G: Nola aukeratu behar ditut Mikrosoma eta Hepatozitoak Metaboliko Egonkortasun Ikasketetarako? Horietako bakarra aukeratu al dezaket eskakizuna betetzeko?
A: Egonkortasun metabolikoen azterketan, gibeleko mikrosomak edo hepatozitoak aukeratzea konposatuen propietate metabolikoen araberakoa da batez ere, tasa metaboliko handia duena aukeratzen da. Orokorrean, gibeleko mikrosomegiak nahiago dira, batez ere molekula konposatuak ur gehiago - disolbagarria eta bat - Metabolismoaren fasea bide metaboliko nagusia da (batez ere CYP bidez). Hepatozitoak bi fasean dauden faseak erabil daitezke. Bide metaboliko garrantzitsu gisa, hidrolisia bide metaboliko garrantzitsu gisa, gibeleko mikrosometan ez da gibeleko mikrosometan loteslea eta gibeleko mikroometan metabolismoa ez da agerikoa. Normalean, sistema metaboliko bat aukeratu daiteke beharrak asetzeko; Alderdi guztietan baldintzek ahalbidetzen badute, zalantzarik gabe hobe da bi sistemak aldi berean aukeratzea.
G: Zergatik da beharrezkoa entzima indukzioaren azterketarako hepatozito primarioak erabiltzea?
A: CYP Enzima - Induzitutako azterketa "transkripziotik", "itzulpena" itzulpena "bidali behar da" Post - Proteina aldatzea "CYP entzima proteina aktiboa lortzeko. Beraz, proba-sistemak gibeleko zelulak izan behar du, ez gibeleko mikrosomak edo gibela S9.
G: Zergatik aukeratu behar ditut hiru emaile hepatozito lehen hepatozitoak aukeratzeko entzimaren indukzioaren azterketarako?
A: Droga interakzioetarako jarraibideen aurkezpenaren arabera, gutxienez hiru emaile erabili behar dira eta emaile bakoitzaren indukzio-emaitza banan-banan ebaluatu behar da. Emaitza estatistikoki esanguratsuak sortzeaz gain, esperimentuaren hiru emaileen aukera ere garrantzitsuagoa da elkarrekintza banakako aldakuntza ebaluatzeko. Emaile batek gutxienez emaileak aurrez zehaztutako atalasea gainditzen badu, drogen hautagaia izan daiteke eta jarraipena egin dezake - ebaluazioa beharrezkoa da.
G: Zergatik bideratu CYP entzimaren indukzioan eta ez UGT entzimaren indukzioan?
A: Cypase indukzioa bideratzeko arrazoia da CYPASeko indukzioaren mekanismoa argiago ikasi dela. Beste modu batera esanda, Ugtase indukzioaren azterketa behar ez izatearen arrazoia da mekanismoa oraindik ez dagoela argi; Hala ere, horrek ez du esan nahi Ugtase ez dela eragingo. Jarraibideek ere adierazi dute ez dagoela sailkapen sistema normalizaturik, transporters eta II Fasearen metabolismoaren entzimak.
P: Zenbat denbora iraun dezake berpiztearen ondoren hepatozito primarioen atxikimenduak, eta zenbat denbora iraun dezake hepatozitoek berpiztu ondoren kultura atxikirik gabe?
A: Hepatokito primarioetako pasteurizatuak normalean entzimaren indukzio-azterketarako erabiltzen dira. Zelula berreskuratzeko ondoren, zelulak eten egiten dira plakaren hedapen-euskarrian, kontzentrazio egokiarekin egokitu eta kolagenoetan - estalitako plakak; Ondoren, zelulak 4 ~ 6 orduko epean pasteurizatu daitezke. Zelulak horman atxiki ondoren, mantentze-euskarria 18 h ordezkatzen eta mantentzen da, zelula estatua zaharberritzeko gehienez. Ondoren, entzima indukzioaren azterketa egin daiteke jarduera metabolikoa eta MRNA indukzio maila hautemateko. Ziklo osoaren ikuspegitik, hepatozitoak hormako atxikimenduaren ondoren 6 ~ 7 egunez mantendu daitezke. Denborak aurrera egin ahala, hormako horma atxikimendu egoerak okerrera egiten du eta zelulek bereizketa eta eten egingo dute.
Hepatokito atxikimenduak kulturatzen ez badira, egiaztatu dugu estatu onean mantendu daitezkeela 4 ~ 6 orduko epean. Oraindik ez dugu egiaztapenik egin epe luzeago batean.
P: Hepatozitoak esekidura eta atxikitako gelaxkak erabil daitezke erabilitako kulturaren komunikabide desberdinen arabera?
A: Ehun solido eta organo solidoetako zelula gehienak harresituta daude, baina ez dira zelula guztiak hortoz landuta daudenean - vitro. Zelulak hormak diren ala ez - atxikitzen edo ez zelulen egoeraren araberakoa; Aldi berean, hormak - Zelula atxikitzaileak kultura-euskarri espezifikoak behar dituzte eta pro - zelulen atxikimendu substantziak (adibidez, rhamnogelinogen, laminina, fibronektina, serum hedapen faktorea), zelulen eranskin prozesuan parte har dezakeena. Ondorioz, zelula atxikitzaileak esekidura-zelula gisa erabil daitezke, baina etetearen zelulak ez dira zertan erabilgarri dauden erabilerarako.
G: Zein dira abantailak / desabantailak ADHERENT Hormako bertsoak hepatozito esekidura erabiltzearen abantailak? Zein dira erabakiaren irizpideak?
A: Hepatozitoak isolatuta egon ondoren, esekiduran edo horma atxikitzailean kulturak izan daitezke. Zipestutako P450 en entzimaren jarduera hepatozito nagusienetatik koherenteena da lehenengo 4 ~ 6h-ren Vivo-rekin, eta gero azkar gutxitzen da denboraren luzapenarekin. Hori dela eta, hepatozitoen esekidura normalean egonkortasun metabolikoaren azterketa edo metabolito profilen azterketarako erabiltzen dira. Horma atxikitzaileetan kulturatutako hepatozito primarioek denbora nahikoa dute hepatozito normalen ezaugarri biologikoak eta jarduera metabolikoa mantentzeko kalteak berreskuratzeko. Hori dela eta, normalean entzima indukzio azterketarako, drogak zitotoxikotasun azterketetarako erabiltzen dira, drogak metabolizatzeko moteltasun moteltzeko egonkortasun metabolikoa edo produktuen inferentzia ikasketak egiteko.
Gaur egun, ez dugu web orriaren erosketa zerbitzua eskaintzen. Erosketa saskian gehitutako produktuak erregistratu ondoren eta saioa hasi ondoren soilik erreferentzia dira. Gure produktuak erosi behar badituzu, utzi zure harremanetarako informazioa gurekin harremanetan jarri eta zurekin harremanetan jarriko gara denboran gure zerbitzuak osatzeko.
G: Nola ez - Proteina Lotura Berariazko Aintziak proben emaitzetan?
A: Droga hautagaiak zehazki proteina mikroomaletara lotzen badu, horrek parametro zinetiko aldatuak ditu. Proteinen kontzentrazioa handitzen doan heinean, km-ko balioa handitzen da, eta ondorioz berezko baimena lortu da. Halaber, drogen hautagaia Mikrosotroetan proteinaetara lotzeak laborategi desberdinetako eta sistema desberdinetako emaitzen ondorioz aldakuntza handiak sor ditzake.
G: II Mikrosomiaren proteina gibeleko mikroomalaren kontzentrazioa II. fasearen edo fasearen egonkortasun-eskuliburuan.
A: Ez da lehenik mikrosoma hepatikoak diluitu behar; Kit-en mikroma hepatikoen kontzentrazioa 20 mg / ml da eta proba-sisteman muctomes hepatikoen azken kontzentrazioa 0,1 - 1 mg / ml da, proportzionalki erantsia daitekeena.
P: Zein da hepatozito primarioen egonkortasun metabolikoen probak egiteko gomendatutako zelula dentsitatea? Gibeleko kalkulua gibeleko mikrosomei dagokienez al da?
A: Hepatocyte Metabolikoen Egonkortasun Metabolikoarentzako gomendatutako zelulen dentsitatea 0,5 eta 2 × 10 da6 Zelulak / ml, eta garbiketa kalkuluak eta metabolikoen egonkortasun mikroomaliko hepatikoaren emaitzak izapidetzea koherentea da.
G: Zein dira zure PBS bufferraren osagai nagusiak? KCl eta Nacl dauka?
A: Gure PBS bufferraren osagai nagusiak k dira2Jups4 eta kg2PO4, eta kcl eta nacl libre daude.
G: Zein da fosfato bufferren xedea? Zergatik behar duzu fosfatoa?
A: Fosfato bufferrak ingurune fisiologikoa imitatzeko helburuarekin aukeratzen dira, eta fosfatoa gorputzaren ingurune fluidoa mantentzeko buffer bikote garrantzitsuenetakoa da.
G: Zein da entzimaren ohiko ezarpena - Induzitutako hartzailearen kontzentrazioa? Ba al dago soluziorik sistema probatu behar den disolbagarritasuna eskasa bada?
A: Entzimaren indukzioaren azterketak 3 kontzentrazio desberdin ezarri behar dira, kontzentrazio mailak gizakiengan odol drogen kontzentrazio eraginkorra estali behar du eta kontzentrazio handiena gizakien odol drogen kontzentrazio eraginkorra baino handiagoa da gutxienez gizakien odol drogen kontzentrazio eraginkorra baino handiagoa izatea. Fase akuosoko disolbagarritasuna eskasa bada, disolbatzaile organikoa aukeratu daiteke disolbatzaile gisa, adibidez. DMSO, baina sistemari gehitutako disolbatzaile organikoaren zenbatekoa kontrolatu behar da.
P: Egonkortasun metabolikoko azterketetan, beharrezkoa al da bi proba sistemak, gibeleko mikrosomak eta hepatozito primarioak erabiltzea probatzeko?
A: Mikrosoma hepatikoak mintz-besikula ia esferikoak dira. Homogeneizazioan eta ehun hematikoen zentrifugazioan lortutako reticulum endoplasmiko zatikatuaren fusioa da. Hepatokito primarioak (PHCS) hepatozitoak berehala kulturatutako hepatozitoak dira, animalien likidazioen ondoren, funtsean gibeleko funtzio metabolikoak mantentzen dituztenak, batez ere Vivo-rekin koherenteak diren entzimaren maila hobeto mantentzen baitute. Egonkortasun metabolikoaren azterketan, ez da kostua kontuan hartu beharrik, eta bi proba sistemak aldi berean aukeratu daitezke; Edo proba sistema egokia konposatuaren propietate metabolikoen arabera hauta daiteke, eta printzipioa da sistema metaboliko altua hautatzen dela. Orokorrean, gibeleko mikrosomegiak dira aukerarik onena molekula konposatuak ur gehiago - disolbagarria eta bat - Fasearen metabolismoa bide metaboliko nagusia da (batez ere CYP bidez); Bi - Metabolismoaren fasea da, hidrolisia bide metaboliko nagusia da, ez - gibeleko mikroometan ez da proteina berariazko lotura oso handia da, eta metabolismoa ez da gibeleko mikrosometan agerikoa, proba hepatozito primarioak erabiliz egin daiteke proba.
G: Metabolikoen Egonkortasun Proban aztertutako mikrosomen kontzentrazioa al da? Zein da altua edo baxua?
A: Egonkortasun metabolikoaren proban, proteinen kontzentrazioak tasa metabolikoan ere eragina izango du. Normalean, 0,1 mg / ml ~ 1 mg / ml-ko proteina mikrosomikoaren kontzentrazioa aukeratu, konposatuen propietate metaboliko propioak aukeratu behar duen proteina-kontzentrazioaren aukera zehatza. Proteina mikrosomikoen kontzentrazio handiegiak ez dira proteina mikrosomikoari drogak lotesle espezifikoak; Proteina mikroomalen kontzentrazio baxua izan arren, drogaren metabolismo hutsala sor dezake.