Splenocyty v imunologickém výzkumu: napříč druhy a izolací, zmrazení, kroky rozmrazení

Klíčová slova:Splenocyty (Spls); Cynomolgus opice splenocyty; Splenocyty opic Rhesus; Splenocyty psů; Psí splenocyty; Potkaní splenocyty; Splenocyty myši; Myší splenocyty; Králičí splenocyty; Izolace splenocytů; Mrazivé splenocyty; Rozmrazení splenocytů

Iphase produkt

Splenocyty (SPLS)jsou heterogenní populace imunitních buněk izolovaných od sleziny, vitálního orgánu zapojeného do filtrování krve, montáž imunitních odpovědí a udržování homeostázy. Tyto buňky zahrnují lymfocyty (T buňky, B buňky), makrofágy, dendritické buňky a přirozené zabijácké (NK) buňky, z nichž všechny hrají kritickou roli v adaptivní a vrozené imunitě. Splenocyty se široce používají v předklinickém a translačním výzkumu ke studiu imunitní funkce, vývoje vakcíny, autoimunitních onemocněních a imunoterapii rakoviny.

Role a složení splenocytů (SPL)

V rámci sleziny jsou splenocyty sídlí v odlišných oblastech: červená buničina, která filtruje krev a recykluje staré červené krvinky, a bílou buničinu, kde jsou zahájeny imunitní odpovědi. Bílá buničina je organizována do zón T buněk a folikulů B buněk, což usnadňuje interakce mezi antigenem - buňkami a lymfocyty. Díky této jedinečné architektuře je splenocyty (SPL) výkonným nástrojem v imunologických testech, jako je elispot, průtoková cytometrie a smíšené reakce lymfocytů.

Druh - Specifické splenocyty (SPLS)

-Cynomolgus opice splenocyty:Splenocyty Monkey Cynomolgus se používají v předklinickém výzkumu, protože těsněji napodobují lidské imunitní odpovědi, takže Cynomolgus Monkey Splenocyty ideální pro translační studie.

-Splenocyty Monkey Rhesus:Splenocyty opic rhesus jsou podobně oceněny pro jejich blízké imunologické podobnosti s lidmi. Studie využívající splenocyty Rhesus Monkey pomáhají překlenout propast mezi zvířecími modely a klinickými aplikacemi.

-Psí splenocyty / psí splenocyty:Ve veterinárním výzkumu se psí splenocyty (nebo psí splenocyty) používají ke studiu imunitních poruch u psů a k vypracování srovnání s lidskými imunitními odpověďmi.

-Králičí splenocyty: Králičí splenocyty jsou důležité ve studiích o produkci protilátek a vývoji vakcíny. Králičí splenocyty pomáhají odhalit podrobnosti, které se mohou lišit od myších splenocytů nebo splenocytů potkanů.

-Splenocyty / myši myší splenocyty:Myší splenocyty jsou jedním z nejčastěji studovaných splenocytů (SPL) v imunologii. Protokoly pro izolační splenocyty od myší jsou dobře zavedeny a jak splenocyty myší, tak i myší splenocyty se používají pro průtokovou cytometrii, elispot a další funkční testy.

-Potkaní splenocyty:Splenocyty potkanů ​​poskytují komplementární model pro imunotoxikologické a vakcínové studie. Splenocyty potkanů ​​jsou často porovnány s myšími splenocyty, aby se pochopily mezidruhové rozdíly.

Izolace splenocytů

Izolace splenocytůje proces extrahování imunitních buněk ze sleziny, které se použijí v různých výzkumných aplikacích, jako je průtoková cytometrie, testy produkce cytokinů nebo smíšené reakce lymfocytů.

Sleen byla odstraněna za aseptických podmínek, uzemnění v izolačním roztoku a přenesena do sterilní trubice obsahující RPMI 1640 médium. Vrstva leukocytů byla po centrifugaci pečlivě shromážděna. Buňky byly promyty RPMI 1640 médiem, odstředěny a supernatantem vyřazeny. Tento promývací krok byl opakován 1 - 2krát předtím, než byly izolované buňky použity pro další experimenty.

Mrazivé splenocyty

Mrazivé splenocytyje klíčovým krokem pro zachování buněk pro budoucí použití. Kryokonzervace umožňuje vědcům ukládat splenocyty po delší dobu bez ohrožení jejich životaschopnosti nebo funkčnosti.

Supernatant dobře odstředěné suspenze buněk z kroku izolace je vyřazen a koncentrace buněk byla zředěna v mrazu. Do každé mrazivé trubice přidejte alikvot a přeneste do mrazivé nádoby, což zajišťuje, že buňky zůstanou v suspenzi. Rychle zamrznou mrazující nádoby v mrazáku - 80 ° C. Přeneste na - 150 ° C mrazicí nádoba (nebo kapalná dusík) po dlouhém skladování.

Rozmrazení splenocytů

Rozmrazení splenocytůPo kryokonzervaci musí být provedeno pečlivě, aby se zajistila vysoká životaschopnost a funkčnost buněk. Proces tání je obvykle rychlý, aby se minimalizoval škodlivé účinky tvorby DMSO a ledové krystaly.

Kryotube jsou přeneseny na vodní lázni 37 ° C a rozmrazeny, dokud v trubkách zůstaly jen jemné ledové krystaly. Přidejte 0,5 - 1 ml buněčného kultivačního média do zmrazené trubice, resuspendujte a přeneste suspenzi do 15 ml zkumavky naplněné buněčnému kultivačním médiu. Odstředění, odstraňte supernatant a klepnutím na trubku uvolněte uspořádání buněk. Přidejte 1 ml média buněčné kultivace, fouká a resuspendujte s pipetou, přidejte médium do objemu 15 ml. Centrifuge, DE - Supernatizujte, přidejte 1 ml buněčného kultivačního média a přidávejte médium podle očekávané koncentrace buněk. Umístěte buňky do inkubátoru CO2 a inkubujte po dobu 1 hodiny s mírnou mezerou ve víku. Na konci inkubace resuspendujte a nechte 1 minuty, aby se agregované buněčné zbytky vysrážely. Buněčná suspenze bez srážení byla pečlivě přenesena do nové 15 ml trubice. Buňky byly spočítány za účelem stanovení buněčné aktivity.

Závěr

Splenocyty, s jejich rozmanitým složením a klíčovou rolí v imunitních odpovědích, jsou neocenitelnými nástroji v imunologickém výzkumu. Ať už jsou odvozeny od hlodavců, primátů nebo jiných druhů, jako jsou králíci a psi, splenocyty usnadňují kritické studie imunitních funkcí, mechanismů onemocnění, vývoje vakcíny a imunoterapii rakoviny. Procesy izolace, mrazu a rozmrazování jsou nezbytné pro zachování jejich integrity a životaschopnosti, což vědcům umožňuje prozkoumat buněčnou dynamiku napříč různými modely. Jak se naše chápání imunologie prohlubuje, použití splenocytů bude i nadále nápomocné při překlenutí propasti mezi předklinickými studiemi a klinickými aplikacemi a zajišťuje pokrok v lidské i veterinární medicíně.