Splenocytter i immunologisk forskning: på tværs af arter og isolering, frysning, optøning af trin

Nøgleord:Splenocytter (SPL'er); Cynomolgus abe splenocytter; Rhesus abe splenocytter; Hundeplenocytter; Hundeplenocytter; Rotte splenocytter; Mussplenocytter; Mussplenocytter; Kaninsplenocytter; Splenocytter isolering; Frysning af splenocytter; Tøende splenocytter

IPhase -produkt

Splenocytter (SPLS)er en heterogen population af immunceller isoleret fra milten, et vigtigt organ involveret i filtrering af blod, montering af immunresponser og opretholdelse af homeostase. Disse celler inkluderer lymfocytter (T -celler, B -celler), makrofager, dendritiske celler og naturlige killer (NK) celler, som alle spiller kritiske roller i adaptiv og medfødt immunitet. Splenocytter er vidt brugt i præklinisk og translationel forskning til undersøgelse af immunfunktion, vaccineudvikling, autoimmune sygdomme og kræftimmunoterapi.

Rollen og sammensætningen af ​​splenocytter (SPLS)

Inden i milten bor splenocytter i forskellige regioner: den røde papirmasse, der filtrerer blod og genanvender gamle røde blodlegemer og den hvide papirmasse, hvor immunresponserne initieres. Den hvide papirmasse er organiseret i T -mobilzoner og B -cellefollikler, hvilket letter interaktioner mellem antigen - præsenterende celler og lymfocytter. Denne unikke arkitektur gør splenocytter (SPL'er) til et kraftfuldt værktøj i immunologiske assays, såsom ELISPOT, flowcytometri og blandede lymfocytreaktioner.

Arter - Specifikke splenocytter (SPLS)

-Cynomolgus Monkey Splenocytter:Cynomolgus -abe -splenocytter bruges i præklinisk forskning, fordi de mere nøje efterligner humane immunresponser, hvilket gør Cynomolgus abe -splenocytter ideelle til translationsundersøgelser.

-Rhesus abe splenocytter:Rhesus -abe -splenocytter værdsættes på lignende måde for deres nære immunologiske ligheder med mennesker. Undersøgelser, der bruger rhesus -abe -splenocytter, hjælper med at bygge bro mellem dyremodeller og kliniske anvendelser.

-Hundeplenocytter / hundeplenocytter:I veterinærforskning anvendes hundeplenocytter (eller hundeplenocytter) til at studere immunforstyrrelser i hjørnetænder og til at sammenligne sammenligninger med humane immunresponser.

-Kaninsplenocytter: Kaninsplenocytter er vigtige i undersøgelser af antistofproduktion og vaccineudvikling. Kaninsplenocytter hjælper med at afsløre detaljer, der kan variere fra museplenocytter eller rotteplenocytter.

-Mussplenocytter / mus splinocytter:Mussplenocytter er en af ​​de hyppigst studerede splenocytter (SPL'er) i immunologi. Protokoller til isoleringssplenocytter fra mus er veletablerede, og både museplenocytter og mus -splenocytter anvendes til flowcytometri, Elispot og andre funktionelle assays.

-Rotteplenocytter:Rotteplenocytter tilvejebringer en komplementær model til immunotoksikologi og vaccineundersøgelser. Rotteplenocytter sammenlignes ofte med museplenocytter for at forstå forskelle mellem intersperter.

Splenocytter isolering

Splenocytter isoleringer processen med at udtrække immunceller fra milten, der skal bruges i forskellige forskningsapplikationer, såsom flowcytometri, cytokinproduktionsassays eller blandede lymfocytreaktioner.

Milt blev fjernet under aseptiske forhold, malet isoleringsopløsning og overført til et sterilt rør indeholdende RPMI 1640 -medium. Leukocytlaget blev omhyggeligt opsamlet efter centrifugering. Cellerne blev vasket med RPMI 1640 -medium, centrifugeret og den supernatant, der blev kasseret. Dette vasketrin blev gentaget 1 - 2 gange før de isolerede celler blev anvendt til yderligere eksperimenter.

Frysende splenocytter

Frysende splenocytterer et afgørende trin for at bevare celler til fremtidig brug. Cryopreservation giver forskere mulighed for at opbevare splenocytter i længere perioder uden at gå på kompromis med deres levedygtighed eller funktionalitet.

Supernatanten af ​​den brøndcentrifugerede cellesuspension fra isoleringstrinnet kasseres, og cellekoncentrationen blev fortyndet i frysemediet. Tilsæt en portion til hvert frysningsrør og overfør til en frysebeholder, hvilket sikrer, at cellerne forbliver i ophæng. Frys hurtigt de frysebeholdere i en - 80 ° C fryser. Overfør til - 150 ° C frysercontainer (eller flydende nitrogenbeholder) i lang - termopbevaring.

Tøende splenocytter

Tøende splenocytterSkal udføres omhyggeligt for at sikre høj celleviabilitet og funktionalitet efter kryokonservering. Optøningsprocessen er typisk hurtig for at minimere de skadelige virkninger af DMSO og iskrystalldannelse.

Kryotubes overføres til et 37 ° C vandbad og optøes, indtil kun fin iskrystaller forblev i rørene. Tilsæt 0,5 - 1 ml cellekulturmedium til det frosne rør, resuspend og overfør suspensionen til et 15 ml rør fyldt med cellekulturmedium. Centrifuge, fjern supernatanten og tryk på røret for at løsne cellearrangementet. Tilsæt 1 ml cellekulturmedium, blæse og resuspend med en pipette, tilsæt medium til et volumen på 15 ml. Centrifuge, de - supernatize, tilsæt 1 ml cellekulturmedium, tilsætning af medium i henhold til forventet cellekoncentration. Placer cellerne i en CO2 -inkubator og inkuber i 1 timer med et let hul i låget. Ved afslutningen af ​​inkubationen skal du resuspend og forlade 1 min. For at lade det aggregerede celleaffald mulighed for at udfælde. Cellesuspensionen uden nedbør blev omhyggeligt overført til et nyt 15 ml rør. Celler blev talt for at bestemme celleaktivitet.

Konklusion

Splenocytter, med deres forskellige sammensætning og centrale rolle i immunresponser, er uvurderlige værktøjer i immunologisk forskning. Uanset om det er afledt af gnavere, primater eller andre arter som kaniner og hunde, splinocytter letter kritiske undersøgelser i immunfunktion, sygdomsmekanismer, vaccineudvikling og kræftimmunoterapi. Processerne med isolering, frysning og optøning er vigtige for at bevare deres integritet og levedygtighed, hvilket gør det muligt for forskere at udforske cellulær dynamik på tværs af forskellige modeller. Efterhånden som vores forståelse af immunologi uddybes, vil brugen af ​​splenocytter fortsat være medvirkende til at bygge bro mellem prækliniske studier og kliniske anvendelser, hvilket sikrer fremskridt i både human og veterinærmedicin.