিতে হেপাটিক মাইক্রোসোমগুলির ঘনত্ব 20 মিলিগ্রাম/এমএল এবং পরীক্ষার সিস্টেমে হেপাটিক মাইক্রোসোমগুলির চূড়ান্ত ঘনত্ব 0.1 - 1 মিলিগ্রাম/এমএল, যা আনুপাতিকভাবে যুক্ত করা যায়।
প্রশ্ন ： প্রাথমিক হেপাটোসাইটগুলির বিপাকীয় স্থায়িত্ব পরীক্ষার জন্য প্রস্তাবিত সেল ঘনত্ব কী? ছাড়পত্রের গণনা কি লিভার মাইক্রোসোমগুলির মতো একই?
এ He প্রাথমিক হেপাটোসাইট বিপাকীয় স্থায়িত্বের জন্য প্রস্তাবিত সেল ঘনত্ব 0.5 থেকে 2 × 106 সেল/এমএল, এবং ছাড়পত্রের গণনা এবং হেপাটিক মাইক্রোসোমাল বিপাকীয় স্থিতিশীলতা পার্সের ফলাফলগুলির প্রক্রিয়াকরণ সামঞ্জস্যপূর্ণ।
প্রশ্ন your আপনার পিবিএস বাফারে প্রধান উপাদানগুলি কী কী? এটিতে কি কেসিএল এবং ন্যাকএল রয়েছে?
A our আমাদের পিবিএস বাফারের প্রধান উপাদানগুলি কে2এইচপিও4 এবং খ2PO4, এবং কেসিএল এবং এনএসিএল মুক্ত।
প্রশ্ন ： ফসফেট বাফারগুলির উদ্দেশ্য কী? কেন আপনার ফসফেট দরকার?
একটি ： ফসফেট বাফারগুলি শারীরবৃত্তীয় পরিবেশের নকল করার উদ্দেশ্যে তাদের উদ্দেশ্যে বেছে নেওয়া হয় এবং শরীরের তরল পরিবেশ বজায় রাখার জন্য ফসফেট অন্যতম গুরুত্বপূর্ণ বাফার জোড়া।
প্রশ্ন ： এনজাইম - প্ররোচিত রিসেপ্টর ঘনত্বের জন্য সাধারণ সেটিংটি কী? সিস্টেমের দ্রবণীয়তা পরীক্ষা করা যদি দুর্বল হয় তবে কি কোনও সমাধান আছে?
একটি ： এনজাইম ইন্ডাকশন অ্যাসকে 3 টি পৃথক ঘনত্বের সাথে সেট আপ করা দরকার, ঘনত্বের স্তরটি মানুষের মধ্যে প্রত্যাশিত রক্তের ওষুধের ঘনত্বকে আবরণ করতে হবে এবং সর্বোচ্চ ঘনত্বকে মানুষের মধ্যে গড় কার্যকর রক্তের ওষুধের ঘনত্বের চেয়ে কমপক্ষে একটি মাত্রার উচ্চতর ক্রম হিসাবে বেছে নেওয়া হয়েছে। যদি জলীয় পর্যায়ে দ্রবণীয়তা দুর্বল হয় তবে একটি জৈব দ্রাবককে এর দ্রাবক হিসাবে বেছে নেওয়া যেতে পারে, যেমন। ডিএমএসও, তবে সিস্টেমে যুক্ত জৈব দ্রাবকের পরিমাণ নিয়ন্ত্রণ করা দরকার।
প্রশ্ন ： বিপাকীয় স্থিতিশীলতা স্টাডিতে, পরীক্ষার জন্য কি দুটি টেস্ট সিস্টেম, লিভার মাইক্রোসোম এবং প্রাথমিক হেপাটোসাইট ব্যবহার করা প্রয়োজন?
একটি ： হেপাটিক মাইক্রোসোমগুলি প্রায় গোলাকার ঝিল্লি ভ্যাসিকেল - যেমন স্ব -স্ব দ্বারা গঠিত কাঠামোগুলির মতো কাঠামোগুলি হোমোজেনাইজেশন এবং হেপাটিক টিস্যুগুলির ডিফারেনশিয়াল সেন্ট্রিফিউগেশন চলাকালীন প্রাপ্ত খণ্ডিত এন্ডোপ্লাজমিক রেটিকুলামের ফিউশন এবং সিওয়াইপি 450 এনজাইমস এবং কিছু বিপাসিক এনজাইম রয়েছে, ইজি, ইজি, ইজি। প্রাথমিক হেপাটোসাইটস (পিএইচসিএস) হ'ল হেপাটোসাইটগুলি হ'ল প্রাণী জীবিকা থেকে সরাসরি বিচ্ছিন্ন হওয়ার পরপরই সংস্কৃত, যা মূলত লিভারের বিপাকীয় ক্রিয়াকলাপগুলি বজায় রাখে, বিশেষত ভিভোর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ এনজাইম স্তরগুলি আরও ভালভাবে সংরক্ষণ করে। বিপাকীয় স্থিতিশীলতা সমীক্ষায়, ব্যয়টি বিবেচনা করার দরকার নেই এবং একই সাথে পরীক্ষার জন্য দুটি পরীক্ষা সিস্টেম নির্বাচন করা যেতে পারে; বা যৌগের বিপাকীয় বৈশিষ্ট্য অনুসারে উপযুক্ত পরীক্ষা ব্যবস্থা নির্বাচন করা যেতে পারে এবং নীতিটি হ'ল যে সিস্টেমের উচ্চ বিপাকীয় হার নির্বাচন করা হয়েছে। সাধারণভাবে, যৌগিক অণুগুলি আরও বেশি জল - দ্রবণীয় এবং এক - ফেজ বিপাক হ'ল প্রধান বিপাকীয় পথ (বিশেষত সিওয়াইপির মাধ্যমে); যখন দুটি - ফেজ বিপাকটি প্রধান পথ হয়, তখন হাইড্রোলাইসিস হ'ল প্রধান বিপাকীয় পথ, লিভার মাইক্রোসোমে নির্দিষ্ট প্রোটিন বাইন্ডিং খুব বেশি, এবং লিভার মাইক্রোসোমে বিপাক সুস্পষ্ট নয়, প্রাথমিক হেপাটোসাইটগুলি ব্যবহার করে পরীক্ষাটি করা যেতে পারে।
প্রশ্ন ： বিপাকীয় স্থায়িত্ব পরীক্ষায় মাইক্রোসোমগুলির ঘনত্ব পরীক্ষা করা হয়? খুব বেশি বা খুব কম এর প্রভাব কী?
একটি ： বিপাকীয় স্থিতিশীলতা পরীক্ষায়, প্রোটিনের ঘনত্ব বিপাকের হারকেও প্রভাবিত করবে, সাধারণত 0.1 মিলিগ্রাম/এমএল ~ 1 মিলিগ্রাম/এমএল এর মাইক্রোসোমাল প্রোটিন ঘনত্ব চয়ন করে, যৌগের নিজস্ব বিপাকীয় বৈশিষ্ট্য অনুসারে কতটা প্রোটিনের ঘনত্ব নির্বাচন করা উচিত তার নির্দিষ্ট পছন্দ। মাইক্রোসোমাল প্রোটিনের খুব বেশি ঘনত্ব মাইক্রোসোমাল প্রোটিনের সাথে ড্রাগের নির্দিষ্ট বাঁধাইয়ের দিকে পরিচালিত করবে; যদিও খুব কম মাইক্রোসোমাল প্রোটিনের ঘনত্ব ড্রাগের তুচ্ছ বিপাক হতে পারে।