FAQ

P: Kako da odaberem mikrosome i hepatocite za studije metaboličke stabilnosti? Mogu li birati samo jednog od njih da ispuni zahtjev?

O: U metaboličkoj studiji stabilnosti, izbor mikrosoma o jetri ili hepatocita uglavnom ovisi o metaboličkim svojstvima spojeva, u kojima je odabran onaj sa visokom metaboličkom stopom. Općenito, sužeri jetre preferiraju se, pogotovo kada su složeni molekuli više vode - topljivi i jedan - fazni metabolizam glavni je metabolički put (posebno putem CYP-a). Hepatociti se mogu koristiti za eksperimente kada postoje dokazi o dva fazna metabolizam kao glavni put, hidrolizu kao glavni metabolički put, visoki nespecifični protein koji povezuje u mikrosomima jetre i metabolizma u mikrosomima jetre u mikrodomima jetre nisu evidentni. Obično se može odabrati jedan metabolički sustav za ispunjavanje potreba; Ako uvjeti u svim aspektima omogućuju, definitivno je najbolje odabrati oba sistema istovremeno.

P: Zašto je potrebno koristiti primarne hepatocite za indukciju enzima?

O: CYP Enzim - Inducio instalirani test treba ići iz "Transkripcije", "prevod" za "Post - Translacionu modifikaciju proteina" Da biste dobili aktivni enzimski protein CYP. Stoga bi testni sistem trebao biti ćelije jetre, a ne mikrosomi ili jetre jetre ili jetre S9.

P: Zašto trebam odabrati tri donatorskog ljudskog primarnog hepatocita za indukciju enzima?

O: Prema uvodu u smjernice za interakcije lijekova, treba koristiti najmanje tri donatora, a indukcijski rezultat svakog donatora treba zasebno ocijeniti. Pored proizvodnje statistički značajnih rezultata, izbor od tri donatora za eksperiment je također važniji za procjenu Inter - pojedinačne varijacije. Ako rezultat barem jednog donatora prelazi unaprijed određeni prag, kandidat za drogu može biti incibilan i potreban je - up evaluaciju.

P: Zašto se fokusirati samo na indukciju enzima CYP i ne na indukciji UGT enzima?

O: Razlog za fokusiranje na indukciju cipakse je taj što je mehanizam indukcije cipne proučavati jasnije. Drugim riječima, razlog ne zahtijevajući proučavanje indukcije ugteze je taj što je mehanizam još uvijek nejasan; Međutim, to ne znači da se ugturaze neće izazvati. Smjernice također navode da ne postoji standardizirani sistem klasifikacije za induktere ili inhibitore transportera i enzima metabolizma faze II.

P: Koliko dugo se mogu pridržavati primarni hepatociti nakon oživljavanja i koliko dugo se hepatociti održavaju bez pridržavanja kulture nakon reanimacije?

O: Pasterizirani primarni hepatociti uglavnom se koriste za indukciju enzima. Nakon oporavka ćelija, ćelije su obustavljene u tanjurskom širivanju medija, prilagođene odgovarajućoj koncentraciji i kultiviranim u kolagenu - presvučenim pločicama; Tada ćelije mogu biti pasterizirane u roku od 4 sata. Nakon što su ćelije pričvršćene na zid, medij za održavanje zamjenjuje se i održava za 18 h kako bi se osigurala maksimalna obnova stanja ćelije. Zatim se može izvesti indukcijski test enzima za otkrivanje metaboličke aktivnosti i nivo indukcije MRNA. Iz perspektive cjelokupnog ciklusa, hepatociti se mogu održavati za 6 ~ 7 dana nakon pridržavanja zida. Kako vrijeme prolazi, država se pogoršava država za zid ćelije, a ćelije će se odvojiti i suspendirati.

Ako se pridržani hepatociti ne uzgajaju, provjerili smo da se mogu održavati u dobrom stanju u roku od 4 sata. Još nismo izvršili verifikaciju na duži period.

P: Hepatociti se mogu koristiti kao suspenzije i pridržane ćelije ovisno o različitim korištenim medijima kulture?

O: Većina ćelija iz čvrstih tkiva i organa je zidova, ali nisu sve ćelije zidane kada se kultiviraju u protokovu. Da li su ćelije zidne - pridržane ili ne ovise o samim stanjem ćelija; Istovremeno, zid - pridržane ćelije trebaju specifični kulturni medij i neke posebne profesionalne tvari za prijavu (npr., rhamnogelinogen, laminin, fibronektin, faktor ekspanzije seruma) koji mogu sudjelovati u procesu privrženosti ćelija. Zaključno, pridržane ćelije se mogu koristiti kao ćelije ovjesa, ali ćelije ovjesa nisu nužno dostupne za pridržavanje korištenja.

P: Koje su prednosti / nedostaci korištenja pridržanog zidnog stihova ovjes hepatociti? Koji su kriteriji odluke?

O: Nakon izoliranih hepatocita, mogu se kultivirati u suspenziji ili u prilog. Aktivnost citokroma P450 enzima iz kultiviranog suspenzije primarne hepatocite najsVOLJENĆE je u skladu s onim - vivo za prve 4 ~ 6h, a zatim brzo smanjuje produženje vremena. Stoga se suvjesni hepatociti uglavnom koriste za studiju metaboličke stabilnosti ili studiju metabolitnog profiliranja. Primarni hepatociti kultivirani u priklonnom zidu imaju dovoljno vremena za povrat od oštećenja za održavanje bioloških karakteristika i metaboličke aktivnosti normalnih hepatocita. Stoga se obično koriste za indukcijske studije enzima, studije citotoksičnosti lijekova, metabolička stabilnost sporih metabolizirajućih lijekova ili studija o zaključku proizvoda.

Trenutno ne pružamo uslugu na mreži za web stranicu web stranice. Proizvodi su dodani u košaricu nakon registracije i prijave su samo za referencu. Ako trebate kupiti naše proizvode, molimo ostavite svoje kontaktne podatke putem kanala Kontaktirajte nas i kontaktirat ćemo vas na vrijeme da dovršimo naše usluge.

P: Kako Non - specifični proteinski vezing utječe na rezultate testa?

O: Ako se kandidat za drogu veže neferenciran na mikrosomalnim proteinima, što rezultira izmijenjenim kinetičkim parametrima. Kako se koncentracija proteina povećava, vrijednost KM povećava se, što rezultira niskim pretpostavljenim unutarnjim klirensom. Također, obvezivanje kandidata za drogu na proteine ​​u mikrosomima može rezultirati velikim varijacijama u rezultatima različitih laboratorija i različitih sustava.

P: Preporučena koncentracija mikrozomalnog proteina jetre u upute za uporabu I ili FAZE II metaboličke komplet za stabilnost iznosi 0,1 mg / ml - 1 ml, da li to znači da je kada ih koristi mikrosomi jetre da ih je još uvijek potrebno dobro razblažiti u sistemu?

O: Ne treba prvo razrijediti jetreni mikrosomi; Koncentracija jetrenih mikrosoma u kompletu je 20 mg / ml, a konačna koncentracija jetrenih mikrosoma u testnom sustavu je 0,1 - 1 mg / ml, koji se može dodati proporcionalno.

P: Koja je preporučena gustina ćelije za ispitivanje metaboličke stabilnosti primarnih hepatocita? Da li je izračun odobrenja isti kao i za mikrosome jetre?

O: Preporučena gustina ćelije za primarni test metaboličke stabilnosti hepatocita je 0,5 do 2 × 10⁶ Stanice / ml, te izračuni zazora i obrada rezultata testa za stabilnost jetrenog mikrosomalnog metabolizma su dosljedni.

P: Koji su glavni sastojci u vašem PBS tampon? Sadrži KCL i NACL?

O: Glavne komponente našeg tampon PBS su K₂HPO₄ i Kh₂PO₄, a besplatni su KCL i NACL.

P: Koja je svrha tapfatnih pufera? Zašto vam treba fosfat?

O: Phosfatni međuspremnici izabrani su za njihovu svrhu oponašanja fiziološkog okruženja, a fosfat je jedan od najvažnijih parovskih paruća za održavanje tela za telo.

P: Koje je uobičajeno okruženje za koncentraciju enzima - izazvane koncentracije receptora? Postoji li bilo kakvo rješenje ako je rastvorljivost sistema za testiranje loša?

O: Indukcijski test enzima treba uspostaviti sa 3 različita koncentracija, razina koncentracije treba pokriti očekivanu efikasnu koncentraciju u krvi kod ljudi, a najveća koncentracija je izabrana da bude barem jedan redoslijed veće od prosječne efektivne koncentracije u krvi u ljudima. Ako je rastvorljivost u vodenoj fazi loša, organski otapalo može se odabrati kao svoj solvent, npr. DMSO, ali iznos organskog otapala dodanog u sustav treba kontrolirati.

P: U metaboličkim studijama stabilnosti potrebno je koristiti dva testna sistema, mikrosoma jetre i primarnih hepatocita za testiranje?

O: Jetreni mikrosomi su gotovo sfernom membranom - poput struktura koje je formirala samostalna fuzija fragmentiranog endoplazmatskog retikuluma dobivenih tokom homogenizacije i diferencijalne centrifugiranje jetrenih tkiva i sadrže CYP450 enzime, a neke bifazične enzime, npr., Npr., Npr. Primarni hepatociti (PHC-ovi) su kultirani hepatocitima neposredno nakon izravne izolacije od životinjskih jetra, što u osnovi održavaju metaboličke funkcije jetre, posebno bolje očuvanje nivoa enzima u vidu u skladu s onima u vivo. U studiji metaboličke stabilnosti ne postoji potreba za razmatranjem troškova, a za test se istovremeno mogu odabrati dva test sistema; Ili odgovarajući testni sistem može se odabrati prema metaboličkim svojstvima spoja, a princip je da je sistem odabran visoki metabolički brzina. Općenito, sutrijski mikrosomi su najbolji izbor kada su složeni molekuli više vode - topljivi i jedan - fazni metabolizam glavni je metabolički put (posebno putem CYP-a); Kada je dva - fazna metabolizam glavna puta, hidroliza je glavni metabolički put, ne - specifični vezanje proteina u mikrosomima jetre vrlo visok, a metabolizam nije očit u mikrozomima jetre, test se može izvesti pomoću primarnih hepatocita.

P: Da li je koncentracija mikrosoma ispitanih u testu metaboličke stabilnosti? Kakav je efekat previsokog ili preniskog?

O: U metaboličkoj testiranju stabilnosti, koncentracija proteina također će utjecati na metaboličku stopu, obično odabrati mikrosomalnu koncentraciju proteina 0,1 mg / ml ~ 1 mg / ml, specifičan izbor koliko koncentracije proteina po vlastitom metaboličkom svojstvima. Previsok koncentracija mikrosomalnog proteina dovest će do ne - specifičnog obvezanja lijeka mikrosomalnom proteinu; Dok je preniska koncentracija mikrosomalnog proteina može dovesti do beznačajnog metabolizma lijeka.